Este proyecto tiene como objetivo general evaluar el efecto de la suplementación dietaria con WGPE en un modelo experimental de síndrome metabólico en ratas, observando la variabilidad en marcadores inflamatorios celulares y humorales circulantes, así como aquéllos expresados por el tejido adiposo y cardiovascular.

Objetivos Específicos

Objetivo 1- Evaluar los efectos de la dieta suplementada con WGPE en los modelos de SM, asociados o no a hipertensión de causa genética, sobre marcadores de inflamación sistémico y en el tejido adiposo. Dentro de este esquema, se ensayarán dietas suplementadas con extractos de polifenoles de orujo en un modelo experimental de SM inducido por la administración en la dieta de grasa y fructosa (High-fat-fructose diet HFFD), y se evaluará:

1.1. Ganancia de peso, presión arterial sistólica a lo largo del protocolo y variables metabólicas asociadas al síndrome metabólico (perfil lipídico, glucemia, insulinemia, ácidos grasos libres).

1.2. La morfología del tejido adiposo en cortes histológicos de tejido adiposo visceral, subcutáneo y perivascular.

1.3. La actividad de la NAD(P)H oxidasa y la expresión de su subunidad NOX4, visfatina y CD68, éste ultimo como marcador de macrófagos en tejido adiposo visceral y perivascular por western blot y/o inmunohistoquímica.

1.4. La angiogénesis en tejido adiposo, para ello se examinará la expresión del factor de crecimiento de endotelio vascular (VEGF) y su receptor (VEGFR2), metaloproteinasas de matriz (MMP) y vías de señalización intracelular con efectos angiogénicos: NF-B, PI3-K/Akt, ERK1/2, PPAR.

Objetivo 2– Evaluar en una línea celular de preadipocitos 3T3-L1 la capacidad de los extractos de polifenoles sobre:

2.1. La activación de NOX inducida por TNFα o por palmitato. Para ello, las células se incubarán en presencia de TNFα o palmitato y en ausencia o presencia de WGPE, donde se evaluarán variables que indiquen:

a) la actividad y la expresión de NOX4 por western blot

b) el estrés oxidativo y la activación de NF-kB. La producción de especies reactivas del oxíageno (ROS)/especies reactivas del nitrógeno (RNS) será  medida por moscroscopía de fluorescencia y bioquímicamente con la prueba 2,7-diclorodihidrofluoresceina diacetato (DCDHF) y NF-kB, en fracciones nucleares por ensayo de movilidad electroforética (EMSA).

2.2. La diferenciación de adipocitos y  la expresión de proteínas involucradas en la angiogénesis como VEGF, el receptor de VEGF, PPARgamma, PI3-AKT, ERK1/2, NF-kB, adiponectina por western blot y PPARgamma y NF-kB, en fracciones nucleares por EMSA.

A pesar del aumento del conocimiento del SM, su prevalencia permanece en ascenso, probablemente por el cambio en los hábitos dietarios principalmente debido al aumento del consumo de azúcares simples y grasas saturadas. Si bien se reconoce la participación del estrés oxidativo y la inflamación como mecanismos generales involucrados en el aumento del riesgo, no están completamente dilucidados los pasos intermedios ni los tejidos, células y mediadores involucrados. Por otro lado, el tejido adiposo visceral ha cobrado un rol muy importante en el desarrollo de SM. Adipocitos y células inflamatorias vecinas producen una variedad de moléculas biológicamente activas: adipocitoquinas. Estos mediadores son liberados desde el tejido adiposo y fácilmente fluyen hacia la circulación sistémica. Se sabe que la desregulación en la producción de las adipocitoquinas se relaciona con las complicaciones asociadas al SM. Se ha postulado que el tejido adiposo blanco tendría un rol parácrino en la regulación de la función cardiovascular. Los mecanismos por los cuales la acumulación de tejido adiposo principalmente de tipo visceral, lleva a la desregulación de la secreción de adipocitoquinas no está bien esclarecido. Los factores dietarios cumplen un rol muy importante tanto en la prevención como en el desarrollo de enfermedades. Estudios epidemiológicos han demostrado una relación inversa entre dietas ricas en vegetales y riesgo de mortalidad por enfermedad cardiovascular. Estos alimentos se caracterizan por el alto contenido en fitoquímicos con propiedades benéficas para la salud cardiovascular. Hemos publicado varios artículos que demuestran estas propiedades. La utilización eficiente, de bajo costo y ambientalmente racional de los subproductos de la industria agroalimentaria es de una importancia indiscutible. El orujo constituye un residuo de la industria vitivinícola que contiene altas concentraciones relativas de compuestos fenólicos debido a baja extracción durante la vinificación. El desarrollo de este extracto como un agente fitofarmacológico constituye un avance biotecnológico local y las pruebas realizadas en los modelos experimentales animales permiten el estudio pre-clínico de su eficacia en el tratamiento de esta patología.

Este proyecto tiene como objetivo general evaluar el efecto de la suplementación dietaria con un extracto de polifenoles de orujo del   vino (WGPE), en un modelo experimental de síndrome metabólico en ratas, observando la variabilidad en marcadores inflamatorios celulares y humorales circulantes, así como aquéllos expresados por el tejido adiposo y cardiovascular. En el síndrome metabólico confluyen una serie de mecanismos que tienen como base reconocida a la resistencia a la insulina, pero que fisiopatológicamente involucran la activación de señales pro-inflamatorias desencadenadas por el aumento de estrés oxidativo. En este contexto, se postula que la administración de un extracto polifenólico obtenido a partir de los residuos de la vinificación es capaz de revertir o prevenir estos procesos inflamatorios, así como sus consecuencias estructurales y funcionales cardiovasculares. Se evaluarán los efectos de la dieta suplementada con WGPE en un modelo de síndrome metabólico inducido por dieta alta en grasa y fructosa, sobre marcadores de inflamación sistémico y en el tejido adiposo, morfología del tejido adiposo en cortes histológicos de tejido adiposo visceral, subcutáneo y perivascular, actividad de la NAD(P)H oxidasa y la expresión de su subunidad NOX4, visfatina, adiponectina, resistina y TNFα, en tejido adiposo visceral por western blot y/o inmunohistoquímica. Con el fin de evaluar el grado de angiogénesis, inflamación y expansión del tejido adiposo que acompañan al progreso de la patología se estudiará la expresión del factor de crecimiento de endotelio vascular y su receptor y vías de señalización intracelular con efectos angiogénicos. El grupo cuenta con valiosos antecedentes en la temática. El desarrollo de este extracto como un agente fitofarmacológico constituye un avance biotecnológico local y las pruebas realizadas en los modelos experimentales animales permiten el estudio pre-clínico de su eficacia en el tratamiento de esta patología.

Los resultados de este proyecto tendrían un alto impacto economico-social. Las patologías seleccionadas participan en alto grado en la problemática de la salud de la población. El SM presenta una elevada prevalencia en adultos. Estos niveles de prevalencia tienden a aumentar a medida que se incrementa la expectativa de vida como consecuencia de los avances en la medicina.

La transferencia de los resultados queda asegurada porque la mayor parte de los integrantes del grupo responsable son docentes-investigadores en la carrera de Medicina y en los posgrados de Doctorado en Ciencias Biológicas y el Doctorado en Medicina de la UNCUYO, lo que permite la transferencia de conocimiento que se puede generar a partir de la experiencia adquirida en el trabajo de investigación en los temas propuestos, y porque son miembros de sociedades científicas nacionales e internacionales relacionadas con la temática planteada, con activa participación mediante comunicaciones o publicaciones.

Por otra parte, debe destacarse que nuestra región se caracteriza por la producción de alimentos con alto contenido de antioxidantes, por lo que estos aportes científicos pueden brindar además, el soporte básico para la promoción de las industrias agroalimentarias locales.

The project intend to evaluate the effect of dietary supplementation with wine grape polyphenol extract (WGPE)  in an experimental model of metabolic syndrome in rats, noting the variability in cellular and humoral inflammatory markers circulating as well as those expressed by adipose and cardiovascular tissue. Metabolic syndrome converge in a number of mechanisms which are based on known to insulin resistance , but involve pathophysiological activation of pro-inflammatory signals triggered by increased oxidative stress. In this context, it is postulated that administration of a polyphenolic extract derived from winemaking residues is able to reverse or prevent inflammatory processes, as well as its consequences on cardiovascular structure and function. An evaluation of the effects of diet supplemented with WGPE in a model of metabolic syndrome induced by high fat diet and fructose on markers of systemic inflammation, morphology in histological sections of visceral, subcutaneous and perivascular adipose tissue, activity of NAD(P)H oxidase and its subunit NOX4 expression, visfatin, adiponectin, resistin and TNF-alpha in visceral adipose tissue by western blot and/or immunohistochemistry . In order to assess the degree of angiogenesis, inflammation and adipose tissue expansion accompanying the progress of the pathology study the expression of growth factor and vascular endothelial receptor and intracellular signaling pathways and angiogenic effects . The group has valuable information on the topic. The development of this extract as a phytopharmacological agent constitutes an advance in local biotechnology. Its test on experimental animal models allows the study of pre- clinical efficacy in the treatment of this pathology.

Planteamos dos objetivos específicos en esta solicitud:
Objetivo específico 1: valernos de His₆-TAT-Rab27A (“Formulación y Fundamentación del Problema a Investigar, i) para caracterizar las vías de transducción de señales relacionadas a Rabs 27 en espermatozoides vivos y mótiles
• Hipótesis: His₆-TAT-Rab27A penetrará en espermatozoides vivos y mótiles. Incubaremos espermatozoides humanos con esta Rab27A modificada expresada en E.coli y purificada por afinidad en Ni-NTA-agarosa. A continuación trataremos la suspensión de células con tripsina y evaluaremos la incorporación de His₆-TAT-Rab27A a las células por inmunofluorescencia indirecta y western blot con anticuerpos anti-His₆. Si la proteína ingresa será inmunodetectada, si no lo hace, será degradada por la tripsina y no la podremos detectar. La viabilidad la estimaremos con el colorante supravital ioduro de propidio y la motilidad por videomicroscopía, en ambos casos comparando con controles sin tratar.
• Hipótesis: Rab27A recombinante induce la RA en espermatozoides permeabilizados con SLO; His₆-TAT-Rab27A la inducirá en espermatozoides sin permeabilizar. Analizaremos el comportamiento en un ensayo funcional de His₆-TAT-Rab27A geranil-gernilada o no, cargada con GTP-γ-S o GDP-β-S, solas o combinadas con otros inductores de la RA. Realizaremos curvas de concentración y tiempo.
• Hipótesis: Rab27A necesita la maquinaria de fusión conservada para inducir la RA. a) Investigaremos si Rab3 endógena se activa al tratar con la versión de His₆-TAT-Rab27A que induzca la RA. Para ver la activación de Rab3 utilizaremos el ensayo de far-inmunofluorescencia mencionado en “Formulación y Fundamentación del Problema a Investigar, ii”. b) Investigaremos si His₆-TAT-Rab27A isoprenilada y activa conduce al desensamble de complejos cis SNAREs. Las proteínas SNAREs desensambladas, se vuelven sensibles a toxinas botulínicas y tetánica. Determinaremos esta sensibilización en ensayos funcionales y por inmunofluorescencia indirecta con anticuerpos anti-SNAREs. Pensamos que His₆-TAT-Rab27A isoprenilada y activa disminuirá la proporción de espermatozoides con SNAREs intactas en la región acrosomal luego de tratar con neurotoxinas. c) Investigaremos cómo influye His₆-TAT-Rab27A en el estado de activación de Rap. Para ver la activación de Rap utilizaremos el ensayo de far-inmunofluorescencia mencionado en “Formulación y Fundamentación del Problema a Investigar, ii”. Pensamos que His₆-TAT-Rab27A isoprenilada y activa aumentará la proporción de espermatozoides con Rap-GTP en la región acrosomal.
Objetivo específico 2: caracterizar en detalle las vías de transducción de señales relacionadas a Rabs3 y 27 en espermatozoides, sus guanine nucleotide exchange factors (GEFs) y efectores.
• Hipótesis: RAB3IL1 es un GEF para Rab3 que opera durante la RA. Hay escasísima literatura respecto a quiénes son los GEFs para Rab3 y menos aún sobre cómo se regulan. Iniciaremos nuestra búsqueda con RAB3IL1 porque es el único GEF hallado hasta la fecha en un proteoma de células germinales (1). Para investigar la presencia y localización de RAB3IL1 en espermatozoides humanos usaremos un anticuerpo específico (Aviva Systems Biology) para inmunodetección en western blots e inmunofluorescencia indirecta. Para averiguar si RAB3IL1 se necesita durante la RA introduciremos el anticuerpo en espermatozoides permeabilizados con SLO antes de inducir la exocitosis. Si el anticuerpo resulta ser bloqueante de función, caracterizaremos en detalle la etapa donde se requiere el Rab3-GEF. Si logramos demostrar que RAB3IL1 es el GEF para Rab3 en espermatozoides trataremos de obtener la proteína recombinante para realizar estudios in vitro y funcionales. Si este anticuerpo impide completamente la activación de Rab3 en la región acrosomal medida como en “Formulación y Fundamentación del Problema a Investigar, ii”, tendremos la prueba concluyente de que RAB3IL1 es efectivamente el GEF para Rab3 en espermatozoides.
• Hipótesis: RAB3IL1 queda retenido en la columna de Rab27-GTP. Analizaremos las proteínas espermáticas retenidas en columnas de Rab27-GTP (2) por western blot con anticuerpos anti-RAB3IL1.
• Hipótesis: Rab27A recombinante estimula o recluta un GEF para Rab3 en espermatozoides permeabilizados con SLO (2); His₆-TAT-Rab27A lo hará en espermatozoides sin permeabilizar. Aplicaremos el método de far-inmonofluorescencia descripto en “Formulación y Fundamentación del Problema a Investigar, ii”. Investigaremos la influencia de la geranilgeranilación y del tipo de nucleótido de guanina unido a His₆-TAT-Rab27A sobre su capacidad de activar Rab3 endógena.
• Hipótesis: las proteínas accesorias GDI y Rabfilina3a tienen un rol esencial durante la RA. Caracterizaremos en detalle su rol por medio de abordajes bioquímicos y ensayos funcionales como resumimos anteriormente para RAB3IL1. Probaremos las muestras de proteínas espermáticas retenidas en columnas de Rab27-GTP y Rab3A-GTP con anticuerpos anti-Rabfilina3A (Synaptic Systems); compararemos los resultados con los obtenidos con columnas de Rab27A-GDP y Rab3A-GDP.
• Hipótesis: la deplecion de AMPc por His₆-R-esponja impide la activación de las proteínas Rab27, Rab3A y Rap. Aplicaremos el método de far-inmonofluorescencia descripto en “Formulación y Fundamentación del Problema a Investigar, ii”.  El AMPc es un segundo mensajero crucial para la RA que ejerce sus funciones a través de su molécula blanco Epac (3). La estimulación directa de Epac con un análogo selectivo del AMPc provoca la activación de Rap (4) y Rab3 (2;4) medidas por pull down. Aquí queremos hilar más fino y determinar cómo la depleción del AMPc endógeno afecta la activación de estas GTPasas y también el de Rab27.

Referencias
    1.     Chauvin, T., Xie, F., Liu, T., Nicora, C. D., Yang, F., Camp, D. G., Smith, R. D., and Roberts, K. P. (2012) Biol Reprod. 87, 141
    2.     Bustos, M. A., Lucchesi, O., Ruete, M. C., Mayorga, L. S., and Tomes, C. N. (2012) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 109, E2057-E2066
    3.     Branham, M. T., Mayorga, L. S., and Tomes, C. N. (2006) J. Biol. Chem. 281, 8656-8666
    4.     Branham, M. T., Bustos, M. A., De Blas, G. A., Rehmann, H., Zarelli, V. E., Trevino, C. L., Darszon, A., Mayorga, L. S., and Tomes, C. N. (2009) J. Biol. Chem. 284, 24825-24839

Desde el punto de vista científico, esperamos demostrar la veracidad de las hipótesis formuladas. Por ejemplo dentro del OE1, esperamos que His₆-TAT-Rab27A penetre en los espermatozoides, no les afecte la viabilidad ni la motilidad e induzca la RA solamente cuando esté geranilgeranilada y cargada con GTP o GTP-γ-S. Esperamos que requiera Rab3 endógena activa y que desensamble complejos cis SNARE. Dentro del OE2 esperamos que RAB3IL1 sea efectivamente el GEF para Rab3 relevante para la RA y que quede retenido en columnas de Rab27A-GTP (podemos agregar que también en una de Rab3A-GDP) pero no de Rab27A-GDP. El mismo comportamiento de unión a Rab27A inmovilizada esperamos para Rabfilina3A. El proyecto ofrecerá oportunidades para la formación de recursos humanos, tanto en el entrenamiento de becarios e investigadores, como en la concreción de la tesis doctoral de Ornella Lucchesi y el avance de la de la Bioqca María Florencia Quevedo. El proyecto contribuirá al perfeccionamiento de los Dres Matías Bustos y MC Ruete y a la consolidación de la última como investigadora dentro de la Institución. Confiamos en que esto se refleje en un enriquecimiento de la capacidad y ampliación en los horizontes de la investigación local. En este contexto, el impacto de este proyecto será alto, permitiendo la implantación de nuevos abordajes para encarar el avance de los proyectos actualmente en curso y futuros. Nuestro modelo permite no sólo entender aspectos fundamentales de la biología espermática sino también arrojar luz sobre rutas de señalización que si bien operan en una variedad de células exocíticas, son difíciles de desentrañar cuando la exocitosis se superpone con otros fenómenos de transporte de membranas y donde las vesículas secretorias se dividen en pooles fisiológica, morfológica y cinéticamente heterogéneos. Asimismo, los conocimientos adquiridos se volcarán a la comunidad en tareas docentes.

La exocitosis es un mecanismo fundamental utilizado por prácticamente todas las células eucariotas para liberar una variedad de compuestos biológicos (por ejemplo hormonas peptídicas y neurotransmisores) y para insertar lípidos y proteínas en la membrana plasmática. La universalidad de los mecanismos que gobiernan la exocitosis permite simplificar nuestros modelos teóricos y concentrar nuestros esfuerzos en caracterizar modelos secretorios favorables. Nuestro modelo, la exocitosis del acrosoma, es ideal para el estudio de la secreción regulada porque sucede una sola vez en la vida del espermatozode y porque nos permite clarificar mecanismos muy difíciles de estudiar en tipos celulares secretorios con pooles heterogéneos de vesículas que se encuentran atravesando etapas exocíticas diversas. El objetivo de este proyecto es aplicar nuevas herramientas y estrategias para estudiar la regulación de componentes de la maquinaria de fusión en respuesta a señales. Utilizaremos sondas de actividad en el contexto de un ensayo recientemente desarrollado en nuestro laboratorio para determinar cambios en el estado de activación de las pequeñas GTPasas Rab3, Rab27 y Rap en respuesta a perturbaciones. Como los espermatozoides carecen de maquinaria de síntesis proteica, nuestro laboratorio ha desarrollado de dos técnicas que permiten superar esta limitación: la permeabilización controlada de la membrana plasmática con estreptolisina O y la incorporación de proteínas acopladas a péptidos permeables a células vivas; ambos serán aplicados durante el desarollo de este proyecto. Este último abordaje se está usando para transportar varias moléculas biológicamente activas al interior de células vivas, los péptidos permeables son herramientas promisorias para desarrollos médicos y biotecnológicos. Con estas nuevas herramientas y abordajes re-analizaremos conceptos establecidos y confiamos en poder descubrir nuevos sobre el rol del AMPc y de algunos miembros de la maquinaria de fusión de membranas en la biología espermática.

-Establecimiento de nuevas líneas de trabajo incorporando tecnologías de avanzada.
-Formación de recursos humanos: avance y/o finalización de tesis doctorales, consolidación de investigadores.
-Publicaciones: se espera volcar los resultados obtenidos en el desarrollo de este proyecto en al menos tres publicaciones en revistas internacionales con referato y mediano o alto índice de impacto.
-Comunicaciones a congresos nacionales e internacionales
-Enriquecimiento de capacidades docentes y transferencia hacia los estudiantes de la Facultad de Ciencias Médicas de la U.N. de Cuyo y los alumnos del PROBIOL, el posgrado en Biología de la UNCuyo
-Eventual transferencia de conocimientos para su aplicación en clínica médica y/o en especies de interés agropecuario, comercial y regional.

Exocytosis is a fundamental cellular process that is used by eukaryotic cells to release a variety of biological compounds such as peptide hormones and neurotransmitters and to insert specific lipids and proteins in the plasma membrane. The universality of mechanisms underlying exocytosis has greatly simplified our thinking and means that these need not be studied in detail in all cell types, but work can concentrate on the analysis of favorable secretory cell models. Ours is ideally suited for the study of regulated secretion because the one-time exocytotic event that subserves sperm's biological function allows us to clarify mechanisms that are very difficult to access in secreting cell types with heterogeneous vesicular pools traversing multiple exocytotic stages simultaneously. The goal of this proposal is to apply novel tools and strategies to assess regulatory changes in components of the fusion machinery in response to signals. We will use activity probes in the context of an assay recently developed in our laboratory to determine changes in the activation status of small GTPases (Rab3, Rab27 and Rap) in response to perturbations. Sperm lack the machinery to synthesize proteins; to overcome this limitation, our lab has pioneered two techniques: controlled plasma membrane permeabilization with streptolysin O and delivery of permeable proteins into living cells, both of which will be applied in the framework of this project. Molecular delivery based on cell-penetrating peptides is being used to transport various biologically active molecules inside living cells, and thus these peptides are considered promising devices for medical and biotechnological developments. Equipped with these new tools and strategies, we will revisit established concepts and, hopefully, unveil new ones about the role of cAMP and a few members of the fusion machinery in sperm biology.

OBJETIVO GENERAL

- Examinar prospectivamente la relación entre el síndrome metabólico, la sobrecarga de hierro y la tolerancia a la glucosa.

- Demostrar  una correlación entre valores de ferritina en los rangos más altos con el riesgo de deterioro de la tolerancia a la glucosa.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

-Evaluar la ferritina como parámetro diagnóstico de sobrecarga de hierro y de seguimiento en estos pacientes.

-Determinar si la sobrecarga de hierro es una variable independiente como factor de riesgo de deterioro de la tolerancia a la glucosa en pacientes con SM.

Hallar un riesgo superior de deterioro de la tolerancia a la glucosa en aquellos pacientes con síndrome metabólico y niveles de hierro aumentados.

•             Introducción

Niveles aumentados de las reservas de hierro por debajo de los niveles encontrados en la hemocromatosis, han sido implicados en la etiología de la diabetes tipo 2. Aunque los mecanismos que establecen la asociación entre las concentraciones de hierro y el desarrollo de diabetes aún no está bien establecido, se sabe que el hierro es un potente catalizador en la formación de radicales hidroxilo, los cuales podrían inicialmente contribuir a la insulino resistencia y posteriormente a la disminución de la secreción de insulina, lo que conduciría clínicamente a un deterioro de la tolerancia a la glucosa y en última instancia al desarrollo de diabetes tipo 2. Estos resultados han sido analizados en la población general, pero no se tienen datos precisos en pacientes con síndrome metabólico.

•             Objetivos

Demostrar  una correlación entre valores de ferritina en los rangos más altos con el riesgo de deterioro de la tolerancia a la glucosa en pacientes con síndrome metabólico.

• Hipótesis de trabajo

En pacientes con síndrome metabólico no diabéticos, el deterioro de la tolerancia a la glucosa se asocia con niveles aumentados de hierro.

•             Metodología

El proyecto se llevará a cabo en 2 fases consecutivas:

ESTUDIO PILOTO: Consiste en realizar un estudio transversal, donde se seleccionarán 50 pacientes con síndrome metabólico no diabéticos a los cuales se les medirá ferritina en sangre, analizando luego la prevalencia de los distintos valores obtenidos, con el objetivo único y final de definir la cantidad de pacientes que debemos incluir para nuestra segunda fase del proyecto.

SEGUNDA FASE: Se basa en un estudio longitudinal y prospectivo una vez acordado el N de pacientes a incluir dado que se distribuirá la muestra en diferentes subgrupos según los valores de ferritinemia hallados. A lo largo de 5 años de estudio se evaluarán  anualmente las variaciones de la tolerancia a la glucosa de estos pacientes.

•             Resultados esperados

Hallar un riesgo superior de deterioro de la tolerancia a la glucosa en aquellos pacientes con síndrome metabólico y niveles de hierro aumentados.

Se espera realizar una contribución a los profesionales de la salud y nutrición, alumnos, docentes, organismos gubernamentales, aportando datos que mejoren el conocimiento acerca de las implicancias de los niveles de hierro en pacientes con Síndrome Metabólico y el riesgo de desarrollar intolerancia a la glucosa o Diabetes.

Los resultados podrán ser volcados a la sociedad en su conjunto dado que si a futuro se logra demostrar esta asociación, ello podrá generar el inicio de estudios intervencionistas con el fin de plantear a futuro terapias quelantes del hierro para este tipo de pacientes con Síndrome Metabólico.

Por otra parte se verá beneficiada la Comunidad Científica en su conjunto, dado que los resultados obtenidos se presentarán en eventos científicos y publicaciones, entre otros.

Introduction:

Moderately elevated iron stores be-low the levels commonly associated with hemochromatosis have been implicated in the etiology of type 2 diabetes. Although a mechanism linking iron concentrations and diabetes is yet to be established, it is known that iron is a catalyst in the formation of hydroxyl radicals, which may contribute initially to insulin resistance, subse-quently to decreased insulin secretion, and ultimately to the development of type 2 diabetes. These results have been analyzed in the general population, but there is not  available information in patients with metabolic syndrome.

Objectives:

The aim of the study is to demonstrate a correlation between ferritin values ​​in the higher ranks with the risk of impaired glucose tolerance.

Methodology:

The project consists in two consecutive phases:

First phase: Ferritin levels will be measured to 50 no diabetic metabolic syndrome patients in a transversal study to analyze the different prevalence values, to define de amount of patients who will be included for the second phase.

Second phase: A prospective and longitudinal study with N patients to be included in the different ferritin levels subgroups founded. Across 5 years, there would be annual examinations to detect the variability of the impaired glucose between patients.

Expected results

To find a higher risk of impaired glucose tolerance between those patients with metabolic syndrome and elevated iron levels.

Estudiar en un modelo experimental de HTA, la expresión de WT-1 y principales mediadores involucrados en el proceso nefrogénico. Por otro lado, se evaluará el grado de compromiso que WT-1 pudiera tener sobre la nefrogénesis y sus consecuencias en el desarrollo de la HTA.

La concreción de los objetivos planteados nos permitiría sugerir un novedoso e inédito vínculo (posiblemente mecanístico regulatorio) de WT-1 sobre la alteración de procesos nefrogénicos y su relación con el desarrollo de la HTA. De ser así, se podría proponer que la desregulación en la expresión de WT-1 y sus consecuencias sobre la inducción de fibrosis y apoptosis, transición epitelial mesenquimatosa así como procesos de embriogénesis reversa, número y tamaño de glomérulos y elevación de la presión arterial; podrían ser determinantes en el conocimiento del desarrollo y mantenimiento de la hipertensión esencial.

La hipertensión arterial (HTA) es una condición médica considerada uno de los problemas más importantes de salud pública en países desarrollados, afectando a cerca de mil millones de personas a nivel mundial. Los factores contribuyentes más frecuentes incluyen: ambiente, ingesta de sodio, renina, resistencia a la insulina, apnea durante el sueño, edad y genética. Al respecto, se han estudiado más de 100 genes que pudieran estar involucrados. Aunque las bases genéticas de la enfermedad están firmemente establecidas y el desarrollo en el campo de la biología molecular y genética ha sido muy importante en los últimos años, el avance en el conocimiento de las alteraciones genéticas causantes de la HTA no ha sido plenamente esclarecido. De especial interés, el daño renal es un evento significativo en el propio desarrollo de la HTA y en tal sentido ha sido demostrado que la restricción de alimentos maternos altera la expresión génica fetal de factores de transcripción relevantes para la organogénesis renal como WT-1 y esto probablemente podría contribuir con el desarrollo de HTA. En tal sentido, las mutaciones heredadas en el gen WT-1 pueden conducir a HTA. Finalmente, no encontramos antecedentes de estudios que evalúen el proceso nefrogénico asociado con la expresión de WT-1 y desarrollo de HTA en el modelo de rata SHR. Por lo tanto, el presente proyecto propone estudiar en un modelo experimental de HTA, la expresión de WT-1 en el proceso nefrogénico asociado al desarrollo de la HTA así también como el correspondiente correlato anatomo-funcional.

Esperamos aportar información de relevancia sobre un proceso común a múltiples entidades patológicas como lo es la hipertensión, y de este modo contribuir con nuevos proyectos propios o de otros grupos de investigación a la hora de elaborar nuevas posibles estrategias terapéuticas. Los resultados, oportunamente comunicados y discutidos en reuniones científicas regionales, nacionales e internacionales, serán enviados a editoriales de revistas de la especialidad así como relacionadas a la especialidad, para su consideración a la publicación.

Hypertension is a medical condition considered one of the most important public health in developed countries, affecting nearly a billion people worldwide. The most common contributing factors include: environment, sodium intake, renin, insulin resistance, sleep apnea, age and genetics. In this regard, more than 100 genes may be involved. Although the genetic basis of the disease are firmly established and development in the field of molecular biology and genetics has been very important in recent years, progress in understanding the genetic causes of hypertension has not been fully elucidated. Of particular interest, kidney damage is a significant event in hypertension development and in this regard has been shown that maternal food restriction alters fetal gene expression of transcription factors relevant to the kidney organogenesis as WT-1 and this probably could contribute to the hypertension development. In addition, hereditary mutations in the WT-1 gene may lead to hypertension. Finally, there is no precedent of studies evaluating the nephrogenic process associated with the WT-1 expression and hypertension development in the SHR rat model. Therefore, this project proposes to study in an experimental model of hypertension, the WT-1 expression in the nephrogenic process associated with hypertension development as well as the corresponding anatomical-functional correlate.

This project attempts to show that the injury caused at cardiovascular level by inflammation, generates a secondary vascular changes called vascular remodeling. This morphological and pathophysiological changes can be prevented or reversed by different pharmacological therapeutic target to modulate the inflammatory response. Working in animal models that reproduce prevalent human diseases as hypertension and metabolic syndrome, is expected to assess the effect of such pharmacological interventions. The results have a high socio-economic impact of the prevalence of these diseases and the contribution to the knowledge of the mechanisms involved in producing the alterations and amendments through the administration of various pharmacological agents.

1) Estudiar el efecto del selenio sobre la caracterización fenotípica simil del gen HSR,  en ratas.

 2) Evaluar la vinculación entre  teluro y  selenio en la caracterización fenotípica simil gen HSR.

 3) Analizar los patrones de metilación del ADN en los cerebros de animales tratados con teluro y selenio por separado y conjuntamente.

Esta propuesta es una continuación del proyecto anterior aprobado por la SECYTP-UNCuyo. Por lo tanto, se espera confirmar las nuevas hipótesis planteadas por el análisis de los datos previos. Los resultados que se obtendrán de este proyecto permitirán esclarecer el mecanismo de uno de los procesos regulatorios más intrigantes que involucran al ADN con el entorno, especialmente relacionado con lo que se considera una función cerebral de reciente adquisición evolutiva: la lateralidad.

El mantenimiento de la homeostasis celular es regulado por mecanismos complejos. Uno de ellos, es la regulación de la expresión génica a través de procesos epigenéticos. La epigénesis es actualmente, reconocida como uno de los componentes más importantes en la regulación de la función génica y responsable de la preservación de los patrones de expresión de los genes para la diferenciación celular. Uno de los mecanismos epigenéticos mejor estudiado y caracterizado son los patrones de metilación del ADN. Los cambios epigenéticos en el ADN y la estructura de la cromatina son heredables pero característicamente se expresan de una manera dinámica. Durante la división celular la células conservan la marca epigenética pero al mismo tiempo, se ha demostrado que estas marcas pueden ser modificadas por factores ambientales.

En estudios realizados en nuestro laboratorio, niños de una determinada zona geográfica caracterizada por la abundancia de yacimientos minerales en la provincia de La Rioja, Argentina, presentaron alteraciones fenotípicas atribuidas a la expresión del gen HSR. Este gen ha sido asociado con la dominancia para el uso de la mano derecha, la asimetría cerebral, habilidades cognitivas relacionadas con la lecto-escritura y susceptibilidad a padecer esquizofrenia. El análisis del patrón de metilación del genoma de estos niños se mostró alterado respecto del control. Hemos considerado la hipótesis de que la regulación epigenética del gen HSR es modificada por influencias ambientales y que la abundancia de elementos traza podrían ser el factor exógeno involucrado en la alteración epigenética. Para corroborar esta hipótesis hemos diseñado un modelo animal en ratas, a quienes se les administró   un tratamiento con teluro en el agua de beber, cuya  dosis fue la misma que la hallada en las aguas analizadas en la provincia de La Rioja, dosis que se encuentra muy por debajo de la considerada tóxica. Se diseñaron también, pruebas conductuales que en su conjunto pueden ser extrapolables a la expresión del gen HSR en humanos. Las ratas tratadas mostraron alteraciones en estas pruebas conductuales. El estudio molecular  del ADN extraído de los hipocampos del cerebro de las ratas mostró alteración en la proporción de citosinas metiladas respecto de las citosinas no metiladas.

En el presente proyecto, continuando la línea de investigación queremos evaluar una nueva hipótesis. Dado que en nuestros resultados anteriores  el tratamiento con teluro produjo los cambios anteriormente descriptos, y tratándose de un elemento químico no esencial, proponemos que estos cambios se produjeron por el intercambio natural del teluro con el selenio, en la incorporación al organismo. Para confirmar esta hipótesis se analizarán los siguientes aspectos:

1. Confirmación del teluro como elemento químico causante de los cambios fenotípicos y moleculares encontrados.
2.  Tratamiento combinado con teluro y selenio y verificación de la expresión fenotípica analizada en trabajos previos (pruebas condcutuales).
3. Análisis del patrón de metilación del hipocampo de cerebros de los animales tratados.

Con estas aproximaciones se espera comprender el mecanismo por el cual el teluro es incorporado al organismo y es causante de  cambios en los mecanismos de regulación epigenética.

Este proyecto extiende en modelos animales los estudios de lateralidad efectuados en humanos, especialmente en aquellos mecanismos donde la lateralidad parece estar afectada y aparentemente relacionada con los elementos traza presentes en determinados hábitat comunes humanos. La transferencia y los posibles beneficiarios del conocimiento a obtener de este estudio, se encuentran en aquellas sociedades que habitan en estas regiones geográficas. Además, disciplinas como la Psicología, Psiquiatría, Seguridad Ambiental y Medicina Preventiva, también podrán beneficiarse de los resultados.

Maintenance of cell homeostasis is regulated by complex mechanisms. One of them is regulation of gene expression by epigenetic processes. At present, epigenesis is known as one of the main contributors to the regulation of gene function, preserving the expression patterns for cell differentiation. One of the epigenetic mechanisms well characterized is the DNA methylation patterns. Epigenetic changes in the DNA and chromatin structure are transmitted to the next generation but they are expressed in a dynamic form. During cell division, cells retain the epigenetic mark, but at the same time these marks can be modified by environmental signals.

Previously, our laboratory showed evidence that school children from La Rioja province, Argentina living in a determined geographical region, characterized by abundance of mineral mines, presented modifications in the phenotypic expression attributed to the HSR (Hand Skill Relative) gene. This gene has been involved with handedness, brain asymmetry, cognitive abilities related to reading-writing capacity and susceptibility to develop schizophrenia. Analysis of the DNA methylation pattern in these children was modified compared to control children. Hypothesis has been considered that the epigenetic regulation of the HSR gene was influenced by environmental factors such as the chemical trace elements present in the geographical region. In order to test this explanation, our laboratory designed lateralized behavioral tests in rats exposed to a chronic administration of Te at the same dose that found in the geographical region of La Rioja. Results showed that behavioral expression in these animals was altered in a close manner to that found in children. Molecular DNA patterns in selected brain regions of these animals also were modified in the same way.

Based on this evidence, the present project pretend to evaluate a alternate explanation. Considering that Te is not recognized as an essential element, it is possible that changes in behavioral expression and molecular DNA patterns are due to a natural interchange between Te and Se. In order to evaluate this hypothesis, the following objectives will be pursued:

1) Validation that Te is the chemical element causing the phenotypic and molecular changes found in previous investigations.

2) Evaluation that the combined treatment of Se and Te reverse the Te effects.

3) Examination of the DNA methylation patterns of animals under treatments in the hippocampal structure.

With these approaches it is expected to understand the complex molecular interactions by which Te might be exerting the epigenetic biological effects in organisms.

Se espera que el conocimiento a obtener de estos estudios permita aclarar en mayor detalle la influencia de los elementos traza en la salud.

It is to be expected that results will give a more complete picture about how trace elements can modulate some behavioral and molecular events in the brain of the rat.

Objetivo General: Determinar el rol de las proteínas ERM y proteínas asociadas, reguladoras del citoesqueleto de actina de células hospedadora, en la fagocitosis de Coxiella burnetii.    Objetivos Específicos

A- Estudiar la participación de las proteínas ERM y proteínas asociadas en la internalización de Coxiella burnetii a la célula hospedadora.

B- Estudiar la participación de las proteínas ERM y proteínas asociadas en la formación de la vacuola parasitófora donde reside Coxiella burnetii.

Por otro lado, este proyecto reafirmará la colaboración con otros grupos de trabajo, en particular con el grupo de María I. Colombo (IHEM-CONICET, FCM, UNCU) y del Dr. R. Heinzen (Rocky Mountain Laboratories, NIAID, NIH, Hamilton, MT, USA), y también permitirá consolidar la relación del IHEM-CONICET con la Fac. Cs. Médicas ya que no solo comparten el edificio y la infraestructura sino también la actividad científica y docente de grado y postgrado.

<span 11pt;="" line-height:="" 115%;="" font-family:="" arial,="" sans-serif;'="">En este proyecto están involucrados: dos Licenciados en Biología Molecular de la UN de San Luis (con Beca de CONICET) y un técnico de CONICET. Los resultados obtenidos serán difundidos a través de presentaciones en congresos nacionales e internacionales y publicaciones en revistas internacionales de primer nivel en el campo de la Biología Celular y la Microbiología

Patógenos, células apoptóticas y determinadas partículas nocivas para el organismo son eliminadas por fagocitosis, uno de los procesos fundamentales de la repuesta inmune innata. La formación de pseudópodos durante la fagocitosis para la internalización de aquellos materiales, está regulada por el citoesqueleto de actina cuya dinámica depende de proteínas tales como GTPasas de las familias Rho y Arf, N-WASP, Arp2/3, ERM (ezrina, radixina, moesina), cortactina y forminas. ERM funcionan como “linkers” entre la membrana plasmática y el citoesqueleto de actina participando en fagocitosis, pinocitosis y movimiento celular. Durante la invasión de ciertos patógenos, ERM participa en el remodelado del citoesqueleto de actina. ERM se asocian a fagosomas estimulando la nucleación de actina y fusión de membrana. Nosotros estamos estudiando la fagocitosis del patógeno intracelular obligado Coxiella burnetii. En la célula hospedadora, esta bacteria forma una vacuola grande denominada vacuola parasitófora (VP) que presenta características autofagolisosomales. En nuestro laboratorio, hemos observado que la VP recluta actina, Cdc42 y Rho A, y que dicha interacción regula la biogénesis de la VP. Nuestros objetivos pretenden caracterizar el rol de ERM y sus reguladores las GTPasas Rho y WASP, en la internalización de C. burnetii y biogénesis de la VP. Deseo mencionar que este proyecto es continuación del anterior. En este proyecto se utilizaran diferentes materiales, metodologías y equipamientos tales como: plásmidos, bacterias competentes y transformadas, líneas celulares, purificación de plásmidos, cultivo y transfección de líneas celulares, inmunofluorescencia, SDS-PAGE y Westernblot, incubadores para crecimiento bacteriano, sala de cultivo celular, flujos laminares, estufas de CO2, centrífugas y ultracentrífugas, y microscopios de fluorescencia, confocal y electrónico.

Los resultados de este proyecto serán transferidos a través de:

- publicaciones en revistas de nivel internacional

- comunicaciones a través de minisimposios y pósters en congresos nacionales e internacionales

- dictado de cursos de grado y post-grado

- conferencias o miniconferencias en Universidades del ámbito local y/o internacional

- intercambio de estudiantes a través de pasantías

El proyecto abre importantes posibilidades para la formación de recursos humanos, entrenamiento de alumnos de grado y post-grado, realización de tesinas de licenciatura y de tesis doctorales. 

Pathogens, apoptotic cells and specific particles dangerous for human health are eliminated by phagocytosis which is a main process of the innate immune responses. Pseudopodium formation during the internalization step of phagocytosis is produced by actin cytoskeleton remodeling regulated by several proteins such as the small GTPases Rho and Arf, N-WASP, Arp2/3, ERM (ezrin, radixin, moesin), cortactin and formins. ERM are linker between plasma membrane and actin cytoskeleton and play important roles in phagocytosis, pinocytosis and cell motility. During pathogen invasion, ERM proteins participate in actin cytoskeleton rearrangement. Interestingly, ERM proteins have been found associated to phagosomes stimulating actin nucleation and membrane fusion. We are studying the phagocytosis of intracellular pathogen Coxiella burnetii. In the host cells, these bacteria form a big vacuole, called parasitophorous vacuole (PV) which presents autophagolysosomal characteristics. In our laboratory we observed that the PV recruits actin and Rho GTPases, and these proteins regulate PV formation. Our main aim is to characterize the role of ERM proteins, and their regulators Rho GTPasas and WASP proteins, in internalization of C. burnetii and the biogenesis of PV. In this project we will use different materials, methodologies and equipments such as plasmids, competent and transformed bacteria, cell lines, plasmid purification, cell culture and cell line transfection, immunofluorescence, shakers to grow bacteria, tissue culture rooms, laminar flow hoods, CO2 incubators, centrifuges and ultracentrifuges, and fluorescence, confocal and electron microscopes.                                 

OBJETIVO GENERAL

La capacitación permite que el espermatozoide responda exocitando el contenido acrosomal ante estímulos fisiológico como la progesterona. Se postula que los espermatozoides humanos se capacitan en lotes, lo que hace que ante un estímulo no todos respondan sufriendo la reacción acrosomal. Lo normal es que solo un 20% a un 30% de espermatozoides respondan a un estímulo como la progesterona. Más allá de ello, hemos observado algo semejante utilizando un estímulo capaz de inicia la exocitosis en espermatozoides no capacitados. De acuerdo a nuestros datos preliminares, el número de espermatozoides reaccionados va incrementándose a lo largo de 60 minutos luego de aplicar un ionóforo de calcio como A23187. Pensamos que debe haber otros procesos además de la capacitación que regulan la reacción acrosomal ante estímulos como el ionóforo de calcio. Nuestro objetivo general es determinar cuáles son los mecanismos que gobiernan el inicio de la reacción acrosomal en una población de espermatozoides humanos

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Dado que nos interesa definir los mecanismos que hacen que no todos los espermatozoides reaccionen simultáneamente, nuestro primer objetivo será determinar utilizando métodos con alta resolución temporal la cinética de inicio de la reacción acrosomal en una población de espermatozoides humanos.

La reacción acrosomal es un proceso complejo en el que se activan varios mecanismos celulares y moleculares. No sabemos cuál etapa de la exocitosis es la que regula el inicio de la reacción acrosomal. En estudios previos hemos utilizado inhibidores reversibles del proceso. Esto nos ha permitido mapear diferentes etapas de la exocitosis acrosomal. Nuestro segundo objetivo será determinar qué etapa controla la iniciación de la exocitosis acrosomal.

El plan presentado apunta a dilucidar aspectos claves de la exocitosis acrosomal, cuyo conocimiento es necesario para el diseño racional y el control de procedimientos que afectan la fertilidad en seres humanos y en animales. Se espera que el mismo sirva para el desarrollo de la tesis doctoral de Cristian Pocognoni y de Claudia Sosa. Este proyecto colaborará en el desarrollo de técnicas aplicables a otros proyectos de investigación dentro de la Facultad de Ciencias Médicas.

La modulación de la reproducción en seres humanos y en animales es una práctica actualmente muy difundida en todo el mundo y en particular en Argentina y en Mendoza.  Basta ver lo común que es el uso de métodos de reproducción asistida en seres humanos y animales.  Sin embargo, los mecanismos moleculares involucrados en muchas de estas manipulaciones son todavía poco conocidos.  El plan presentado apunta a dilucidar aspectos claves de la exocitosis acrosomal en espermatozoides humanos.  En los últimos años nuestro laboratorio se ha abocado a la caracterización del mecanismo molecular que participa en este proceso exocítico.  Mediante el uso de espermatozoides permeabilizados y métodos complementarios hemos mostrado que la exocitosis acrosomal utiliza un complejo mecanismo de fusión de membranas donde juegan un rol fundamental diversos lípidos, flujos iónicos, y proteínas conservadas que también participan en la secreción en células neuroendócrinas. Recientemente hemos incorporado una serie de modelos experimentales que nos permiten seguir la exocitosis en tiempo real.  Nuestras observaciones muestran que no todos los espermatozoides sufren la reacción acrosomal en forma simultánea luego de la aplicación de un estímulo.  El objetivo general de este proyecto es estudiar los mecanismos celulares y moleculares que gobiernan el inicio de la reacción acrosomal en una población de espermatozoides. Buscaremos definir la cinética con que cada espermatozoide responde y los cambios que sufre entre que recibe el estímulo e inicia la exocitosis.  Nuestras expectativas son dilucidar aspectos de la reacción acrosomal que sean relevantes tanto para el campo de la fecundación como el de la exocitosis regulada.  Esperamos que estos conocimientos permitan el desarrollo de métodos racionales para regular la reproducción en seres humanos y animales.  Además, dado que la exocitosis es fundamental en diversos procesos fisiopatológicos, esperamos que nuestros resultados abran nuevas perspectivas para otros problemas asociados con la secreción en diversos tipos celulares.

Nuestro resultados serán relevantes para grupos trabajando en reproducción humana y animal. También para quienes trabajen en problemas asociados con secreción en células neuroendócrinas (diabetes, enfermedades neuronales, etc)

In the last few years, fertilization in breeding animals and in human beings has been extensively studied and manipulated to improve or prevent reproduction. These experimental procedures have had a strong impact in animal breeding and human fertility, and have been in the center of ethical and economical discussions in the society. However, the molecular mechanisms of fertilization are only partially understood. Among the several cellular processes involved, exocytosis is a key event for fertilization. Sperm must undergo acrosomal exocytosis to fertilize the egg. During the last thirteen years, our group has led the study of the molecular mechanisms of acrosome secretion in human sperm by using innovative methods and focusing in the membrane fusion event of exocytosis. We have developed a permeabilization protocol that allows us to challenge the exocytosis mechanism using recombinant proteins, antibodies, and neurotoxins. With the data obtained from these studies, we have unveiled a complex pathway that drives sperm exocytosis and involves conserved proteins that also participate in neuroendocrinal cell secretion, structural and signaling lipids, and ion fluxes. Recently we have incorporated experimental approaches to detect acrosomal exocytosis in living cells. We have observed that not all cells start exocytosis simultaneously after stimulation. Our aim is to unveil the cellular and molecular mechanisms governing the initiation of the acrosomal reaction. We will study the response kinetics for these cells and the relationship with changes in the sperm occurring after the stimulus and before the opening of fusion pores. We anticipate that this project will generate relevant new knowledge in the fertilization and exocytosis fields that will help to develop more rational approaches to regulate reproduction in breeding animals and human beings. In addition, since we will address problems that are crucial for understanding exocytosis in all secretory cells, we expect that our results will be relevant for many exocytosis-related health problems in humans and animals.

El objetivo general es detectar precozmente las mujeres embarazadas que tienen alto riesgo de desarrollar preeclampsia.

Los objetivos específicos son:

1) Incrementar el número de muestras del banco de muestras de sangre de mujeres que están  cursando un embarazo normal y de mujeres con preeclampsia.

2) Determinar en nuestras pacientes los marcadores séricos PP13 y HSP 27/B1, durante los dos primeros trimestres del embarazo.

3) Determinar si los marcadores dosados, en suero, son predictivos y se relacionan con la gravedad de la enfermedad.

Dado que la preeclampsia sigue siendo un problema con gran impacto en salud perinatal y causa directa de muerte materna, creemos que el principal resultado esperado es poder arribar a conclusiones representativas sobre la utilidad del dosaje de estos marcadores moleculares en el primer trimestre de la gestación adelantándonos al diagnóstico clínico de la enfermedad.

Este beneficio se reflejará en:

1- La predicción de la preeclampsia que originará una derivación oportuna de la paciente (beneficiario directo) de un centro de atención primaria a uno de alta complejidad, y alertará para brindar una mejor atención y tratamiento de las complicaciones, con disminución de las cifras de morbi-mortalidad Materno Perinatal.

2- La disminución del ingreso a las unidades de terapia intensiva de adulto y neonatales, como así también en el alta médica en tiempo y forma, que son los indicadores del oportuno trabajo y comunicación entre Atención Primaria y los Centros de mayor Complejidad en la predicción, prevención y tratamiento de las complicaciones de esta patología no esclarecida en su origen.

3- La reducción de los gastos que ocasionan los tratamientos y cuidados intensivos (Sistema de Salud: beneficiario indirecto).

El principal objetivo de esta investigación es la detección precoz de las pacientes embarazadas que tienen alto riesgo de desarrollar preeclampsia a través de la búsqueda de marcadores moleculares específicos. Si bien existen en la literatura múltiples trabajos sobre la capacidad que tienen algunos marcadores séricos de predecir la aparición de la enfermedad, nunca han sido utilizados en nuestro medio. Nuestro proyecto servirá para demostrar si la detección de PP13 (conocido) y  HSP27/HSPB1, poco conocido, es útil para detectar preeclampsia antes de las 20 semanas de gestación. Se determinarán en muestras de suero de pacientes cursando el primer y segundo trimestre gestacional por medio de la técnica de ELISA. La preeclampsia se caracteriza por la existencia de daño endotelial, por placentación anormal, que precede al diagnóstico clínico realizado en el 2do o 3er trimestre del embarazo causando alta morbimortalidad materno-perinatal. Estos marcadores iindican que el proceso de la implantación embrionaria es incorrecto y que, como consecuencia de ello se desarrollará la enfermedad.

Los resultados pretenden promover intervenciones costo-efectivas, replicables y seguras. O sea de impacto en la morbimortalidad materno perinatal, impacto social, innovadoras, eficientes (realizado con bajo costo), eficaces (replicables con idénticos resultados) y seguras.

Los resultados pretenden fortalecer los lazos entre la Atención Primaria y los Centros de Alta Complejidad a través de la referencia y contrarreferencia durante el embarazo y su impacto en los resultados perinatales.

Los resultados pretenden estimular el interés por el desarrollo de investigaciones beneficiosas y basadas en la evidencia como estrategia que contribuye a la reducción de la morbi-mortalidad materno perinatal.

The main objective of this research is the early detection of pregnant patients who are high risk of developing pre-eclampsia through the search of specific molecular markers. Although, there are multiple reports on the ability of some serum markers to predict the onset of the disease, they have never been used in our region. Our project will serve to demonstrate if PP13 and HSP27/HSPB1 detection is useful for detecting preeclampsia before 20 weeks of gestation. They will be determined in serum samples from patients attending the 1st and 2nd trimester gestational by ELISA technique. Pre-eclampsia is characterized by the existence of endothelial damage, abnormal placentation, which precedes the clinical diagnosis made in the 2nd or 3rd trimester of pregnancy causing high materno-perinatal morbi-mortality. These markers indicate that the process of embryo implantation is incorrect and consequently the disease will develop.

Objetivo Principal

Analizar el efecto de Losartan sobre expresión de la chaperona Hsp70 y la proteína ligasa CHIP y su participación en la regulación de la expresión de la subunidad Nox4 del complejo NAD(P)H-oxidasa; en cultivos primarios de células epiteliales de túbulos proximales (PTCs) derivados de animales espontáneamente hipertensos SHR y controles normotensos WKY tratados con Losartan y en cultivos silenciados para la expresión de Hsp70.

Objetivos Específicos

a- Demostrar la participación de la chaperona Hsp70 en la regulación de la expresión y actividad de la subunidad Nox4.  PTCs serán tratadas con Losartan y se evaluará la interacción  con Nox4 por por coimunoprecipitación e inmunofluorescencia y microscopía confocal. La actividad del complejo enzimático NADPH-oxidasa será determinada por luminometría indirecta a fin de determinar si Hsp70 participa en la regulación de la actividad de la oxidasa.

b- Corroborar la participación de la chaperona Hsp70 sobre la regulación de la expresión y actividad de la subunidad Nox4 por silenciamiento de su expresión. PTCs serán transfectadas con un plásmido que permite el knockdown en la expresión de Hsp70 y un vector control. Confirmado el silenciamiento por RT-PCR y WB, se evaluará la expresión de Nox4 y la actividad del complejo enzimático NADPH-oxidasa y el efecto del silenciamiento sobre la distribución e interacción proteica se analizará por coimunoprecipitación e inmunofluorescencia y microscopía confocal.

c- Demostrar que Hsp70, mediante el reclutamientote la ubiquitin ligasa CHIP, promueve  la degradación proteosómica de la subunidad Nox4 de NADPH.

Evidencias clínicas de los efectos producidos por la intervención farmacológica sobre el receptor AT₁ de Angiotensina II, permiten atribuir un rol fundamental a Angiotensina II intrarenal en la patogenia de la hipertensión arterial. Numerosos efectos de Angiotensina II/AT1R son dependientes de la producción de ROS estimulado por la activación de NADPH-oxidasa. Ha sido demostrado en células proximales tubulares de SHR el incremento de estrés oxidativo por efecto de NADPH-oxidasa. En esta condición H2O2 interviene en el transporte renal de iones contribuyendo a la retención de sodio en la hipertensión arterial. Es poco conocido el proceso que conduce a la activación de Nox4 en riñón, evidencias previas indican que Nox4 no requiere del ensamble con subunidades citosólicas y puede localizarse en componentes celulares, incluyendo las mitocondrias y el retículo endoplásmico en adición a la membrana plasmática. Demostramos previamente translocación e incremento de os niveles de Hsp70 a membrana e interacción niveles descendidos de la proteína Nox4 en presencia de Losartan en SHR. Estudiaremos si la disminución de expresión de Nox4 es por degradación proteosómica con participación de la co-chaperona de Hsp70, CHIP. Un mayor conocimiento específico sobre la fisiopatología y los mecanismos subyacentes al inicio y la progresión de patologías que conducen al desarrollo de insuficiencia renal crónica permite diagnósticos precoces y más certeros. Dado la participación de la lesión tubulointersticial en la progresión de la injuria renal, el estudio de mecanismos involucrados en la reducción del stress oxidativo en células tubulares por Losartan podría ser de interés en Nefrología clínica.

La expresión completa de la señalización del receptor AT₁R de Angiotensina II depende de las especies reactivas de oxígeno derivadas de NADPH oxidasa y de la dinámica asociación de AT₁R con caveolina/raft lipídicos. Las enzimas Nox incluidas en el dominio catalítico del complejo presentan diferentes mecanismos de regulación, el de Nox4 aun no es bien conocido; Nox4 se expresa en las células de túbulos proximales renales, se localiza en componentes celulares incluyendo las mitocondrias, retículo endoplásmico (RE) y las adhesiones focales de membrana. La respuesta al stress incluye la síntesis de Hsps, un rol Hsp70 en la modulación del citoesqueleto ha sido sugerido. Las funciones intracelulares de la chaperona Hsp70 incluyen su participación en el adecuado plegamiento de nuevas proteínas sintetizadas, asimismo proteínas sometidas a injuria podrían ser conducidas por Hsp a la degradación proteosómica. El sistema ubiquitina-proteosoma esta interrelacionado y regula en forma importante a la proteínas no plegadas del RE. Nox4 contribuye a la producción de H₂O₂ localizado en ER. CHIP ha ido recientemente descripto como un nexo entre la chaperona Hsp70 y la degradación proteosómica. El modelo genético de hipertensión arterial en ratas (SHR) está caracterizado por incremento del sistema RAS intrarenal y del stress oxidativo. Nos proponemos estudiar el efecto de la inhibición del receptor de AT₁ de Angiotensina II sobre la interacción de la chaperona Hsp70 y de Nox4 NADPH-oxidasa en la modulación del stress oxidativo mediante la conducción a la degradación proteosómica de Nox4. Realizaremos para tal fin el estudio de la interacción de Hsp70 con Nox4 por efecto de Losartan en cultivo primario de células epiteliales de túbulos proximales en SHR. Evaluaremos si Hsp70 interactuando con la cochaperona CHIP, induce la degradación de la proteína Nox4. Asimismo estudiaremos las vías de señalización MAP-Kinasas y GTPasas pequeñas probablemente involucradas en la interacción de las proteínas.

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Los resultados serán enviados a publicación a revistas de difusión internacional. Evidencias clínicas de los efectos producidos por la intervención farmacológica sobre el receptor AT1 de Angiotensina II, permiten atribuir un rol fundamental a Angiotensina II intra-renal en la patogenia de la hipertensión arterial y la injuria renal. Un mayor conocimiento específico sobre la fisiopatología y el estudio de mecanismos involucrados en la reducción del stress oxidativo en células tubulares por Losartan podrian constituir un aporte en el efecto citoprotector de Losartan en patología tubulointersticial. Los resultados obtenidos asimismo serán comunicados en reuniones nacionales de Nefrología y Nefrología Pediátrica.

Full expression of Angiotensin II signaling is dependent on the reactive oxygen species (ROS) derived from nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate NADPH oxidase and the dynamic association of the Angiotensin II Type I receptor (AT1 R) with caveolae/ lipid rafts. Among the membrane components of NADPH oxidase, Nox4 is expressed in proximal tubule epithelial cells, mitochondria, endoplasmic reticulum (ER and at focal adhesionsThe precise mechanism by which Nox4 is regulated in the kidney has not been determined. Induction of the stress response includes synthesis of heat shock proteins (HSPs).The cellular functions of Hsp70 include limiting protein aggregation, facilitating protein refolding and chaperoning proteins leading to improved cell survival. The ubiquitin-proteasome system  importantly regulates the the Unfolded Protein Response (UPR). Nox4 produces H2O2 and is thought to function primarily in cell signaling. Nox4 mediates oxidative inactivation of the ER- CHIP (Carboxyl terminus of the Hsc70-Interacting Protein) as the ubiquitin ligase that targets proteins for degradation by a recruitment of the molecular chaperone Hsp70. In the genetic model of rat hypertension SHR, increased intrarenal RAS and oxidative stress has been demonstrated.Here we will study Hsp70 interaction with Nox4 in SHR proximal tubule epithelial cell primary culture.We will evalute Hsp70/CHIP involvement in the Nox4 protein degradation. Participation of MAP-Kinases  and GTPasas signaling pathways will be studied in this protein interaction.

1. Determinar uso excesivo de ansiolíticos en la afiliación de DAMSU en 2012 y 2013 y compararla con lo detectado en 2002 y 2003.
2. Determinar subutilización de antidepresivos en la misma afiliación en 2012 y 2013 y compararla con lo detectado en 2002 y 2003.
3. Continuar con las medidas de prevalencia en la dispensación de todos los psicofármacos en los hospitales El Sauce y C. Pereyra para cuantificar avances en la racionalización de la prescripción.
4. Continuar con la determinación de la adherencia al tratamiento farmacológico de enfermedades crónicas.
5. Cuantificar la modalidad del consumo de drogas adictivas en estudiantes de la UNCuyo y, de acuerdo a los resultados, elaborar programas correctivos para cada Facultad.
6. Elaborar un programa de capacitación a distancia en Uso Racional de Medicamentos destinado a los usuarios.

Los resultados esperados han sido consignados en la Hipótesis de Trabajo.

Se continuará el proyecto 2011-13 sobre “Utilización de Psicofármacos en la Provincia de Mendoza y Adherencia al Tratamiento de Pacientes con Enfermedades Crónicas Prevalentes”.  En ese proyecto se avanzó en el análisis epidemiológico de la utilización de psicofármacos en la Provincia de Mendoza y se comprobó una falta de adherencia al tratamiento de hipertensión arterial (alrededor del 70 %) y de DM-II (alrededor del 50 %). El estudio presente será descriptivo, cuantitativo y retrospectivo y contempla: 1) analizar la dispensación (utilización) de ansiolíticos y antidepresivos en DAMSU en 2013 y 2014, para investigar la prevalencia de afiliados que abusan (ansiolíticos) o subutilizan (antidepresivos) estos fármacos en la Institución (alrededor de 25.000 afiliados). 2) Continuar con el análisis de adherencia al tratamiento de enfermedades crónicas, también en DAMSU, como un modelo extrapolable a otras instituciones prepagas de salud en la Provincia. 3) Actualizar y profundizar en 2014, nuestro análisis (2009-2010) sobre consumo de medicamentos y drogas de adicción por estudiantes de todas las Facultades de la UNCuyo instaladas en el Campo Universitario.

Los resultados serán transferidos mediante Informes Técnicos, a los Directores de los 2 Hospitales Neuropsiquiátricos y a la Obra Social involucrada. Estos resultados podrán ser utilizados por la Dirección de estas Instituciones, la Comisión de Medicamentos y las Directoras de las Farmacias de los Hospitales para regular las adquisiciones de medicamentos. Serán publicados en medios de comunicación masiva para contribuir a la educación pública en el uso de medicamentos. Por tratarse de una investigación fármacoclínica, los resultados serán presentados en Congresos y reuniones equivalentes y publicados en revistas nacionales e internacionales de la especialidad.

From 1992 up to date we have conducted epidemiological studies on drug use in Social Health Departaments, Hospitals and Health Care Centers of Mendoza, emphasizing use of psychotropic drugs, antihypertensive drugs and oral antidiabetic agents. Regarding psychotropic drug, the results of a 5 and 9 years follow-up study in DAMSU were published in 2006 and 2008. In this issue, progress in the period 2011-2013 were considerable but did not cover all the province because of an interruption of networking with the Mental Health Departament of the Province. In this project we intend to continue with a descriptive, quantitative and retrospective study on psychotropic drugs prescription in the 2 Neuropsychiatric Hospitals at Mendoza (El Sauce and C. Pereyra) and on the mode of use of anxiolytics and antidepressant drugs by the DAMSU`S affiliation during years 2012 and 2013. DAMSU, with about 25,000 affiliates, represents a useful model for this type of research, allowing extrapolation of results of overuse and underuse, and the number of members involved in that practice, to Social Health organizations in general.

2. In this project we are also proposing continuation of our study on patients compliance to drug treatments of chronic diseases by DAMSU`S affiliation. Our findings about prescription and real patients use of antihypertensive and oral antidiabetic drug are not equivalent in a high percentage of patients (about 77% in the former and 50% in the later). It seems, therefore, that continuing this research by introducing therapy for chronic diseases is needed. Drug use by out patients may be controlled at home by counting 'pills that rest and pills that dont'. Such method allows evaluation of patient compliance to any acute or chronic treatment. In our research, compliance to chronic treatments is one that can be properly evaluated. For this, we must identify patients and their chronic diseases, the prescribed drugs and the total of prescription orders/patients dispensed in the year at the Pharmacy. Comparison of the total mg/year dispensed to each patient with de DDDs/ year of the DURG of WHO will give us the information enough for statistic processing of compliance.

3. In the 2009-11 and 2011-13 Projects, we found by an exploratory inquest that a significant number of students from several School of UNCuyo used some drugs of addiction, in varying proportions from one to another School. In this project we will deepen this study by applying the Standardized Questionnaire - Version 2011 of the UTF (adapted for college students) in students of the first and last year of each career. This is to determine the influence of the University studies on drug consumption for quantitatively determining the amount of drug consumption. We will perform personal interviews to small group-work units to obtain collective opinions.

4. In this project we are proposing to develop a training program on rational drug use through a web page for student and general users.

El objetivo general del presente proyecto es: Caracterizar la actividad biológica de los extractos acuosos de P. strombulifera, T. absinthioides y G. decorticans sobre la línea celular de adenocarcinoma mamario humano MCF-7 y animales de laboratorio de la cepa Sprague Dowley.

Para su desarrollo, las actividades se organizaron de acuerdo a los siguientes objetivos específicos:

1. Describir las acciones citotóxicas de los extractos acuosos sobre la línea celular de adenocarcinoma mamario humano, MCF-7. El Avance del presente objetivo implica: 1a. Determinar cambios en la proliferación de las células tumorales inducidos por el tratamiento. 1b. Evidenciar  y caracterizar la capacidad del tratamiento de inducir muerte celular. 1c. Evaluar la toxicidad crónica inducida por los extractos.

2. Describir la capacidad de los extractos de inducir toxicidad in vivo sobre animales de laboratorio de la especie Sprague Dowley. El avance del presente objetivo implica: 2a. Estudiar los efectos de la exposición oral aguda (1 dosis: determinación de la DL₅₀). 2b. Analizar los efectos de la exposición oral subcrónica (28 dosis: determinación de efectos tóxicos generales y sistémicos).

3. Separar los principios activos presentes en los extractos y caracterizar sus propiedades antiproliferativas. 3a. Utilizar solventes orgánicos de diferentes polaridades y características químicas para la separación de principios activos a partir del extracto acuoso total. 3b. Realizar la caracterización físico-química de las fracciones químicas obtenidas (color, % de extracto seco, absorción espectrofotométrica, patrón de cristalización). 3c. Comparar la actividad biológica de las distintas fracciones químicas obtenidas sobre la proliferación de células MCF-7.

En caso de que la hipótesis planteada resulte confirmada, los resultados esperados incluyen la observación y cuantificación de alteraciones en la fisiología celular. En el caso de bajas dosis de tratamiento, esperamos encontrar interferencia en la proliferación celular. Además, esperamos observar muerte celular cuando la concentración de los compuestos sea elevada en el medio de cultivo desencadenada por apoptosis, necrosis o ambos mecanismos simultáneamente. En cuanto a la evaluación de la toxicidad a largo plazo, es esperable observar afectación de la clonogenicidad en aquellas concentraciones próximas a las dosis letales donde el balance entre el daño celular inducido por el tratamiento y los mecanismos de reparación celular determinen una disminución de la capacidad celular de adherirse al sustrato y proliferar. Se espera que los estudios de toxicidad in vitro resulten negativos o que induzcan sólo ligeros cambios; de forma tal que, la utilización de los extractos sea compatible con la homeostasis de los organismos completos. Finalmente, la caracterización bioquímica pretende colaborar con la identificación química de los compuestos responsables de la actividad biológica.

El cáncer es la segunda causa de muerte alrededor del mundo. La búsqueda de nuevos agentes terapéuticos resulta una necesidad urgente para mejorar el pronóstico y la tolerancia del tratamiento. La búsqueda de quimioterápicos entre los recursos naturales ha resultado una estrategia exitosa alrededor del mundo y son numerosos los agentes utilizados de origen natural (i.e. topotecan, taxanos., etc) Nuestro trabajo, se fundamenta en el estudio de las propiedades antitumorales de plantas autóctonas, con un reporte “folklórico” de actividad biológica. Los reportes de las propiedades terapéuticas son obtenidos principalmente en reportes de usos y costumbres Huarpes. Estudios preliminares de nuestro laboratorio, indicaron que los extractos  acuosos de Prosopis strombulifera, Tessaria absinthioides y Geoffroea decorticans poseen actividad citotóxica sobre la línea celular de cáncer colorrectal, HCT-116. El presente proyecto propone caracterizar la actividad biológica de los extractos sobre otra línea celular distinta, con diferente origen embriológico y carga genética, células MCF-7 de adenocarcinoma mamario. Además, se evaluará  la toxicidad de los compuestos sobre animales de laboratorio de la cepa Sprague Dawley en forma aguda (1 dosis) y subaguda (28 dosis). Finalmente, se comenzará con la etapa de fraccionamiento bioguiado, proceso mediante el cual distintos componentes de los extractos son separados por sus características químicas y se estudia su capacidad de inducir citotoxicidad. Mediante el avance del presente proyecto se pretende obtener un número acotado de compuestos químicos separados a partir de los extractos acuosos, indentificables analíticamente por estudios químicos, con actividad citotóxica sobre células tumorales y con escasa o nula toxicidad sobre modelos animales. El avance del proyecto pretende beneficiar a la comunidad científica mediante la generación de conocimiento relevante dentro del ámbito de la etnofarmacología; a la comunidad educativa, mediante la formación y promoción de alumnos y docentes integrantes del proyecto; además de brindar la posibilidad de vinculación tecnológica mediante el desarrollo y patentamiento de procedimientos y compuestos resultantes.

1. Los ámbitos propios de la transferencia de un proyecto de investigación básica son: (a) transferencia a la docencia de grado y postgrado (b) publicaciones en revistas de circulación internacional. (c) comunicaciones en jornadas y reuniones científicas. En el presente, nos proponemos ejercer la transferencia en todos estos ámbitos.

2. Se espera que este proyecto, alcance a los siguientes beneficiarios: (a) La comunidad científica: la descripción de principios activos en especies autóctonas resulta en la adquisición de conocimiento relacionados a la flora autóctona y que soporta sus aplicaciones etnofarmacológicas. (b) La comunidad educativa: La participación de docentes y alumnos en proyectos de investigación mejoran la calidad de la educación facilitando la interacción entre generación, difusión y adquisición de conocimiento. (c) La vinculación tecnológica: el desarrollo de este proyecto tiene una aplicabilidad concreta mediante la posibilidad de patentamiento de procedimientos y/o productos relacionados a la  actividad antiproliferativa de los extractos. (d) Los integrantes del proyecto: por tratarse de un grupo multidisciplinario con integrantes en distintas etapas de formación, el avance del proyecto influirá positivamente sobre el desarrollo personal y profesional de todos los intervinientes. 

Cancer is the second cause of death around the world. Research of new therapeutic agents is and urgent need to improve prognosis and treatment tolerance. Search of new quimiotherapeutics agents around natural sources results a successful strategy around the word and there are a large number of used agents of natural origin. Our work it is based in the study of antitumor properties of native plants, which have a “folkloric” register of their biological activity; mentioned information was obtained from traditional Huarpes´ reports. Preliminary studies of our laboratory indicate cytotoxic activity of crude aqueous extract of Prosopis strombulifera, Tessaria absinthioides and Geoffroea decorticans against colorrectal cancer cells, HCT-116. The present project proposal is to characterize biological activity of extracts against other cell line, MCF-7 human breast adenocarcinoma, which possess other embryological origin and genetic background. Moreover, acute (1 doses) and sub-acute (28 doses) toxicity against Sprague Dawley laboratory rats will be studied. Finally, a chemical separation of crude extract components will be performed according their chemical properties. Then, biological activity will be assessed. By the results of this project, we pretend to obtain a few number of compounds, able to be identified analytically by chemical studies, with cytotoxic effects against tumoral cell lines retaining no or less toxicity over animal models. The present project advance could represents benefits to scientific community, by relevant production of ethnoharmacology results; could beneficiate the educational community, by the formation and promotion of pupil and teachers which are included in the project; and finally, this project bring a chance of technologic link by development and patent of the proceedures and resulted compounds.

General

Identificar el consumo de ácidos grasos saturados, trans y poliinsaturados y su repercusión en el estado nutricional en mujeres embarazadas.

Objetivos Específicos

1. Evaluar la ingesta real de grasas saturadas, trans y poliinsaturadas en un grupo de mujeres embarazadas.

2. Determinar la proporción de ácidos grasos omega 3 y omega 6 en la alimentación de un grupo de mujeres embarazadas.

3. Determinar el contenido de ácidos grasos poliinsaturados y trans en plasma de un grupo de mujeres embarazadas.

4. Evaluar el impacto de la suplementación de ácido docosahexaenoico a través de un producto lácteo en plasma materno.

Los datos obtenidos del proyecto brindarán conocimientos sobre la ingesta real de ácidos grasos saturados, trans y poliinsaturados, a través de la valoración de la dieta habitual de la población y de este modo poder establecer el porcentaje de adecuación a las recomendaciones vigentes.

Además de poder conocer el estatus de dichos ácidos grasos y su relación con la ingesta alimentaria y plantear estrategias para mejorar la proporción de estos nutrientes, en post de la salud materno-fetal.

En los últimos años ha tomado relevancia el papel de los ácidos grasos en la gestación, principalmente los ácidos grasos poliinsaturados n-3 por su participación en el desarrollo neurológico y retiniano. Además, se sugiere que la ingesta inadecuada de estos ácidos grasos y el exceso de la serie n-6 pueden afectar el desarrollo del tejido adiposo en la infancia. La ingesta excesiva de grasas, de ácidos grasos poliinsaturados n-6 y de ácidos grasos trans puede interferir con la disponibilidad de los ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga para la embarazada y el feto. El objetivo general será identificar el consumo de ácidos grasos saturados, trans y poliinsaturados y su repercusión en el estado nutricional. Los objetivos específicos: 1) Evaluar la ingesta real de grasas saturadas, trans y poliinsaturadas en un grupo de mujeres embarazadas; 2) Determinar la proporción de ácidos grasos omega 3 y omega 6 en la alimentación de un grupo de mujeres embarazadas; 3) Determinar el contenido de ácidos grasos poliinsaturados y trans en plasma de un grupo de mujeres embarazadas; 4) Evaluar el impacto de la suplementación de ácido docosahexaenoico a través de un producto lácteo. La hipótesis que se plantea es que la proporción de ácidos grasos saturados, trans y poliinsaturados que integran la alimentación de mujeres embarazadas es inadecuada para satisfacer las demandas del feto. Se realizará un estudio protocolizado, descriptivo, observacional, con una rama quasiexperimental en una muestra de mujeres embazadas > a 18 años, > 24 semanas de gestación, feto único, ausencia de patologías crónicas que asistan al Hospital Universitario y Lagomaggiore. Se determinará el consumo de ácidos grasos saturados, trans, poliinsaturados y la relación entre n6/n3 mediante una encuesta de frecuencia y cantidad de alimentos. Se evaluará el estado nutricional de las embarazadas a través del IMC y se obtendrá información del peso, talla, perímetro cefálico y se estimará el peso para la edad gestacional en el recién nacido. Se determinará el contenido de ácidos grasos poliinsaturados y trans en plasma materno en una submuestra de esta población. Para el análisis estadístico se utilizarán medidas de tendencia central e I.C. de 95%, chi cuadrado, test exacto de Fischer. En todos los casos se considerarán significativos valores de p < 0.05. Se espera brindar conocimientos sobre la ingesta real de ácidos grasos y su adecuación a las recomendaciones vigentes. Además de poder conocer el estatus de dichos ácidos grasos y su relación con la ingesta alimentaria y plantear estrategias para mejorar la proporción de estos nutrientes, en post de la salud materno-fetal. Se elaborarán diferentes informes, adecuados a destinatarios interesados en la temática, como profesionales, sociedades científicas, Universidades y público en general. Se realizarán acciones de educación alimentaria y sensibilización en la población con mayor probabilidad de riesgo de deficiencia o exceso según corresponda.

Se espera realizar una contribución a los profesionales de la salud y nutrición, alumnos, docentes, organismos gubernamentales, aportando datos que mejoren el conocimiento acerca del aporte de ácidos grasos en la dieta habitual de las mujeres embarazadas. Además de favorecer la formación de becarios-alumnos, mediante la postulación a las convocatorias que se realicen para la incorporación de los mismos.

Los resultados podrán ser volcados a la sociedad y utilizarse para generar herramientas de educación nutricional.

Por otra parte se verá beneficiada la Comunidad Científica en su conjunto, dado que los resultados obtenidos se presentarán en eventos científicos, publicaciones, campañas de educación nutricional, entre otros.

In recent years, the role of fatty acids in pregnancy has become of utmost importance since they are  involved in neurological and retinal development.It is also known that inadequate intake of these fatty acids can affect adipose tissue development in childhood, while the excessive intake of fats, polyunsaturated fatty acids n-6 and trans fatty acids may interfere with the availability of polyunsaturated long chain fatty acids in pregnant women  and fetus.

The main  objective of this research will be to identify the amount of saturated fatty acids and  trans acids ingested by pregnant women and the impact on their nutritional status .

The specific objectives are: 1) To assess the  intake of saturated fats, trans and polyunsaturated fats in a group of pregnant women , 2) To determine the amount of omega 3 and omega 6 included in their diet  3) To determine the level  of polyunsaturated and trans fatty acids in plasma samples 4) To assess the impact of docosahexaenoic acid supplementation using a dairy product.

The hypothesis formed establishes that “ the amount of saturated, trans and polyunsaturated fatty acids in  the diet of  pregnant women does not fullfil  the fetus nutritional needs”.

To accomplish this research project, we designed an observational and descriptive protocol to be applied in a group of pregnant women attending the obstetrics service at the Lagomaggiore Hospital and the University Hospital.

Women to be included in the protocol should be older than 18 years, healthy, with a single fetus pregnancy and more than 24 weeks of gestation.

They will be surveyed about the intake of saturated, trans, polyunsaturated fatty acids and n-6 to n-3 ratio, considering the frequency and amount of food ingested. The nutritional status will be evaluated with the BMI calculation which will provide information about the fetus according to gestational age.

It will also be determined the content of polyunsaturated and trans fatty acids in maternal plasma in a subgroup of the sample.

Statistical analysis will be performed using measures of central tendency with a  CI 95% and the Fisher exact test. Significance will be accepted at p<0.05.

With this research, it is expected to provide insights into the actual intake of fatty acids in a group of pregnant women, establish its relevance for nutritional recommendations and suggest strategies to improve the content of these nutrients in the maternal diet.

It is also expected to produce several reports on the research topic and provide information to health professionals, scientific societies and  public. Special actions to promote nutritional education will be developed to favor the improvement of the community diet.

I.a Obj. Gral: - Identificar a nivel molecular componentes que regulan etapas específicas del transporte vesicular relacionado con la vía autofágica, con énfasis en el rol de proteínas SNARES, Rabs y sus efectores y su relación con microorganismos patógenos. I.b Obj. específicos:Ib.1- Identificar componentes de la maquinaria molecular que regula distintas etapas del proceso de autofagia, con particular énfasis en el rol de proteínas Rabs y SNAREs, así como las proteínas que interaccionan y/o modulan la actividad de las mismas.Ib.2- Avanzar en el conocimiento sobre la relación de la vía autofágica con microorganismos patógenos y su papel en la supervivencia de los mismos analizando fundamentalmente las moléculas y señales que determinan el reclutamiento de la proteína autofágica LC3 a los compartimientos fagosomales.

Consideramos que este proyecto nos permitirá determinar a nivel molecular, algunos de los componentes críticos involucrados en etapas específicas de la vía autofágica. Así mismo esperamos ampliar nuestro conocimiento sobre la relación entre microorganismos patógenos intracelulares y la autofagia. Comprender a nivel molecular el funcionamiento de la vía autofágica en los distintos procesos fisiológicos y patológicos en los cuales está involucrada nos permitirá establecer nuevas estrategias para el diseño de drogas con propiedades terapéuticas.

El transporte intracelular mediado por vesículas es un proceso altamente dinámico que permite el tráfico y reciclaje entre distintos compartimientos membranosos. El principal objetivo de este proyecto es determinar a nivel molecular la maquinaria que regula ciertas etapas de la vía autofágica. La autofagia es un proceso que involucra la degradación de organelas y de otros elementos del citoplasma permitiendo el reciclaje de aminoácidos. Es nuestro propósito continuar con la identificación de los componentes moleculares que regulan este proceso, analizando principalmente el papel que cumplen las proteínas Rabs y SNAREs y proteínas que interaccionan con ellas. Para ello se utilizarán proteínas mutadas y siRNA dirigidos contra las mismas. Avanzaremos en el estudio de la relación entre la autofagia y la supervivencia de ciertos microorganismos patógenos tales como Mycobacterium tuberculosis y marinum, Coxiella burnetii, Staphylococcus aureus. Se determinarán las señales específicas y los mecanismos por los cuales la célula huésped reconoce y dirige a ciertas bacterias hacia la vía autofágica o cómo ciertos microorganismos modulan dicha vía. Comprender a nivel molecular el funcionamiento de la vía autofágica no sólo en procesos fisiológicos normales sino también en diversas procesos infecciosos nos permitirá establecer nuevas estrategias para el diseño de drogas con propiedades terapéuticas.

Este proyecto servirá para el trabajo de tesis de Gabriela Recalde y de María E. Mansilla becarias de CONICET (Becarias tipo I y tipo II, respectivamente) y para Milagros López de Armentia (beca de la Agencia) así como para completar la formación de Rodrigo Militello como post-doc. El proyecto servirá además como base para la iniciación del entrenamiento de posgrado de Celeste Gaurón quien se ha postulado para una Beca de CONICET. Es importante desde el punto de vista institucional que tanto el investigador responsable de este proyecto como los estudiantes graduados que participan en el mismo son docentes de la FCM de la U.N.Cuyo, participando en el curso de grado “De las Moléculas a la Célula”.  Parte de este proyecto se llevará a cabo en colaboración con el grupo del Dr. Thierry Galli en el Instituto Curie, en Francia. Los resultados obtenidos se difundirán en congresos nacionales e internacionales y publicaciones en revistas de primer nivel en el campo de la Biología Celular y Microbiología. En la medida que avancemos en nuestro conocimiento de los procesos infecciosos en estudio podremos progresar en diseñar estrategias terapéuticas.

Vesicular trafficking is a highly dynamic process involved in transport and recycling of molecules among different intracellular compartments. The goal of this project is to determine at the molecular level the machinery that regulates the autophagic pathway. Autophagy is a cytoplasmic degradative process by which organelles and other cytoplasmic components are recycled. Our objective is to analyze the role of proteins from the Rab and SNARE families and their interacting proteins in specific steps of the autophagic pathway. For this purpose we will use mutants and siRNA directed against the proteins of interest. Furthermore, one of our aims is to advance in our study of the role of the autophagic pathway in the survival of microorganisms such as Mycobacterium tuberculosis, M. marinum, Staphylococcus aureus, Coxiella burnetii. Specifically our aim is to determine the signals and molecules involved in targeting certain pathogens to autophagy. Unraveling the role of autophagy at the molecular level in different physiological or pathological processes will allow us to design new strategies for the treatment of worldwide important infectious diseases.

Se plantean los siguientes objetivos específicos:

1. Estudiar la presencia de PRL en el tejido prostático tumoral.
2. Estudiar la presencia de RPRL en las células tumorales prostáticas.
3. Estudiar la colocalización o no de la PRL y su receptor en las mismas células
4. Correlacionar la co-expresión de PRL y su receptor con el score de Gleason.

Esperamos encontrar tumores que coexpresen PRL y RPRL en las mismas células, lo que implicaría un efecto autocrino, además de la expresión de ambas proteínas en distintas células, lo que implicaría un efecto paracrino. Alguno o ambos de estos efectos podrían correlacionar con el índice de Gleason determinado en la misma muestra, sugiriendo que el efecto proliferativo de la PRL localmente producida en los tumores puede contribuir a la gravedad de la enfermedad.

El objetivo de este proyecto es investigar si la prolactina (PRL) es coexpresada en células tumorales con receptores de prolactina (RPRL) en tumores de próstata o si ambos son expresados por células diferentes. El mecanismo autocrino y/o paracrino involucrado en el efecto proliferativo de la PRL local en los tumores prostáticos puede estar relacionado a la gravedad de la enfermedad y, por lo tanto, al score de Gleason. Nuestra hipótesis es que la coexpresión de PRL y RPRL se podría observar en los casos de mayor gravedad de la enfermedad, esto es con scores de Gleason altos. Para demostrar esta hipótesis estudiaremos cortes seriados de tumores de próstata humans, dispuestos como imágenes especulares, a fin de determinar si las mismas células expresan la hormona y su receptor o si se trata de diferentes células, o si se presentan ambos casos a la vez. El estudio se realizará mediante inmunohistoquímica de los cortes en espejo utilizando anticuerpos específicos que reconocen la PRL humana en un corte y el receptor de PRL humana en su corte especular con el fin de determinar la coexpresión de ambos marcadores. Cinco a ocho cortes inmunoteñidos por cada muestra serán evaluados a ciego por dos observadores independientes para cuantificar la cantidad de células que expresan PRL y/o RPRL por campo y en cada caso se les atribuirá un puntaje de acuerdo al porcentaje de células inmuno positivas y al grado de intensidad de la tinción. Estos puntajes serán correlacionados con el score de Gleason de las muestras mediante la prueba de correlación de Sperman, que no asume distribuciones normales de las variables.

Este proyecto forma parte del trabajo de maestría del médico Gastón López Fontana, alumno de la maestría en Urología Oncológica de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Cuyo. Los resultados del presente proyecto serán divulgados en reuniones científicas como las de SAIC y/o SAIB y eventualmente serán enviados a alguna revista de tirada internacional para su publicación.

The aim of the present project is to investigate whether prolactin (PRL) is co-expressed with prolactin receptors (RPRL) in prostate tumor cells or both are produced by different cell types into the tumor. The autocrine and/or paracrine mechanism involved in the proliferative effect of local PRL in prostate tumors could be related to the severity of the disease and, therefore, to the Gleason score. We hypothesize that the co expression of PRL and RPRL may be observed in more aggressive prostate tumors with high Gleason scores. To demonstrate this hypothesis we will study by immunohistochemistry the expression of PRL and its receptor on the same cells in mirror serial slices of human prostate tumors. Five to eight slices per sample will be blinded studied by two observers to quantify the amount and the intensity of stained cells expressing PRL and/or RPRL per field. The assigned score will be then correlated to the Gleason score by the Sperman correlation coefficient.

1)      Diseñar y poner a punto el análisis de diferentes STRs marcadores de Inestabilidad de Microsatélites, relacionados a mutaciones en los genes MMR. Esto involucra:

a.       Búsqueda bibliográfica de microsatélites utilizados y recomendados por organizaciones internacionales de la especialidad.

b.      Diseño experimental para el análisis en multiplex de dichos marcadores.

c.       Puesta a punto del análisis de dichos marcadores utilizando un secuenciador automático de ADN.

d.      Diseño de paneles de análisis para la asignación automática de los resultados que arroje el secuenciador automático.

e.       Análisis de muestras de referencia para la puesta a punto de la nueva metodología.

2)      Protocolizar y generar pautas diagnósticas con el objetivo de mejorar el tratamiento de los pacientes con CCR.

a.       Análisis de pacientes con CCR que cumplan los criterios de Bethesda.

b.      Correlación de los resultados de MSI con los resultados anatomopatológicos y otras variables clínicas de los pacientes estudiados.

c.       Adecuación de los algoritmos diagnósticos según la disponibilidad de exámenes en nuestra región.

Fomentar el trabajo dentro de un equipo interdisciplinario que permita mejorar desde el diagnóstico hasta el tratamiento y consejo genético de los pacientes con CCR y sus familiares

La realización de este trabajo permitirá la puesta en marcha de la metodología molecular de MSI que colaborará, junto a otras pruebas, a definir el diagnóstico de CCR hereditario vs. esporádico o familiar en pacientes de la región.

Por otro lado, se acortarán los tiempos desde la sospecha clínica hasta el diagnóstico y tratamiento debido al trabajo interdisciplinario y conectado de todos los profesionales implicados en el mismo y a su vez se logrará una mejor contención del paciente y su grupo familiar.

El Cáncer Colorrectal (CCR) es la segunda causa de muerte por cáncer en Argentina, con una incidencia estimada de más de 11.000 nuevos casos  por año.

La patogénesis del CCR es extremadamente compleja y diversa y es influenciada por múltiples factores, algunos de los cuales se encuentran relacionados a la dieta y estilo de vida y otros se relacionan a la predisposición genética.

Entre el 3 y el 8% de los casos son producidos por mutaciones heredables en genes puntuales y constituyen los distintos síndromes de cáncer colorrectal hereditario. El más común de ellos es el Síndrome de Lynch o Cáncer Colorrectal Hereditario no Polipósico (CCHNP).  Su patogénesis se relaciona con fallas en el sistema de reparación del ADN o DNA MisMatch Repair (MMR).

Las alteraciones en el sistema de reparación del ADN llevan a la acumulación acelerada de mutaciones de nucleótido único y cambios en la longitud de secuencias repetitivas o microsatélites, fenómeno conocido como Inestabilidad de Microsatélites (MSI).

La evaluación de la presencia o ausencia de Inestabilidad de Microsatélites (MSI) en tumores colorrectales al momento del diagnóstico de CCR, tiene un potencial significativo para el buen manejo del paciente.

El presente proyecto busca, a través de la puesta en marcha de una técnica innovadora, rápida y sensible, la detección de inestabilidad de microsatélites en pacientes con CCR de nuestra región.

Los objetivos planteados son: Diseño y puesta en marcha del análisis de diferentes STRs marcadores de Inestabilidad de Microsatélites en cáncer de colon, protocolizar y generar pautas diagnósticas para mejorar el tratamiento de pacientes con CCR y fomentar el trabajo dentro de un equipo interdisciplinario que permita mejorar desde el diagnóstico hasta el tratamiento y consejo genético de los pacientes con CCR y sus familiares.

La realización de este trabajo permitirá la puesta en marcha de la metodología molecular de MSI que colaborará, junto a otras pruebas, a definir el diagnóstico de CCR hereditario vs. esporádico o familiar en pacientes de la región.

Por otro lado, se acortarán los tiempos desde la sospecha clínica hasta el diagnóstico y tratamiento debido al trabajo interdisciplinario y conectado de todos los profesionales implicados en el mismo y a su vez se logrará una mejor contención del paciente y su grupo familiar.

A nivel Académico Científico: * Comunicación a Reuniones Científicas * Participación en Actividades Científicas de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNCuyo. * Participación en Actividades Científicas del Hospital Universitario * Publicación de los resultados.

A nivel Asistencial: La actividad asistencial que se desarrolla en el Laboratorio de Análisis de ADN de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNCuyo se realiza en estrecha colaboración con el Instituto de Genética y con el Hospital Universitario de la Universidad Nacional de Cuyo.

- Beneficiarios El diseño del trabajo está dirigido a mejorar el diagnóstico en pacientes con cáncer de colon y colaborar en el asesoramiento genético en los casos hereditarios y/o familiares. Esto permitirá el tratamiento adecuado de esos pacientes y el consejo genético de todo el grupo familiar.

Colorectal Cancer ( CRC) is the second cause of cancer death in Argentina with an estimated incidence of 11,000 new cases per year.

The pathogenesis of CRC is extremely complex and diverse and is influenced by many factors , some of which are related to diet and lifestyle, and others are related to genetic predisposition .

Between 3 and 8% of cases are caused by heritable mutations in specific  genes. They originate the most of hereditary colorectal cancer syndromes . The most common of these is Lynch syndrome or hereditary nonpolyposis colorectal cancer ( HNPCC) .

The pathogenesis of Lynch syndrome is related to failures  DNA repair system or mismatch DNA repair ( MMR ) . Alterations in the DNA repair system lead to an accelerated accumulation of mutations and single nucleotide changes in the length of repetitive sequences or microsatellites, a phenomenon known as Microsatellite Instability (MSI) .

The evaluation of the presence or absence of Microsatellite Instability (MSI ) in colorectal tumors at diagnosis of CRC , has significant potential for good patient management .

This project seeks , through the launch of an innovative, rapid and sensitive technical of detection of microsatellite instability in patients with CRC in our region .

The objectives are : design and implementation of different STRs analysis, microsatellite instability markers in colon cancer , formalize and generate diagnostic guidelines to improve the treatment of patients with CRC and promote work within an interdisciplinary team to improve from diagnosis to treatment and genetic counseling of patients with CRC and their families.

Completion of this work will allow the implementation of the methodology molecular MSI will collaborate , along with other tests , to define the diagnosis of hereditary CRC vs . sporadic or familial in patients in the region.

On the other hand, it will shorten the time from clinical suspicion to diagnosis and treatment due to the interdisciplinary and connected to all the professionals involved in it and in turn achieve better containment of the patient and his family.

Objetivo Principal

• Determinar el impacto del implante coclear en la calidad de vida de los niños con hipoacusia moderada a profunda prelocutiva menores de 2 años de edad auditiva, que serán asistidos en el Hospital Humberto Notti de la provincia de Mendoza desde el año 2013 al 2015.

 Objetivos Específicos

• Determinar desarrollo auditivo de niños hipoacúsicos (hipoacusia moderada a profunda prelocutoria) con implante coclear por medio de la escala LittlEars®.
• Determinar calidad de vida en aspectos de relación definidos psicométricamente a partir de la subclasificación del cuestionario LittlEars®.
• Valorar la eficacia y efectividad del implante coclear en niños con hipoacusia moderada a profunda prelocutiva (para poder comparar y realizar la tesis tienen que ser siempre el mismo grado de hipoacusia o en su defecto, siempre poner todas las hipoacusias a evaluar, lo cual sería medio complicado, o son moderas a profundas, o son profundas y si son o no bilaterales)con instrumentos ya validados (cuestionario LittlEars®).
• Validar el uso del cuestionario LittlEars® como instrumento validado para estudiar la eficacia del implante coclear en niños y adolescentes que incorpore la calidad de vida en cuanto aspectos de relación.
• Proponer estrategias desde la comunidad y con el equipo de salud para fomentar la vida de relación de niños con hipoacusia moderada a profunda prelocutiva con implante coclear.

Lograr la la validación del instrumento de medición del desarrollo auditivo (LittlEars) en niños de 2 a 15 años de edad cronológica con un periodo de implantación menor a los 2 años (edad audiológica).

Fomentar prácticas destinadas a la mejoría de la inservión social de niños hipoacúsicos.Durante la validación del cuestionario LittlEars podremos inferir si los resultados de la observación de los padres podrían servir como base para la articulación entre terapeutas del lenguaje, fonoaudiólogos y docentes. No sucede lo mismo cuando basamos dicha articulación en las pruebas objetivas estandarizadas, a menudo no resulta fácil evaluar a niños pequeños, por ello estos cuestionarios preestablecidos fortalecen el lenguaje interprofesional. Esto último refuerza la tarea conjunta del equipo sanitario y educativo para lograr la inclusión del paciente.

La hipoacusia neurosensorial severa-profunda prelingual compromete diversas esferas en el desarrollo del niño.

En este trabajo se validará un instrumento de medición de desarrollo auditivo, subclasificando los ítems en 4 dominios de calidad de vida relacionados a la vida en relación de los pacientes pediátricos con hipoacusia severa a profunda prelocutiva que han recibido un implante coclear.

Objetivo.- Determinar el impacto del implante coclear en la calidad de vida en niños con hipoacusia moderada a profunda prelocutiva menores de 2 años de edad auditiva, que serán asistidos en el Hospital Humberto Notti de la provincia de Mendoza desde el año 2013 al 2015.Métodos - Diseño: Estudio de caso en la población basado en una cohorte de 2 - a 15-años de edad. Participantes: 60 niños . Instrumento: El Cuestionario LittlEARS de Calidad Auditiva (CA) será administrado a los padres en dos oportunidades (con una diferencia de 6 meses).

Metodologìa - Se solicitará la participación en este estudio de los padres de niños hipoacúsicos moderados a profundos  que recibieron o recibirán el implante coclear entre junio de 2012 y junio de 2015 y que tengan entre 6 meses y 24 meses de edad auditiva en el momento de implantación. Por otro lado se encuestará a los padres de 120 niños normoyentes entre 0 y 24 meses de edad, que acudan a la consulta otorrinolaringológica por otras afecciones no relacionadas con la audición.

-Publicaciones:

Revista FASO – Buenos Aires, Argentina.

Revista Sociedad Chilena de Otorrinolaringología – Santiago, Chile.

-Participación en eventos científicos

•             Jornadas Andinas .

•             Congreso de la Federación Argentina de Sociedades  de Otorrinolaringología .

-Beneficiarios: Médicos, Otorrinolaringólogos, Fonoaudiólogas, Terapeutas del lenguaje.

GENERALES

 -Correlacionar los hallazgos rinofibrolaringoscópicos adicionando maniobras posturales y aplicación de la vocal /i/  /o/  con  los resultados de los mismos parámetros en el análisis objetivo de la voz (análisis acústico y electroglotografia)

-Fortalecer consensos entre vocólogas y médicas/os otorrinolaringó-logas/os en el diagnóstico de patología vocal.

ESPECÍFICOS

-Recopilar datos que permitan identificar indicadores de patologías funcionales de la voz.

Mediante la validación de la aplicación de maniobras posturales y vocales /i/ /o/ al principal estudio diagnóstico para patología vocal utilizado en nuestro medio, esperamos no sólo aumentar las posibilidades de brindar a todos los pacientes un diagnóstico y tratamiento correcto sino a la vez realizar una guía básica de evaluación de patología vocal funcional adaptada a nuestro medio y difundirla entre médicos y fonoaudiólogas para lograr consenso en los diferentes niveles de prevención y tratamiento.

•           INTRODUCCIÓN

La patología de la voz ha incrementado su incidencia y prevalencia en los últimos años en relación  a la mayor complejización de las formas de expresión y comunicación. Esto determina la necesidad de mayor capacitación y esfuerzo, no solo para un uso responsable de la voz sino también para la evaluación y diagnóstico de sus patologías  Simultáneamente,podemos observar la falta de una concepción integral del paciente y déficit en el trabajo interdisciplinario en nuestra área, que agravan aún más la problemática mencionada, dificultando el  diagnóstico y  tratamiento correcto.

La valoración por videorinofibrolaringoscopia no es suficiente para el diagnóstico de disfonías funcionales por lo que se hace necesaria la aplicación de un método complementario para poder definir y diagnosticar las alteraciones vocales en su totalidad.

En nuestro medio fue realizado el análisis comparativo mediante laboratorio de voz de las vocales /o/ e /i/ del Español de Argentina validándolas como indicadores de comportamiento vocal en las distintas patologías y en individuos sanos permitiendo la elección efectiva de medidas terapéuticas. Paralelamente también fue validada mediante laboratorio de voz la utilización de giro cefálico a derecha e izquierda (maniobras posturales) para analizar las asimetrías de comportamiento fonatorio (hiper e hipofunciones) entre ambas cuerdas vocales.

La aplicación de maniobras y emisiones vocales que varíen las acciones musculares permite  comprender entonces, no solo la severidad del trastorno sino los mecanismos compensatorios y comportamientos fonatorios presentes en las disfonías por tensión muscular o disfonías funcionales mejorando las estrategias terapeúticas.

Tomando en cuenta estos conocimientos es que nos planteamos la realización de  la videorinofibrolaringoscopia aplicando los mismos parámetros ya comprobados en el laboratorio de voz (vocales /i/, /o/ y maniobras posturales) a fin de mejorar con esto la evaluación y sospecha de los distintos comportamientos fonatorios patológicos  (hiperfunciones, hipofunciones cordales y asimetrías de comportamiento cordal) mediante el estudio disponible actualmente en nuestra población.

La aplicación de estas maniobras al estudio realizado en nuestro medio (videorinofibrolaringoscopia) puede ser una herramienta eficaz para la sospecha de estas alteraciones y para evaluar la necesidad de estudios complementarios (laboratorio de voz,estroboscopia laríngea) que nos permitan definir con mayor exactitud el comportamiento fonatorio en disfonías funcionales y planificar un tratamiento efectivo.

•           OBJETIVOS

Generales:

-Correlacionar los hallazgos rinofibrolaringoscópicos adicionando maniobras posturales y aplicación de la vocal /i/  /o/  con  los resultados de los mismos parámetros en el análisis objetivo de la voz (análisis acústico y electroglotografia)

-Fortalecer consensos entre vocólogos (médicas/os otorrinolaringó-logas/os, fonoaudiólogas especialistas en voz) en el diagnóstico de patología vocal.

Específicos:   

-Recopilar datos que permitan identificar indicadores de patologías funcionales de la voz.

•           METODOLOGÍA

Procedimientos

        - Realización de estudio videorinofibrolaringoscopia, aplicando vocales /i/ /o/ y maniobras posturales.

        - Realización de laboratorio de voz con las maniobras ya estandarizadas        

        - Análisis estadístico correlacional de resultados

Universo muestral

            El estudio será realizado en 100 pacientes.

Criterios de inclusión: mayor de 18 años, disfonía de más de tres semanas de evolución.

Criterios de exclusión: patología neurológica , lesiones laríngeas sospechosas de malignidad

Se realizará mediante difusión de los resultados obtenidos en jornadas, publicación en revista científica y/o congresos nacionales e internacionales, lo que favorecerá la transferencia a nivel científico. Por otra parte es de nuestro interés generar un protocolo básico de evaluación regional de patología vocal funcional.

Voice pathology’s influence and prevalence have increased over the last few years, in relation to the growing complexity of means of expression and communication.

Since assessment through fibreoptic rhinolaryngoscopy is insufficient for the diagnosis of functional dysphonia, it is necessary to use a supplementary method which enables us to define and diagnose vocal disorders in full.

In our environment, we carried out a comparative analysis through voice laboratory of the Argentine-Spanish vowel sounds /i/ and /o/, which were validated as indicators of vocal behavior  of both individuals suffering from different pathologies and healthy individuals, what has allowed an effective choice of therapeutic measures.. Concurrently, the use of right and left cephalic rotation (postural maneuver) was validated through voice laboratory in order to analyze the asymmetries of phonatory behavior (hyperfunctions and hypofunctions) between both vocal cords. Taking this knowledge into account, we pose that flexible fibreoptic rhinolaryngoscopy is performed applying the parameters we verified at the voice laboratory (vowel sounds /i/, /o/, postural maneuvers) in order to improve assessment and suspicion of the different pathological phonatory behaviors (vocal cord hyperfunctions and hypofunctions and asymmetries of vocal cord behavior) in our population.

  La secreción de enzimas al fluido epididimario es un evento clave en el proceso de maduración de los espermatozoides en mamíferos y por ende crucial para la adquisición de la capacidad fecundante de los machos. El enfoque de este proyecto podría permitir esclarecer el modo de regulación de  esa secreción epididimaria,  y si está relacionada con la actividad reproductiva de los animales. El modelo en células tumorales nos permitirá esclarecer el mecanismo de secreción exacerbada de enzimas lisosomales y su relación con la progresión de tumores.  La inclusión del estudio del CD-MPR y SOR se hace por primera vez en estos modelos.

This project is a continuation of a line of research already established in our group, and is focused on the study of the mechanism of secretion of proteins in two different biological systems: mammalian epididymis and breast tumor cells, as well as the identification of molecules that regulate this process, and a possible hormone-dependence of these phenomena. These molecules may be traditional receptors for lysosomal enzymes, such as Mannose-6-phosphate receptors (MPRs), or other proteins for alternative routes (as the sortilin/prosaposina system).  In this context, we propose to study the expression and distribution of these receptor molecules in epididymis of reproductively mature and immature bulls, and to correlate with the secretion of several lysosomal enzymes. In all cases,  the hormone levels (testosterone and DHT) in blood and tissue from these animals will be measured. In addition, we propose to correlate changes in the composition of the epididymal  fluid  (along the duct) with molecular modifications on the sperm surface  in the mature animals. In tumor cells (MCF-7 and MDA-MB231 cell lines), it is proposed to study the impact of hormones on the expression and distribution of MPRs, sortilin/prosaposin, and hydrolytic enzymes, as glycosidases and proteases (cathepsins). In addition, the incidence of prosaposina/sortilin in cathepsin D processing and distribution and functionality of MPRs will be studied in cells with different levels of sortilin expression. In both experimental models (epididymis and tumor cells), the secretion of enzymes will be studied by Western blott (cathepsins, prosaposin), or by measuring  enzyme activity spectrofluorometrically.  In tumor cells, the compartmentalization (by indirect immunofluorescence or subcellular fractionation) of proteins, will be studied after treatment with estradiol and in the presence or absence of lysosomotropic drugs. All these proposals are reinforced by some preliminary results (in epididymis of bulls) in our group. It is intended to clarify if there is a hormonal regulation in pathways of intracellular transport, processing and distribution of enzymes in these two secretory models and correlate with the maturation of sperm in a case and the progression of tumors in the other.

Objetivos

Generales

El objetivo de este estudio se orienta hacia la obtención de parámetros que permitan una mayor comprensión de los procesos producidos en las manifestaciones del estrés (modificaciones cognitivas, aspectos interaccionales y motivacionales) y la obtención de nuevos métodos de prevención de reacciones depresivas al estrés en humanos y la utilización de nuevos fármacos que interfieran específicamente los efectos deletéreos de las depresiones en las esferas cognitivas y emocionales.

PARTE 1

1. Conformar un banco de muestras de sangre y orina de mujeres que están cursando un embarazo normal y de mujeres con preeclampsia.

2. Determinar la expresión de las proteínas de golpe de calor Hsp 27 y Hsp90 en muestras de suero y de orina en mujeres con preeclampsia.

3. Determinar si las proteínas de golpe de calor Hsp 27 y Hsp90 son marcadores predictivos y correlacionan con la gravedad de la enfermedad.

4. Estudiar la expresión de las proteínas de golpe de calor Hsp 27 y Hsp90 en los tejidos placentarios.

PARTE 2

1. Completar la evaluación del impacto psicológico del alumbramiento prematuro y sus consecuencias.

- Realizar un análisis de datos demográficos y psicosociales maternos:  edad, tipo de pareja, hijos, nivel educativo, zona de residencia, datos clínicos del niño, parto, lactancia, antecedentes de sucesos emocionales significativos.

- Analizar las modalidades de desarrollo vincular madre – hijo de alto riesgo, durante el período de internación en la UCIN  y durante el año posterior al alta.

- Evaluar sintomatología compatible con Trastorno del Estado de Ánimo Distímico, con especial atención en Depresión Posparto, y sus manifestaciones en relación al vínculo madre-hijo,  durante el período de internación en la UCIN  y durante el año posterior al alta.

- Evaluar niveles de Estrés Parental durante la internación del recién nacido de alto riesgo en la UCIN.

- Realizar una evaluación interdisciplinaria de la familia y el niño, para posibilitar la prevención y la Atención Temprana del Desarrollo Infantil.

2. Completar la evaluación de la influencia del hipotiroidismo subclínico sobre el primer objetivo.

- Analizar valores de hormonas tiroideas y TSH para determinar la prevalencia de trastornos tiroideos en las Madres que componen la muestra, y comparar con la prevalencia de estas patologías en la población femenina de zonas endémicas.

- Determinar la influencia del hipotiroidismo subclínico sobre el impacto psicológico de la situación de postparto prematuro.

- Detectar la prevalencia y manifestaciones de las disfunciones tiroideas en mujeres parturientas  que asisten a los Hospitales Luis Lagomaggiore y Humberto Notti de la Provincia de Mendoza, considerando la frecuencia de aparición de estas patologías en una zona con deficiencia de yodo.

- En una muestra representativa de madres con disfunciones tiroideas, compensadas o no y eutiroideas, evaluar características del parto, incidencia de rotura de bolsa, parto prematuro, bajo peso al nacer, dificultades respiratorias y admisión neonatal a cuidados intensivos retrospectiva.

- Evaluar la incidencia de trastornos afectivos postparto, con especial atención en depresiones postparto, en los distintos grupos y manifestaciones en relación al vínculo madre-hijo lactante.

3. Completar la evaluación de la influencia del impacto psicológico sobre la calidad de la leche prematura.

- Evaluar la calidad de la leche materna, considerando valores en proteínas, (caseína), triglicéridos, lactosa, IgA y la eficiencia de la lactancia, determinando la duración de la lactancia exclusiva o no exclusiva y la tasa de crecimiento de los bebés.

- Evaluar la calidad de la leche materna en los diferentes grupos, considerando valores en proteínas, (caseína), triglicéridos, lactosa, IgA y la eficiencia de la lactancia, determinando la duración de la lactancia exclusiva o no exclusiva y la tasa de crecimiento de los bebés.

- Evaluar las características de crecimiento del niño durante el año posterior al parto, consignando: antecedentes familiares, datos perinatales, peso, talla, altura, perímetro cefálico, TSH neonatal, desarrollo psicomotor, desarrollo cognoscitivo, alimentación (lactancia exclusiva o no). En el caso de prematuros, se consignarán también los datos de la epicrisis al momento del alta.

Ya mencionados en Hipotesis de trabajo y Objetivos.

El proyecto es continuación del anterior (2011-13) y contempló realizar investigaciones sobre respuestas a distintos tipos de estrés divididas en dos bloques temáticos.

En el primer bloque se continuara con el estudio de “Marcadores séricos de preeclampsia” durante los 3 trimestres del embarazo. Se comparó los marcadores séricos conocidos (PF-13, PAPP-A, activina A e inhibina A) entre sí y se dejó para este periodo 2013-15 HSP 70 y 90 sérica y urinaria como nuevos posibles marcadores.

En el segundo bloque se continuara tabajando con alteraciones emocionales, clinicas y bioquímicas en las mujeres con disfunciones tiroideas, durante el embarazo, postparto y lactancia y sus relaciones con parto prematuro.

Difusión nacional e internacional en libros, revistas y Congresos.

Formación de Recursos Humanos.

Probable aplicación de los resultados a la medicina.

The project, which is an extension of the former (2011-13) is concerned with the response to various types of stress and was devided into two thematic moduli. In the first modulus the study of seric tracers of preeclampsia during the three trimester of pregnancy will be continued.

Comparison of known seric markers (PF-13, PAPP-A, activite A e inhibine A) with seric and urinary HSP 27 and 90 as new possible markers will be investigated.

In the second modulus clinical, emotional and hormonal changes on women with tyroideus disfunction during pregnancy, postpartus and lactation will be continued.

El objetivo de este trabajo es estudiar, el efecto de la cirugía bariátrica en pacientes con obesidad mórbida sobre los factores de riesgo cardiovascular clásicos, y el espesor íntima media de la arteria carótida como marcador no invasivo de en enfermedad cardiovascular asintomática, en asociación con el grado de actividad de la enfermedad grasa del hígado (en el momento de la cirugía).

Se espera que en los controles a los 6 meses y al año de la cirugía Baríatrica, se logre la condición de remisión o mejoría de: HTA, dislipidemia, DM tipo 2 y la continuidad o no del hábito tabáquico, así como la remisión o persistencia (con su grado de severidad) de SAHOS. Conjuntamente se espera remisión de la resistencia a la Insulina (HOMA) y síndrome metabólico. Definiremos remisión de dislipidemia como valores normales de lípidos acorde al ATPIII en ausencia de medicación hipolipemiante. Remisión de DM tipo 2 acorde a los criterios de Buse: Remisión completa : glucemia en ayunas menor a 100 mg/dl, HbA1c menor a 6, de al menos  un año de duración. En ausencia de medicación. Remisión parcial: glucemia en ayunas entre 100-125 mg/dl, HbA1c menor a 6,5; de al menos un año de duración. En ausencia de medicación. Remisión de HTA cuando: la condición de HTA desaparece o no requiere medicación a largo plazo. Mejoría de HTA cuando la medicación antihipertensiva es disminuída.

Además definimos la remisión de SAHOS como un índice de perturbación respiratoria (IPR) menor a 5.

Se espera que las ecografías abdominales de seguimiento para evaluar el compromiso graso de hígado muestren cambios favorables, como también la evaluación de IMC y las variables para riesgo cardiovascular de Framingham y Risk Engine UKPDS para diabetes

Como punto final principal o primario se espera cambios favorables en la medición ecográfica del espesor de la íntima- media a los 6 y 12 meses de la cirugía en asociación con la mejoría de los factores de riesgo clásicos y de acuerdo a menor actividad del Hígado graso y remisión o mejoría de SAHOS.

Se estudiarán consecutivamente 40 pacientes con diagnóstico de Enfermedad grasa del Hígado y obesidad mórbida (IMC ≥  35 kg/m²con enfermedades comórbidas asociadas -definidas por guidelines ASMBS 2013- o IMC ≥  40 kg/m²) y 40 pacientes machados por edad, sexo e IMC sin enfermedad grasa del hígado (o sin esteato hepatitis determinada por biopsia) que vayan a ser sometidos a cirugía bariátrica ya sea con la técnica de manga gástrica (VSG) o by pass gástrico Y de Roux (BGYR) en el Hospital Italiano, a cargo del Centro Quirúrgico de la Obesidad, Mendoza. Se realizará medición del Espesor de la Intima Media (EIM) en los tiempos estipulados de control pre y post quirúrgicos como marcador No invasivo y precoz de enfermedad arterosclerótica subclínica, correlacionándolo a la presencia por biopsia de la citoesteatohepatitis activa.

La Enfermedad grasa del hígado se definirá por Ultrasonografía como un incremento difuso de la ecogenicidad hepática y se utilizará la clasificación de Brunt para categorizar la biopsia hepática, la cual será realizada en el intraoperatorio de la cirugía bariátrica.

Se registrará para cada paciente variables demográficas, antropométricas y factores de riesgo cardiovascular (RCV) clásicos, Resistencia a la Insulina, Síndrome metabólico armonizado y Scores de riesgo general (Framingham) y Específicos como UKPDS risk  engine. Dentro de los factores de RCV emergentes se analizará la presencia de Sindrome de hipopnea apnea del sueño (SAHOS)

 Las variables descriptas se evaluaran en tiempo basal (prequirurgico) y a los 6 y 12 meses post-operatorios.

Se realizarán ecografías abdominales así como la medición ecográfica del espesor de la íntima- media a los 6 y 12 meses de la cirugía.

Se comparará las medias de las variables continuas por test de student y las frecuencias por X2 para demostrar diferencias significativas con error alfa mayor del 5% entre los pacientes de con y sin hígado graso (o con esteatohepatitis por biopsia). Se Evaluaran las variables demográficas, constituyentes de los factores de riesgo CV clínicos y laboratoriales y los scores de riesgo CV. Se evaluará como punto final entre los dos grupos los cambios de los factores de riesgo clásicos y el EIM. Secundariamente en ambos grupos se analizará comparativamente los criterios  de remisión de DM, Dislipidemia e HTA, SAHOS.

Los datos obtenidos en el presente proyecto brindarán  conocimiento sobre el estado de salud de los obesos  mórbidos,  encontrando herramientas que  permitan  optimizar las medidas terapéuticas para el tratamiento de dicha enfermedad.

En Latino América falta evidencia sobre la situación actual del obeso mórbido. Con este estudio se identificaran los problemas que presenta esta enfermedad en el terreno del riesgo cardiovascular y variables no clásicas asociadas dilucidando  nuevas  formas de tratamiento  para estas complicaciones que afectan la sobrevida de los pacientes con obesidad.

Con este estudio  tendremos más fundamentos para  brindarle a la comunidad una comprensión más acabada del espectro de riesgo cardiovascular que conlleva la obesidad mórbida y cuanto contribuyen las comorbilidades (hígado graso y síndrome de Hipopnea y apnea del sueño) a este incremento del riesgo vital. También pretendemos demostrar el beneficio de la cirugía bariátrica en la reducción del riesgo cardiovascular   medido no invasivamente a través del espesor de la íntima media de la carótida.

En esta investigación estarán involucrados docentes, y egresados de la Universidad Nacional de Cuyo

Although de evidence is growing, do not exist, up date, trials in patients with severe obesity who suffer bariatric surgery, that evaluate their cardiovascular risk evolution in relationship with the activity of their non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD)

We will study consecutively 40 patients with severe obesity and NAFLD and 40 patients matched for age, sex and BMI without NAFLD, that will be suffering bariatric surgery and we will compare their cardiovascular risk through that the intima-media thickness measured in time 6 and 12 months front the time of surgery.

NAFLD will definite by liver ultrasonography scan by diffuse increased echogenesity hyperechogenesity and intra surgery hepatic biopsy (by Brunt´s classification ).

We will evaluate for all patients the following variables demography, anthropometric, Classic Cardiovascular risks factors (CVRF), Insulin Resistance, metabolic syndrome, Framingham risk Score, UKPDS risk Engine. We will evaluate the new CVRF how the presence of   Obstructive Sleep Apnea Hypopnea Syndrome (SAHOS)

We will perform the multivariable analysis to evaluate the association with variation of de CVRF, SAHOS, activity of NAFLD with the variation intima-media thickness as a marker of subclinical atherosclerosis

Objetivo general

El objetivo general del proyecto es desarrollar y optimizar nuevas formulaciones vacunales de primera y tercera generación contra la infección experimental de L. (L.) amazonensis, capaces de inducir una respuesta inmune humoral y celular protectora, utilizando antígenos totales y recombinantes de Leishmania formulados con AbISCO®-100  y Montanide ISA 70 VG como adyuvantes.  

Objetivos particulares

1-Producir antígenos totales (ATL) y antígenos solubles (ASL) de L. (L.) amazonensis.

2- Sintetizar y purificar la proteína recombinante A2 (A2r) de L. (L.) infantum.

3-Inmunizar ratones BALB/c, con una vacuna basada en ATL de L. (L.) amazonensis, y en la A2r de L. (L.) infantum, formuladas con AbISCO®-100  y Montanide ISA 70 VG.              

4-Analizar la respuesta inmune humoral y celular generada por cada formulación vacunal.

5-Evaluar la protección conferida por las distintas formulaciones vacunales en ratones BALB/c, después del desafío con formas infectantes de L. (L.) amazonensis.

Desarrollar inmunidad humoral y celular antígeno especifica, después de la inmunización con formulaciones vacunales de primera y tercera generación adyuvantizadas con AbISCO®-100 y Montanide ISA 70VG, que sean capases de conferir protección frente a la infección experimental con L. (L.) amazonensis (MHOM/VE/84/MEL) en un modelo murino.

La leishmaniasis es un grupo de enfermedades parasitarias causadas por protozoarios intracelulares del género Leishmania. La leishmaniasis se encuentra distribuida en 88 países, afecta a 12 millones de personas en el mundo con 2.000.000 de nuevos casos cada año. En Argentina, la zona endémica está comprendida por las provincias de Salta, Jujuy, Tucumán, Catamarca, Santiago del Estero, Chaco, Formosa, Misiones y Corrientes, con un registro aproximado de 300 casos nuevos anuales. Uno de los principales agentes etiológicos de amplio espectro en la presentaciones clínicas, es Leishmania (Leishmania) amazonensis, con una amplia distribución geográfica en el continente Americano, y en el Norte de Argentina. En el hospedador vertebrado la resistencia a la infección contra protozoarios del género Leishmania está dada por la inmunidad celular, en especial por la activación de los macrófagos por citoquinas sintetizadas por los linfocitos Th1. Las células del perfil Th1 secretan principalmente IL-2 e IFN-γ, mientras que las células del perfil Th2 secretan IL-4, IL-5 e IL-10. Se ha demostrado que el IFN-γ activa los macrófagos, generando la expresión de iNOS, enzima que cataliza la formación de NO, necesario para la destrucción de los amastigotes intracelulares. Por el contrario, una respuesta inmune del tipo Th2 limita la acción Th1 a través de las funciones de la IL-10 e IL-4, que desactivan a los macrófagos permitiendo el crecimiento intracelular del parásito y progresión de la enfermedad. El objetivo general del proyecto es el desarrollo y optimización de nuevas formulaciones vacunales de primera y tercera generación, basadas en antígenos totales y en antígenos recombinantes del género Leishmania, que sean capaces de generar inmunidad humoral y celular protectora frente a la infección por L. (L.) amazonensis en un modelo murino. Por lo tanto se producirán antígenos totales de L. (L.) amazonensis (ATL) y sintetizará y purificará la proteína recombinante A2 (A2r) de L. (L.) infantum. Posteriormente se ensayarán en ratones BALB/c, protocolos de inmunización con una formulaciones vacunales basadas en ATL y A2r, en combinación con AbISCO^®-100 y Montanide ISA 70VG  como adyuvantes inductores de una respuesta inmune del tipo Th1. Finalizados los protocolos de inmunización se evaluará la respuesta inmune humoral y celular. La formulación vacunal que haya logrado una optima activación del sistema inmune, se ensayará, para evaluar la protección conferida en los animales de experimentación, contra el desafío de formas infectantes de L. (L.) amazonensis.

Los resultados obtenidos de nuestra investigación serán presentados en eventos científicos de relevancia, como así también publicados en revistas científicas nacional e internacionales jerarquizando la labor científica de nuestra casa de estudio. Los resultados obtenidos pueden ser la base para el desarrollo de nuevas formulaciones vacunales de primera y tercera generación adyuvantizadas contra la infección por L. (L.) amazonensis. El análisis de los diferentes resultados obtenidos en el campo de la I+D sobre vacunas contra la leishmaniasis, llevados a cabo en América del Sur, pueden ser tomados por las instituciones gubernamentales de los países de la región para finalmente obtener y producir una vacuna local contra la infección por L. (L.) amazonensis, beneficiando a las poblaciones más vulnerables de nuestro continente. Es de destacar que la medicación terapéutica que se está utilizando actualmente lleva más de 50 años sin ser renovada, y estudios como este pueden contribuir al desarrollo de un nuevo tratamiento preventivos contra la infección de protozoarios del género Leishmania.

El presente proyecto, incluye en su equipo de investigación a dos estudiantes de medicina de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNCuyo, el alumno Morea Gastón posee una beca del Concejo Interuniversitario Nacional (CIN), y el alumno Calatayud, Mario Luis Eduardo posee una beca de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNCuyo, ambos becarios se encuentran bajo la dirección del Dr. Diego Esteban Cargnelutti. El subsidio otorgado al presente proyecto, les permitiría continuar en forma satisfactoria con su formación en ciencias y finalizar sus proyectos de investigación que se enmarcaran en la misma línea de investigación: vacunas para la leishmaniasis.

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Leishmaniasis is a group of parasitic diseases caused by intracellular protozoa of the genus Leishmania. Leishmaniasis is distributed among 88 countries; it affects 12 million people in the world with 2.000.000 new cases every year. In Argentina, the endemic zone is composed of Salta, Jujuy, Tucumán, Catamarca, Santiago del Estero, Chaco, Formosa, Misiones and Corrientes, registering approximately 300 new cases per year. One of the main etiological agents that present a broad spectrum of clinical presentations is Leishmania (Leishmania) amazonensis, it has a wide geographical distribution in the American continent, and in the North of Argentina. Resistance against the infection with Leishmania protozoa is given by cellular immunity, especially through the activation of macrophages with citokynes synthesized by Th1 lymphocites. Th1 cells secrete mainly IL-2 and IFN-γ, while Th2 cells secrete IL-4, IL-5 and IL-10. It has been demonstrated that IFN-γ activates macrophages, generating the expression of iNOS, enzyme that catalyzes the formation of NO, necessary for the destruction of the intracellular amastigotes. On the contrary, a type Th2 immune response limits the Th1 action through the functions of IL-10 and IL-4, that deactivate the macrophages allowing the intracellular growth of the parasite and the progression of the disease. The main objective of the project is the development and optimization of a first and third generation vaccine against leishmaniasis based on total and recombinant Leishmania antigens, capable of generating humoral and cellular protective immunity against L. (L.) amazonensis infection in a murine model. Thus, total antigens (ATL) from L. (L.) amazonensis and the recombinant A2 protein from L. (L.) infantum will be produced and they will be essayed on BALB/c mice in vaccination protocols, combined with AbISCO^®-100 and Montanide ISA 70VG as adjuvant. Once the vaccinations protocols are finished, the humoral and cellular response will be evaluated. The vaccine formulation that reaches an optimal activation of the immune system will be essayed to evaluate the given protection on animals for experimentation against the challenge of infecting forms of L. (L.) amazonensis.

1.- Evaluar las modificaciones de marcadores de inflamación: IL-6 y MCP-1 al inicio y luego de 12 meses de un programa de cambios del Estilo de Vida en pacientes con Diabetes tipo 2.

2.-Evaluar la peroxidación lipídica sérica (TBARS) al inicio y luego de 12 meses de un programa de cambios del Estilo de Vida en pacientes  con Diabetes tipo 2

Aporte al conocimiento científico clínico:

Los resultados a obtener permitirán  establecer que

1.-Los efectos antiinflamatorios asociados al ejercicio pueden ofrecer protección contra la resistencia a la insulina.

2.- La IL-6 liberada en el ejercicio sería una citoquina multifactorial que  regularía la respuesta celular y humoral y desempeñaría un papel fundamental en la inflamación,  que se asocia con varias condiciones patológicas, como la diabetes tipo 2

3.-El ejercicio regular incorporado como cambio de estilo de vida mejora la calidad de vida de los pacientes con diabetes tipo 2.

Formación de recursos humanos:

• El desarrollo del presente proyecto contribuirá a la profundización y actualización de la formación científica de los integrantes del grupo (Dictado de cursos y conferencias).
• Aporte a la interdisciplinariedad.
• La realización de este trabajo permitirá la interacción de docentes investigadores de las Área básicas y clínicas de la Facultad.

•             Introducción

                 El ejercicio físico regular y moderado (de entrenamiento) es capaz, por sí mismo, de atenuar la resistencia a la insulina y reducir el riesgo cardiovascular, al interferir con los mecanismos fisiopatológicos en los diferentes niveles, incluyendo las vías del estrés oxidativo. Algunas citoquinas  están involucradas en la mediación de los efectos beneficiosos del ejercicio y se sugiere que participarían  en la protección contra las enfermedades crónicas asociadas con  la inflamación de bajo grado, tales como la diabetes y la aterosclerosis. Estas enfermedades han sido asociadas con un bajo grado de inflamación sistémica, reflejado por niveles elevados de diferentes citoquinas. La diabetes es considerada como un estado proinflamatorio y se caracteriza por el aumento de moléculas proinflamatorias en plasma como Proteína C Reactiva (PCR), citoquinas y activación de monocitos. Esto resulta en una alteración de la función del endotelio y de las células musculares lisas de los vasos sanguíneos. El tejido adiposo, por su parte, contribuye a la producción de interleuquina -6 (IL-6),  interleuquina 1 (IL-1) y de proteína C-reactiva (PCR). Durante el ejercicio, IL-6 es producida por las fibras musculares a través de una vía TNF-independiente.

•             Objetivos

1.- Evaluar las modificaciones de marcadores de inflamación: IL-6 y MCP-1 al inicio y luego de 12 meses de un programa de cambios del Estilo de Vida en pacientes con Diabetes tipo 2.

2.-Evaluar la peroxidación lipídica sérica (TBARS) al inicio y luego de 12 meses de un programa de cambios del Estilo de Vida en pacientes  con Diabetes tipo 2

•             Metodología

                   Se incluirán 30 pacientes con diabetes tipo 2 en un periodo de 6 meses, y se realizará un programa de cambios de estilo de vida durante 2 años en el servicio de clínica médica del Hospital Universitario de la UNCuyo.

PROGRAMA DE CAMBIOS DEL ESTILO DE VIDA

PLAN DE ACTIVIDAD FÍSICA

   El plan de intervención de actividad física es lograr que se realice una actividad de tipo “aeróbica” que sume en la semana un volumen ≥ 150 minutos. Además y como complemento, realizar también un volumen ≥ 45 minutos semanales de ejercitaciones de “fuerza”. 

   El programa de actividad consiste en realizar actividad física NO supervizada (en su domicilio). El objetivo será en lograr actividad física de moderada intensidad, 30 minutos de carácter aeróbico 5 días a la semana y 15 mintuos de ejercitaciones de fortalecimiento muscular 3 veces a la semana (día por medio).

DETERMINACIONES BIOQUÍMICAS

Evaluación de los parámetros bioquímicos de rutina

Se evaluará al inicio, a los 6, 12 y 18 meses de iniciado el ejercicio los niveles de: Glucemia en ayunas, HbA1c, lípidos en ayunas de los registros habituales de los pacientes.

Evaluación de marcadores de inflamación

Se evaluará al inicio y a los 12 meses de iniciado el ejercicio:

1.- Determinación de marcadores de inflamación con un kit Citometric beads de BD que permite la medición de IL-6 y MCP-1 en una muestra de suero

  2.-Evaluación de los sustratos reactivos al ácido tiobarbitúrico séricos (TBARS), productos de peroxidación lipídica, como indicativo de estrés oxidativo

La transferencia de los resultados queda asegurada porque la mayor parte de los integrantes del grupo responsable son docentes-investigadores en la carrera de Medicina y del posgrado de Doctorado en Biología y/o en el posgrado de Diabetes, lo que permite la transferencia de conocimiento que se puede generar a partir de la experiencia adquirida en el trabajo de investigación en los temas propuestos, y porque son miembros de sociedades científicas nacionales e internacionales relacionadas con la temática planteada,  con activa participación mediante comunicaciones o publicaciones

Regular exercise protects against almost all causes of mortality, especially cardiovascular disease and type 2 diabetes mellitus. Regular and moderate exercise (training) is capable, by itself, of reducing insulin resistance and cardiovascular risk by interfering with pathophysiological mechanisms at different levels, such as oxidative stress pathways. Some cytokines may be involved in mediating the beneficial effects of exercise and, it has been suggested that they are also responsible for the protection against chronic diseases associated with low-grade inflammation, such as diabetes and atherosclerosis. These diseases have been associated with low degree systemic inflammation, as reflected by high levels of various cytokines. Adipose tissue contributes to the production of TNF-α, which is reflected by higher levels of soluble receptors TNF-α, interleukin -6 (IL-6), interleukin 1 (IL-1) receptor antagonist, and C -reactive protein (CRP). IL-6 might not only be associated with insulin resistance and dyslipidemia, but also would be a marker of metabolic syndrome, rather than a cause, as well. During exercise, IL-6 is produced by muscle fibers through a TNF-independent pathway. IL-6 stimulates the circulating anti-inflammatory mediators levels, such as IL-1ra and IL-10,  which in turn, inhibit the production of proinflammatory cytokines, CRP and TNF-α.

El objetivo general de este proyecto es estudiar la participación de adipoquinas en el desarrollo de la placa de ateroma, en un modelo animal experimental de aterosclerosis asociado a resistencia a la insulina y al estrés oxidativo.
Objetivos específicos:
Se propone estudiar: el papel de las especies reactivas del oxígeno y el sistema NADPH oxidasa (Nox) presente en la pared vascular desde una perspectiva no-tradicional, perivascular de la promoción de la inflamación vascular.
 

Aporte al conocimiento científico:
Contribución al conocimiento de la etiopatogenia de las lesiones vasculares que aparecen en la arteriosclerosis y la resistencia a la insulina a través del estudio del efecto de  sustancias con efecto antioxidante el desarrollo de la placa de ateroma. Se espera comprobar que la intervención farmacológica sea capaz de prevenir o revertir algunos de los cambios morfológicos y funcionales cardiovasculares en modelos experimentales que reproducen patologías humanas, a través de la modificación de sistemas biológicos que están involucrados en su etiopatogeniaLos resultados de este proyecto tendrán, eventualmente, un alto impacto económico-social, por diversos motivos. Las patologías seleccionadas participan en alto grado en la problemática de la salud de la población. Tanto la arteriosclerosis como la la diabetes mellitus no insulino dependiente y el síndrome metabólico presentan una elevada  prevalencia en adultos: 20 al 25% y 4 al 5%, respectivamente. Estos niveles de prevalencia tienden a aumentar a medida que se incrementa la expectativa de vida como consecuencia de los avances en la medicina.
Esta contribución se concretará a través de la publicación en revistas científicas y presentaciones en Congresos de la especialidad.
Formación de Recursos Humanos:
Dirección de Becarios y/o alumnos agregados al grupo y la profundización y actualización de la formación científica de los integrantes del grupo (Dictado de cursos y conferencias, Pasantías).

Aporte a la interdisciplinariedad:
Se está en condiciones de suministrar ratones de la cepa C57 BL6 para ser usados por otros investigadores en  proyectos de otras disciplinas (Área de Fisiopatología para estudios de mecanismos de enfermedades cardiovasculares, Área de Biología Celular, para estudio de cáncer y enfermedad de Chagas)
                                                            

El tejido adiposo es el órgano endocrino más grande y es capaz de producir varios péptidos vasoactivos como las adipoquinas. Casi todos los vasos sanguíneos están rodeados por tejido adiposo perivascular (PVAT). PVAT puede liberar factores de crecimiento y adipoquinas que producirían su acción sobre la capa media de la arteria impactando sobre las células del músculo liso vascular (CMLV). La DM2, la resistencia a la Insulina, el daño vascular, el envejecimiento y la infección pueden afectar a la PVAT, haciendo que adipocitos anormales y la infiltración de células inflamatorias, produzcan un desequilibrio entre los factores de crecimiento derivados de PVAT, lo que lleva al crecimiento de las CMLV dando como resultado el desarrollo de la enfermedad proliferativa vascular, incluyendo la aterosclerosis. Las adipoquinas pueden tener un papel en cada uno de estos procesos y explicar al menos en parte la asociación entre obesidad, resistencia a la insulina, diabetes y enfermedades cardiovasculares. El objetivo  de este proyecto es estudiar la participación de adipoquinas en el desarrollo de la placa de ateroma, en un modelo animal experimental de aterosclerosis asociado a resistencia a la insulina y al estrés oxidativo. 

La transferencia de los resultados queda asegurada porque la mayor parte de los integrantes del grupo responsable son docentes-investigadores en la carrera de Medicina y del posgrado de Doctorado en Biología (PROBIOL UNCuyo), lo que permite la transferencia de conocimiento que se puede generar a partir de la experiencia adquirida en el trabajo de investigación en los temas propuestos, y porque son miembros de sociedades científicas nacionales e internacionales relacionadas con la temática planteada, con activa participación mediante comunicaciones o publicaciones. Participan además de este proyecto jóvenes que están iniciando su carrera como investigadores, mediante el desarrollo de su tesis de doctorado.

El presente proyecto ha sido sugerido por el estudio de Vega et al. (2012a) que mostró la capacidad de los tejidos de Pomacea canaliculata y de un endosimbionte presente en su glándula digestiva (Vega et al., 2006) para la concentración de metales pesados y uranio.

El objetivo específico es desarrollar y evaluar el funcionamiento de un dispositivo flotante (acuario) que permita exponer las ampularias al agua que se quiera monitorear (p.ej., un canal afluente a una planta de potabilización) y que permita mantener las ampularias activas aun en el invierno. Es necesario establecer los tiempos de acumulación y eliminación, así como los mínimos detectables en términos de exposición y las concentraciones.

Referencias:

Vega, I.A., Damborenea, M.C., Gamarra-Luques, C., Koch, E., Cueto, J.A. & Castro-Vazquez, A. 2006. Facultative and obligate symbiotic associations of Pomacea canaliculata (Caenogastropoda, Ampullariidae). Biocell 30: 367-375.

Vega, I.A., Arribére, M.A., Almonacid, A.V., Ribeiro Guevara, S. & Castro-Vazquez, A. 2012. Apple snails and their endosymbionts bioconcentrate heavy metals and uranium from contaminated drinking water. Environmental Science and Pollution Research 19: 3307-3316.

Su significación: Si bien los organismos vivos han evolucionado en relación a la disponibilidad de micronutrientes metálicos la exposición del hombre y otros organismos a concentraciones elevadas de estos elementos tiene distintos efectos tóxicos.

Asimismo, el desarrollo minero e industrial ha aumentado considerablemente la probabilidad de exposición humana a tóxicos metálicos (como el plomo, el mercurio, el cadmio o el arsénico), cuya incidencia era muy baja antes de la revolución industrial, pero que hoy figuran en los primeros puestos de exposición ocupacional o ambiental: entre las 275 substancias consideradas como tóxicos de atención prioritaria (U.S. Agency for Toxic Substances and Disease Registry, http://www.atsdr.cdc.gov/cercla/ 07list.html), el arsénico, el plomo y el mercurio ocupan los tres primeros puestos. Respecto de estos elementos, Mendoza tiene áreas endémicas de arsenicismo crónico, y ha sufrido contaminaciones “agudas” de mercurio en el agua que es potabilizada la Planta Alto Godoy (Capital) en los últimos años. Estas últimas han sido de presunto origen industrial, aunque esto no ha sido nunca aclarado fehacientemente.

Es importante destacar la capacidad de concentrar y retener metales que muestran los endosimbiontes de esta ampularia (Vega et al., 2012a), ya que las emisiones de tóxicos en los cursos de agua no suelen ser continuas ni a pleno día, porque el emisor intenta ocultar su proceder, resultando que la determinación directa de los tóxicos en el agua después de una emisión de corta duración puede dar negativa, debido a su rápida dilución en el curso de agua. Esta dilución no impide, sin embargo, que el tóxico se retenga aguas abajo, por ejemplo, en las piletas de potabilización. Por eso, es importante la bioindicación mediantes “organismos centinelas” como la ampularia y sus endosimbiontes,  que “estando siempre ahí”, concentran el tóxico y lo retienen por cierto tiempo, cuando éste ya ha desaparecido del agua del canal. El desarrollo de un dispositivo como el que se propone en este proyecto tiene la ventaja de permitir la obtención periódica de muestras frescas de materia fecal (en donde se eliminan los endosimbiontes que ya han concentrado el tóxico). Será necesario, por tanto, determinar las concentraciones mínimas detectables, así como los tiempos mínimos de exposición.

Referencia

Vega, I.A., Arribére, M.A., Almonacid, A.V., Ribeiro Guevara, S. & Castro-Vazquez, A. 2012. Apple snails and their endosymbionts bioconcentrate heavy metals and uranium from contaminated drinking water. Environmental Science and Pollution Research 19: 3307-3316.

Se proyecta el desarrollo de un dispositivo para biomonitoreo del agua, aprovechando la capacidad de bioconcentración de metales que muestran los endosimbiontes de la ampularia Pomacea canaliculata. El dispositivo estará diseñado para ser interpuesto en el curso de un canal que alimente una planta potabilizadora, y debe ser capaz de contener unos 20 individuos adultos (unos 300 g de biomasa) en condiciones de temperatura (~24 °C) y con facilidad para alimentar las ampularias y para obtener muestras secuenciales de materia fecal, en donde se eliminan los endosimbiontes con el metal. Se determinarán las concentraciones de metales alcanzadas en la materia fecal después de una exposición breve así como la curva de eliminación en los días subsiguientes. Las determinaciones se harán en condiciones de laboratorio y de mesocosmos. La sobrevida de las ampularias en el dispositivo propuesto se pondrá a prueba en condiciones de campo durante un período que incluya un período invernal (hibernación) entre dos períodos de actividad.    

La calidad del agua de consumo afecta a toda la población, por lo que resulta muy importante el desarrollo de métodos como el propuesto, que permitan una vigilancia realizable y adecuada. El costo de esta investigación es difícil de calcular, ya que es necesario precisar muy bien las concentraciones y tiempos mínimos de exposición, así como de los tiempos de retención, lo que depende en gran medida del azar al momento de escoger los que se van a poner a prueba en un experimento. Por eso, para asegurar la factibilidad del proyecto, disponemos de fondos complementarios de la Nación (FONCYT, CONICET), pero siendo la Provincia la beneficiaria directa, también gestionaremos fondos de organismos provinciales como el Ministerio de Medio Ambiente y Obras Sanitarias Mendoza.

Development of a device intended for water monitoring is proposed. The device will take advantage of the metal bioconcentration ability of the endosymbionts found in the apple snail Pomacea canaliculata. The device will be designed to be installed at the surface of a channel feeding a water purification plant, and should contain ~20 adult individuals (~300 g biomass) maintained in approximately constant temperature (~24 °C). The device should allow feeding the snails easily and obtaining sequential samples of fecal material, where the metal-containing symbionts are eliminated. Metal concentrations in fecal material after a brief metal exposure will be determined, as well as the time course of metal elimination. Determinations will be made in both laboratory and mesocosmos conditions. Survivorship of apple snails in the proposed device will be tested in the field, during a period encompassing winter quiescence (hibernation) between two periods of activity.  

La resistencia a la quimioterapia constituye uno de los principales impedimentos en el tratamiento oncológico. Es por ello fundamental profundizar el conocimiento de las moléculas involucradas, no sólo con el fin de superar dicha resistencia y de optimizar el tratamiento, sino también para poder desarrollar y ofrecer tratamientos más personalizados a pacientes oncológicos. Entre las moléculas que se han vinculado con la resistencia a drogas antineoplásicas, se encuentran las proteínas de golpe de calor (Heat Shock Proteins: HSPs). La proteína HSP70 (HSPA) en los tejidos normales se expresa en forma constitutiva (HSC70 o HSPA8) y además su síntesis puede ser inducida por diversos tipos de estrés celular (HSP72 o HSPA1A). En cambio, las células tumorales usualmente expresan elevados niveles de ambas: HSC70 y HSP72. La proteína HSP72 interviene en el plegamiento y transporte de otras proteínas (“chaperona molecular”), pero además puede modular señales apoptóticas e incluso incrementar el potencial tumorigénico de células tumorales. La sobre-expresión de HSP72 se ha relacionado con resistencia a quimioterapia, metástasis y mal pronóstico en pacientes oncológicos. En otras palabras, a nivel celular, HSP70 puede conferir citoprotección evitando la apoptosis o incrementando la reparación de daños al ADN (HSP70 ha sido vinculada con ciertos mecanismos de reparación del ADN). Las drogas análogas del platino, como el cisplatino, son utilizadas en el tratamiento de tumores sólidos (colon, ovario, testículo). La toxicidad del cisplatino es mediada por la formación de uniones cruzadas (aductos) intra e inter-catenarios en el ADN que afectan su normal funcionamiento. Dichos aductos pueden ser reconocidos por diversas proteínas de reparación, entre ellas los componentes del sistema Mismatch Repair (MMR), cuyas deficiencias se han implicado con resistencia a cisplatino, en especial de hMLH1 o hMSH2. Nuestro grupo ha reportado la colocalización entre proteínas del sistema MMR, hMLH1 y hMSH2, y las proteínas de golpe de calor HSP27 y HSP72 en linfocitos de sangre periférica de personas sanas expuestos in vitro a hipertermia y cisplatino. En células HCT116+ch3 (MMR competentes), expuestas a una hipertermia moderada observamos una acumulación nuclear de HSP27 y HSP72 y la deslocalización de hMLH1 y hMSH2. Recientemente, comprobamos que la proteína HSP72 colocaliza con hMLH1 y hMSH2, en células tumorales de colon HCT116+ch3 expuestas a hipertermia y cisplatino. Sin embargo, el rol de la proteína HSP72 en el funcionamiento del sistema MMR aún no se ha dilucidado, por lo que en este trabajo proponemos los siguientes objetivos: a) determinar la interacción entre las proteínas HSP72, hMLH1 y hMSH2 en células tumorales de colon humanas expuestas a cisplatino; b) verificar si HSP72 modula la reparación del daño inducido por cisplatino; y c) determinar si HSP72 afecta la sensibilidad a cisplatino células tumorales de colon humanas competentes e incompetentes en el sistema MMR.. Para concretar estos objetivos realizaremos: cultivo celular (células de adenocarcinoma de colon humano HCT116, HCT116+ch2, MMR-incompetentes y HCT116+ch3, MMR-competente), co-inmunoprecipitación, comet assay, western blot (HSP72, hMLH1, hMSH2, ERCC1, p73, PARP1 clivado) y Anexina V. Este trabajo nos permitirá establecer las relaciones entre estas moléculas y constituirán el punto de inicio para el estudio de estos marcadores en pacientes oncológicos. Por otra parte, el desarrollo de este proyecto contribuirá a la formación de recursos humanos en nuestro grupo de trabajo.

Resistance to chemotherapy is a major impediment in cancer treatment. It is therefore essential to increase knowledge of the molecules involved, not only in order to overcome this resistance and to optimize the treatment, but also to develop and offer more personalized treatments to cancer patients. Among the molecules that have been linked with drug resistance, are the heat shock proteins (Heat Shock Proteins: HSPs). HSP70 protein (HSPA) in normal tissues is expressed constitutively (HSC70 or HSPA8) and also its expression can be induced by various types of cellular stress (HSP72 or HSPA1A). In contrast, tumor cells often express high levels of both: HSC70 and HSP72. HSP72 is involved in the folding and transport of other proteins ("molecular chaperone"), modulates apoptotic signals and even increases the tumorigenic potential of tumor cells. Overexpression of HSP72 has been associated with resistance to chemotherapy, metastasis and poor prognosis in cancer patients. In other words, at cellular level, HSP70 may confer cytoprotection, preventing apoptosis or increasing DNA repair (HSP70 has been linked to certain DNA repair mechanisms). Platin analogs such as cisplatin, are used in the treatment of solid tumors (colon, ovary, testis). The toxicity of cisplatin is mediated by the formation of intra- and inter-strand crosslinks in DNA that affects its normal function. Such adducts can be recognized by the components of the Mismatch Repair (MMR) system. MMR deficiencies, especially hMSH2 or hMLH1, have been implicated with cisplatin resistance. We have reported the co-localization between hMLH1 and hMSH2, with HSP27 and HSP72 in peripheral blood lymphocytes from healthy subjects exposed in vitro to hyperthermia and cisplatin. In addition, we observed a nuclear accumulation of HSP27 and HSP72 and deslocalization of hMLH1 and hMSH2 in heat shocked HCT116+ch3 cells (MMR competents). Recently, using confocal microscopy, we verified that HSP72 colocalize with hMLH1 and hMSH2 in HCT116+ch3 cells exposed to hyperthermia + cisplatin. However, the role of HSP72 protein in the MMR system has not been elucidated yet. In this work, we propose the following objectives: a) To determine the interaction between HSP72, hMLH1 and hMSH2 in human colon cancer cells exposed to cisplatin, b) To verify whether HSP72 modulates the repair of cisplatin-damage and c) To determine whether HSP72 affects cisplatin sensitivity in MMR proficient/deficient colon cancer cells. To accomplish these objectives we propose the following methodology: cell culture (HCT116, HCT116+ch2, HCT116+ch3 cell lines), co - immunoprecipitation, comet assay, western blot (HSP72, hMLH1, hMSH2, ERCC1, p73, cleaved PARP1) and Annexin V. This work will allow us to establish relationships between HSP72 and MMR proteins and it will constitute the starting point for the study of these markers utility in cancer patients. Moreover, the development of this project will contribute to the training of human resources in our working group.

La fisiopatología de la hipertensión arterial se ha estudiado ampliamente desde el punto de vista de las células endoteliales, músculo liso y más recientemente en la adventicia. Sólo unos pocos de trabajos se centran en el estudio de la función del tejido adiposo perivascular en la patogénesis de la hipertensión arterial.

Por ello, el objetivo general de este proyecto es investigar el papel del tejido adiposo perivascular en el desarrollo de la patología hipertensiva.

Objetivos Específicos:

·      En tejido adiposo perivascular proveniente de animales normotensos, WKY (Wistar Kyoto), e hipertensos, SHR (ratas espontáneamente hipertensas), se evaluará mediante qRT-PCR la expresión de adipoquinas, la expresión de subunidades de la NADPHoxidasa ( Nox1, Nox2 y Nox4) y de factores de inflamación como TNFalfa y C3 complemento.

·      En cultivo de células de músculo liso vascular provenientes de animales WKY adultos(3 meses de edad) tratados con medio condicionado de tejido adiposo perivascular obtenido de animales pre-hipertensos (SHR de 1 mes de edad) e hipertensos (SHR de 3 meses de edad), se estudiará:

(I) El comportamiento proliferativo de las células 

(II) La producción de especies reactivas del oxígeno 

(III) La expresión del sistema NADPH oxidasa, principal fuente de especies reactivas del oxígeno.

Se espera poder contribuir al conocimiento científico y a la formación de RRHH:

Aporte al conocimiento científico:

Contribución al conocimiento de la etiopatogenia de las lesiones vasculares que aparecen en la hipertensión arterial a través del estudio del efecto de  sustancias que secreta el tejido perivascular.

Los resultados de este proyecto tendrán, eventualmente, un alto impacto económico-social, por diversos motivos. La patología hipertensiva participa en la problemática de la salud de la población. La hipertensión arterial presenta una elevada  prevalencia en adultos y estos niveles de prevalencia tienden a aumentar a medida que se incrementa la expectativa de vida como consecuencia de los avances en la medicina.

Aporte a la formación de Recursos Humanos:

A través de la dirección de Becarios y/o alumnos agregados al grupo y la profundización y actualización de la formación científica de los integrantes del grupo (Dictado de cursos y conferencias, Pasantías).

La evidencia acumulada en los últimos años ha demostrado que el tejido adiposo perivascular (PVAT) que rodea la mayor parte de las arterias sistémicas, es un modulador de la función vascular. Factores de relajación y adipocitoquinas secretados por el PVAT atenúan la vasoconstricción producida por diferentes agonistas (norepinefrina, fenilefrina, serotonina, angiotensina II), o inducen vasodilatación de arterias pre-contraídas en varios lechos vasculares de distintas especies animales, incluida la humana. En la hipertensión, la alteración de la función del PVAT ha sido reportada en las arterias mesentéricas de ratas espontáneamente hipertensas (SHR). Sin embargo, aún no se ha establecido si las alteraciones funcionales observadas en las ratas SHR se asocian con cambios estructurales o cambios morfológicos del PVAT y si los mecanismos moleculares subyascentes son dependientes o independientes del endotelio. En este proyecto se propone investigar el papel que ejerce el PVAT en la fisiopatología de la hipertensión arterial. Se propone estudiar los factores secretados por el PVAT y su efecto sobre las células que forman la pared arterial. 

La transferencia de los resultados queda asegurada porque la mayor parte de los integrantes del grupo responsable son docentes-investigadores en la carrera de Medicina y del posgrado de Doctorado en Biología (PROBIOL UNCuyo), lo que permite la transferencia de conocimiento que se puede generar a partir de la experiencia adquirida en el trabajo de investigación en los temas propuestos, y porque son miembros de sociedades científicas nacionales e internacionales relacionadas con la temática planteada, con activa participación mediante comunicaciones o publicaciones. Participan además de este proyecto jóvenes que están iniciando su carrera como investigadores, mediante el desarrollo de su tesis de doctorado.

Accumulated evidence has shown that perivascular adipose tissue ( PVAT ) surrounding most of the systemic arteries  is a modulator of vascular function. Adipocytokines and relaxation factors secreted by the PVAT  attenuate vasoconstriction produced by different agonists (norepinephrine , phenylephrine , serotonin, angiotensin II) ,  and induce vasodilation on pre- contracted arteries from vascular beds of different animal species, including humans . In hypertension  impaired PVAT function has been reported in  mesenteric arteries of spontaneously hypertensive rats (SHR) . However, is not yet been established whether functional abnormalities observed in SHR changes are associated with structural or morphological changes and if PVAT subyascentes molecular mechanisms are dependent or independent of the endothelium. This project aims to investigate the role exerted by the PVAT in the pathophysiology of hypertension and propose to study the factors secreted by the PVAT and its effect on the cells that form the arterial wall.

Objetivos General

El objetivo general de este plan es establecer y caracterizar un nuevo modelo animal para estudiar el efecto de la hipercolesterolemia en la fisiología del ovocito (investigación básica) e iniciar un análisis transversal en mujeres evaluando si el perfil lipídico afecta la fertilidad (investigación aplicada).

Objetivos Específicos        

1. Analizar el efecto de la hipercolesterolemia en la histología ovárica de ratones deficientes en  ApoE : Este objetivo propone comparar la histología ovárica de ratones hipercolesterolémicos y de ratones normales alimentados con dieta grasa y control durante dos meses a partir de que los mismos alcancen la edad reproductiva (8 semanas). Se observará particularmente el número y los distintos estadíos de desarrollo de los ovocitos en el folículo ovárico. Determinaremos y compararemos el número de folículos primordiales, primarios, preantrales y antrales utilizando cortes histológicos teñidos con hematoxilina-eosina. Complementariamente también determinaremos y compararemos los perfiles lipídicos y hormonales.

2. Analizar el efecto de la hipercolesterolemia en la fecundación in vivo de ratones deficientes en ApoE: Si bien se sabe que los ratones deficientes en ApoE son subfértiles, en este objetivo se propone analizar la tasa reproductiva de estos animales luego de haber recibido la dieta grasa durante dos meses.

3.Analizar el efecto de la hipercolesterolemia en la función ovárica en mujeres: Este objetivo propone comparar ovarios de pacientes dislipidémicas (clasificación ATPIII)  y pacientes con perfiles lipídicos normales en etapa fértil (18 a 35 años). Se observará mediante ecografía transvaginal el número y tamaño de folículos en pacientes pareadas de los dos grupos, en forma transversal. Se dividirán las pacientes según edad y perfil lipídico. Se tendrán en cuenta otras variables metabólicas y hormonales que pudieran alterar la fertilidad.

En relación al objetivo general de este proyecto se espera establecer y caracterizar el ratón deficiente en Apolipoproteína E (ApoE KO) como un nuevo modelo animal para estudiar el efecto de la hipercolesterolemia en la fisiología del ovocito (investigación básica)  y en salud reproductiva humana (investigación aplicada)

Si bien se sabe que las alteraciones en el metabolismo del colesterol pueden afectar la fertilidad femenina, se desconoce cuáles son los mecanismos que producen estas alteraciones. Este proyecto propone, en primera instancia, estudiar el impacto de la hipercolesterolemia sobre la histofisiología ovárica y la fertilidad utilizando las ventajas de un modelo animal, y en segunda instancia, propone iniciar un análisis transversal en mujeres evaluando si el perfil lipídico afecta la fertilidad. Para el trabajo en ratones se propone utilizar dos cepas de ratones: ratones normales C57BL6, que no presentan alteraciones lipídicas, y ratones deficientes en apolipoproteína E (Apo E KO), que desarrollan una hipercolesterolemia severa. Una vez alcanzada la madurez sexual, ratones hembras de cada cepa serán divididos en dos grupos: uno, recibirá una dieta normal y el otro, recibirá una dieta rica en grasa. Al término de dos meses de administración de la dieta, los ratones serán sacrificados en la tarde del proestro para extraer suero y ovarios. En suero, se determinará colesterol y hormonas esteroidales. Los ovarios serán procesados para su análisis histológico con tinción hematoxilina-eosina. Independientemente, ratones hembras de los distintos grupos y tratados del mismo modo, serán apareados con machos fértiles para estudiar el impacto de la hipercolesterolemia en la fertilidad. Para el trabajo en humanos, se estudiarán mujeres en etapa fértil. Se determinará el perfil lipídico y hormonal, y se realizarán ecografías ginecológicas para evaluar la función ovárica. La importancia de este proyecto radica en que permitirá analizar el efecto de la hipercolesterolemia en la foliculogénesis y su impacto en la fertilidad en un modelo animal y en pacientes humanos.

Los resultados obtenidos serán transferidos mediante publicaciones en revistas científicas con referato, presentaciones a congresos y simposios y en la docencia ejercida en nuestra Universidad y en el Hospital Universitario. Durante el desarrollo de este proyecto se formarán recursos humanos (tesinistas, becarios e investigadores). Se espera también poder contribuir a la salud reproductiva humana implementando nuevas estrategias de tratamiento. Los resultados obtenidos serán base para nuevas líneas de investigación aplicada en  reproducción humana, ya sea con fines conceptivos o anticonceptivos.

Although it is known that alterations in cholesterol metabolism can affect female fertility, the mechanisms that produce these changes are unknown.This project proposes, first, to study the impact of hypercholesterolemia on ovarian and fertility histophysiology using the advantages of an animal model, and second, to initiate a cross-sectional analysis in women to analyze whether the lipid profile affects fertility. To work with mice we will use two strains of mice: wild type C57BL6 mice, which do not exhibit lipid abnormalities, and mice deficient in apolipoprotein E ( Apo E KO ), which develop severe hypercholesterolemia. Once the mice have reached sexual maturity, female mice of each strain will be divided into two groups: one, will receive a normal diet and the other, will receive a high-fat diet. After two months of diet administration, the mice will be sacrificed on the afternoon of proestrus to obtain serum and ovaries. In serum, cholesterol and steroid hormones will be determined . The ovaries will be processed for histological analysis with hematoxylin - eosin staining. In addition, female mice of different groups and treated in the same way, will be paired with fertile males to study the impact of hypercholesterolemia on fertility. To work with humans, women in fertile stage will be selected. We will determine the lipid and hormonal profile, and gynecological ultrasound scans will be used to assess ovarian function. The importance of this project is that it will analyze the effect of hypercholesterolemia on folliculogenesis and its impact on fertility in an animal model and in human patients.

Completar el mapa de distribución de esporas de CPNB en suelos de Argentina.

Analizar posibles discordancias que puedan interpretarse como medida de la deficiencia del diagnóstico de botulismo del lactante en la región a estudiar.

<p 18pt;"=""> Con los resultados obtenidos se espera:

1. Ampliar el conocimiento de la distribución de esporas de CPNB en suelos de Argentina
2. Relacionar la distribución de esporas de CPNB con la prevalencia de BL.
3. Estimar posibles deficiencias en el diagnóstico de BL en la región a estudiar.
4. Transferir los resultados mediante comunicaciones en reuniones científicas y publicaciones.
5. Promover vínculos con las autoridades de salud y sociedades centíficas para difundir los resultados y lograr mayor precisión en el diagnóstico diferencial de los sindromes neurológicos del infante compatibles con BL
6. Programar estrategias de vigilancia epidemiológica y prevención

Se intenta completar los estudios de prevalencia de esporas de clostridios productores de neurotoxina botulínica (CPNB) en suelos de las provincias argentinas pertenecientes al Dominio fitogeográfico Chaqueño.  Se intenta comparar la incidencia de casos de Botulismo del Lactante (BL), tomando como referencia los datos registrados en Mendoza, caracterizada por una alta incidencia de la enfermedad, asociada con alta prevalencia de CPBN en muestras de suelo. Se parte del presupuesto que, dadas las características de la transmisión de esta patología, producida por un agente cuyo hábitat natural es el suelo, es de esperar que en las zonas a estudiar se detecte la misma asociación mencionada.

Se tomarán muestras de suelo de San Juan, La Rioja, Catamarca, Tucumán, Salta, Jujuy, Formosa, Chaco, Santiago del Estero, Santa Fe, Córdoba y San Luis. Las muestras se procesarán para la detección de cepas toxigénicas de CPBN, procediéndose luego a su aislamiento y posterior tipificación serológica de sus toxinas. Se estimarán las frecuencias de muestras positivas y la incidencia de cepas de cada uno de los diferentes tipos serológicos. Estos resultados serán relacionados con los registros de casos de esta patología obtenidos de autoridades de salud locales, de Salud Pública de la Nación y de nuestros propios registros, como laboratorio de referencia en Argentina. Con ello se espera: (i) ampliar el conocimiento de la distribución del patógeno en el medio natural de las zonas citadas y la relación con la incidencia de casos de botulismo del lactante (BL) y (ii) analizar posibles discordancias que puedan interpretarse como medida de la deficiencia del diagnóstico de BL.

<p 18pt;"=""> Los resultados obtenidos se darán a conocer a través de comunicaciones y presentaciones en reuniones científicas nacionales vinculadas con la Biología, Microbiología e Infectología (Reunión Científica Anual de la Sociedad de Biología de Cuyo, Congreso Argentino de Microbiología de la Asociación Argentina de Microbiología), Reuniones Científicas Internacionales sobre la especialidad y publicaciones en revistas científicas. Se pretende promover vínculos con las autoridades de salud y Sociedades Científicas de las regiones estudiadas para concretar reuniones para la difusión de los resultados a fin de lograr mayor precisión en el diagnóstico diferencial de los síndromes neurológicos compatibles con esta patología y comunicar medidas de prevención.

Infant botulism (IB), considered to be an “orphan disease”, is caused by the ingestion of botulinal toxin producing clostridia (BTPC) spores, which colonize large intestine of children between age 2 and 32 weeks, and later production of toxin in situ, producing hypotonia and a descending, symmetric flaccid paralysis.  

IB transmission is under investigation. BTPC spores are distributed to a large extent in nature.

At present, IB is the most frequent clinical form of the human botulism in the world, even Argentina, where 703 IB cases were reported, between March 1982 and December 2012. Mendoza province, belonging to an arid geographic region, has a record of 162 cases in these 31 years. The high incidence of IB in breast milk fed infants with history of no any other complementary feeding suggest that soil is an  important source of infection. Swallowing BTPC spores from the airborne, which exist worldwide in soil and dust, has been propose as the principal route of exposure.

In order to evaluate correctly the risks of this infection it is important to know the distribution of this pathogenic one in soil, his more important natural source. According to our hypothesis, a high number of IB cases would be associated with the high prevalence of BTPC in soil.

Soil samples from Dominio Chaqueño provinces of Argentina will be processed for detection of BTPC spores. Strains will be classified by toxin neutralization test by mouse bioassay. Frequencies of positive samples and their different serologic types will be estimated.

 The results will be crossed with IB records in San Juan, La Rioja, Catamarca, Tucumán, Salta, Jujuy, Fortmosa, Chaco, Santiago del Estero, Santa Fe, Córdoba y San Luis provinces. As Mendoza province has the highest IB prevalence in relation with its population, their values will be taken to define the minimal expected incidence (MEI) of IB in 10 years period in that region.

This work will be useful to enlarge the knowledge about BTPC distribution in Argentina and its relation with IB incidence. Also it will contribute to clarify the mechanism to the transmission of IB in order to schedule strategies of epidemiologic alertness and prevention.

El presente proyecto propone el estudio de 230 individuos no relacionados que habitan áreas urbanas de Mendoza mediante la tipificación de 46 INDELs autosómicos informativos de ancestralidad.

En esta población se buscará determinar la composición genética rastreando la existencia de componentes aborígenes, caucásicos y africanos. Por otro lado, se arrojará luz a la historia de entrecruzamientos que se dieron hasta llegar a la actualidad etnográfica y se podrá determinar el grado de mestizaje de nuestra población.

Se analizará:

1-         La contribución de los grupos ancestrales (aborígenes, caucásicos y africanos) a la población actual de la provincia.

2-         Se determinará la distancia genética existente entre la población de Mendoza y otras poblaciones.

3-         Se determinarán todos los parámetros estadísticos tanto de interés molecular, como de interés genético-poblacional derivados de los resultados obtenidos

4-         Se realizarán comparaciones con resultados de las poblaciones urbanas de otras provincias de nuestro país.

5-         Se crearán bases de datos de referencia para cada uno de los sistemas analizados para cada población, que resultan de vital importancia tanto para estudios Genético Antropológicos como para estudios de asociación.

A partir de los resultados de los proyectos de investigación anteriores y de investigaciones sobre otras poblaciones de nuestro país, el presente proyecto buscar brindar precisiones sobre la composición genética de nuestra población.

En la actualidad nuestro grupo logro conocer la proporción en la que han contribuido las matri y patrilineas de los tres grupos ancestrales que participaron en la construcción de la actualidad etnográfica de nuestra provincia. Esto nos permitió saber que la gran mayoría de la líneas maternas de nuestra población son de origen Amerindio y la de las líneas paternas de origen europeo. Además, se demostró un importante aporte de los africanos que, además de haber sido traídos como esclavos, constituyeron una importante proporción de la población local durante el paso del ejército liderado el Gral. San Martín en su campaña libertadora. A esto se le suma que Mendoza fue un punto importante de comercio de esclavos a Chile luego de la declaración de libertad de vientres y abolición de la esclavitud en nuestro país.

Con estos antecedentes el presente proyecto buscar conocer el grado de mestizaje derivado de más de 400 años de historia de entrecruzamientos, movimientos poblacionales, inmigraciones y migraciones internas.

Por último, se espera que además de corroborar como aportantes mayoritarios a nuestra población a los Nativos Americanos y a los caucásicos europeos, verificar el papel que jugaron los esclavo africanos en la conformación de la realidad etnográfica de Mendoza.

La población de Mendoza es altamente heterogénea, resultado de casi cinco siglo de interacción entre los diferentes grupos étnicos que conformaron la población actual, Nativos Americanos que se asentaron en  esta región hace aproximadamente 7 a 8 mil años, colonos europeos, arribados a partir de 1560, y africanos que llegaron como esclavos y conformando el Ejército Libertador liderado por el Gral. San Martín.

El presente estudio busca determinar la proporción de mestizaje o Admixture de la población urbana de la Provincia de Mendoza, utilizando Marcadores autosómicos Informativos de Ancestralidad (autosomal AIM´s: Ancestry-Informative Markers). Los resultados obtenidos serán comparados con los resultados previos de nuestro grupo, derivados del análisis de marcadores uniparentales (ADN mitocondrial y cromosoma Y) en la misma población.

Un total de 230 individuos no relacionados, de zonas urbanas de la Provincia de Mendoza, serán analizados mediante 46 INDELs autosómicos (marcadores de inserción/deleción) informativos de ancestralidad.

Los resultados que se obtengan van a ser difundidos en Congresos y Reuniones científicas tanto nacionales como internacionales, y serán publicados en A partir del estudio de poblaciones, tanto “caucásicas” urbanas como nativas, se puede generar información valiosa para diferentes disciplinas. Por un lado, para disciplinas como la genética de poblaciones y la genética forense, pudiendo generarse bases de datos de interés.

Además, esta información puede ser importante para entender los procesos históricos que llevaron a la realidad demográfica actual de Mendoza, como así también comprender los procesos que influenciaron en la forma que se dio el poblamiento de la misma, colaborando con disciplinas como la Antropología, Historia, Ciencias sociales, etc.

Por otro lado, estos conocimientos ayudarán a entender la realidad étno-histórica, que junto a los aportes ya existentes en esta y otras áreas del conocimiento, nos ayudara a construir una mejor y más justa sociedad, especialmente con las comunidades originarias de nuestro país.

Por último, esta investigación va a brindar información valiosa en el área de la salud pública, ya que son cada vez más los estudios que demuestran una asociación de una importante cantidad de patologías y el origen étnico y, sumado a esto, la diferente reacción a los fármacos de éstos grupos, pudiendo significar un avance de significancia  para estudios en Farmacogenética.

Mendoza's population is highly heterogeneous as a result of almost five century of interaction between the different ethnic groups that made up the current population; Native Americans who settled in this region for about seven thousand years; European settlers arrived by the beginning of 1560; and Africans who arrived as slaves and forming the “Ejército Libertador” led by General San Martin.
This study aimed to determine the proportion of admixture of urban population of the Mendoza Province, using autosomal Ancestry-Informative Markers (AIM´s). The results will be compared with previous results from our group, derived from analysis of uniparental markers (mtDNA and Y chromosome) in the same population.
A total of 230 unrelated individuals from urban areas of the Mendoza Province, will be analyzed by 46 INDELs autosomal (insertion / deletion markers) ancestry informative.
Finally, this project aims to corroborate the previous results, in addition to representing the first comprehensive study aimed to know the genetic contribution of our province and one of the few studies of its in Argentina.

a.    Poner en marcha la técnica de tipificación del alelo HLA B*5701.

b.    Determinar de forma prospectiva la presencia del alelo HLA B*5701 en pacientes HIV+ y calcular las frecuencias poblacional y génica de dicho alelo.

c.    Comparar las frecuencias poblacional y génica del alelo HLA B*5701 en pacientes HIV+ con las publicadas en otros estudios de Argentina y otros países.

d.    Evaluar la progresión a la enfermedad a lo largo del tiempo de seguimiento en los pacientes que resulten HLA B*5701 positivos mediante el registro de los resultados de CV y Recuento de LT CD4+ realizados periódicamente en todos los pacientes HIV+. Este objetivo no podrá ser completado en el transcurso de los 2 años que dura el proyecto pero se continuará posteriormente.

El estudio de pacientes HIV+ de Mendoza permitirá el cálculo de las frecuencias poblacional y génica del alelo HLA B*57 y B*5701 en el grupo evaluado. Dichas frecuencias poblacionales podrían diferir de los  valores hallados en las distintas poblaciones.

A su vez se podrá corroborar si los pacientes HIV+ portadores del alelo HLA B*5701 se comportan como LTNP, mediante la determinación de CV y recuento de LT CD4+, de acuerdo a lo descripto en la bibliografía.

El abacavir (ABC) es un fármaco utilizado en el tratamiento de la infección por el Virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) en combinación con otros agentes antirretrovirales como parte del tratamiento de gran actividad o TARGA.

Aproximadamente 4% al 9% de los pacientes infectados con el HIV tratados con ABC pueden desarrollar una reacción de hipersensibilidad (RHS) que usualmente ocurre dentro de las 6 primeras semanas de terapia con ABC.

Desde el año 2002, se ha reportado una fuerte asociación entre RHS al ABC y el alelo HLA B*5701. A partir de estos hallazgos, se ha demostrado la utilidad del tamizaje de dicho alelo como prueba farmacogenética para predecir el riesgo de desarrollar RHS debida al ABC. Esto ha permitido disminuir drásticamente el riesgo de desarrollar una RHS en pacientes tratados con este medicamento.

Por otra parte, se ha reportado también que los pacientes HIV+ portadores del alelo HLA B*5701 se comportan como progresores lentos de la infección para desarrollar el Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) que es la etapa más avanzada de la infección, como se demuestra a través de la determinación periódica de carga viral para HIV (CV)que en estos casos se mantendría baja  y el  recuento de Linfocitos T CD4+ (LT CD4+) que se mantendrían altos a lo largo de los años a partir del diagnóstico.

En base a estos antecedentes, se plantea el presente trabajo para determinar, de forma prospectiva, la presencia del alelo HLA B*5701 en pacientes HIV+ de Mendoza y calcular las frecuencias poblacional y génica del mismo. Dichas frecuencias se compararán con otras poblaciones de Argentina y del mundo.

Nos proponemos incluir por lo menos 100 pacientes HIV+ que no hayan recibido terapia antirretroviral que incluya ABC, que asistan al Laboratorio de Inmunología del Hospital Central de Mendoza. Se realizará la tipificación HLA B*5701 mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa con cebadores específicos de secuencia (PCR SSP). En aquellos individuos que resulten positivos para dicho alelo, se evaluará la progresión de la infección a la enfermedad mediante el registro de la CV y el recuento de linfocitos TCD4+.

El diseño del trabajo está dirigido a conocer la prevalencia del alelo HLA B5701 en la población estudiada y como consecuencia de ello mejorar la selección de terapias antirretrovirales en pacientes HIV+ de Mendoza mediante el empleo de la Tipificación HLA B*5701 como prueba farmacogenética. Esto permitirá un tratamiento más racional de los pacientes con infección por HIV, ya que al permitir prevenir el desarrollo de RHS por ABC optimizará la adherencia al tratamiento a largo plazo al minimizar los efectos adversos al tratamiento. Esto redundará en una mejor calidad de vida de los pacientes. Además, se podrá corroborar el comportamiento biológico como progresores lentos en aquellos pacientes que resulten HLA B*5701 positivos, según lo descripto en la bibliografía.

A nivel Académico Científico:

 * Comunicación en Reuniones Científicas

 * Participación en Actividades Científicas de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNCuyo.

 * Participación en Actividades Científicas del Hospital Central de Mendoza

 * Publicación de los resultados.

A nivel Asistencial:

 La actividad asistencial que se desarrolla en el Instituto de Inmunología se realiza en colaboración con el servicio de Inmunología del Hospital Central de Mendoza, centro de referencia regional para el diagnóstico y tratamiento de pacientes con patologías inmunológicas, con el Programa PAPSI (Programa de asistencia y Prevenciòn del Sida) y con InCAIMen (Instituto Coordinador de Ablación e Implantes de Mendoza), éstos dos últimos del Ministerio de Salud de Mendoza. Consideramos importante poder lograr una efectiva interacción entre médicos, bioquímicos y técnicos como parte del equipo de trabajo.

- Beneficiarios

El diseño del trabajo está dirigido a mejorar la selección de terapias antirretrovirales en pacientes HIV+ de Mendoza mediante el empleo de la Tipificación HLA B*5701 como prueba farmacogenética. Esto permitirá un tratamiento más racional de los pacientes con infección por HIV, ya que al prevenir la RHS por ABC optimizará la adherencia al tratamiento a largo plazo y evitará la presentación de efectos adversos no deseados del tratamiento.  Esto redundará en una mejor calidad de vida de los  pacientes estudiados y en mayor seguridad para los médicos al momento de prescribir el tratamiento.

Abacavir (ABC) is a drug used to treat human immunodeficiency virus (HIV) infection in combination with other antiretroviral agents as part of the Highly Active Antiretroviral Treatment (HAART).
Approximately 4% to 9% of patients infected with HIV treated with ABC develop a hypersensitivity reaction (HSR) that usually occurs within the first 6 weeks of therapy.
Since 2002, a strong association between HSR induced by ABC and HLA B*5701 has been reported. From these findings, it has been demonstrated the usefulness of this allele as a pharmacogenetics screening test to predict the risk of HSR due to ABC, reducing the HSR in patients treated with this drug.

Moreover, it has been reported that HIV + patients carrying the HLA B*5701 behave as Long Term Non Progressors to Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) as demonstrated by the periodic determination of level of viral antigens (viral load, VL) and CD4+ T cells count.
Based on this background, the aim of this work is to determine prospectively the presence of HLA B*5701 in HIV+ patients from Mendoza and to calculate genic and population frequencies of this allele. These frequencies are going to be compared with other populations of Argentina and the world.

HIV-positive ABC-naive patients referred to Immunology Laboratory of the Hospital Central de Mendoza will be enrolled. HLA B*5701 typing will be done by PCR SSP. Individuals carrying this allele will be evaluated for the progression of the disease by recording the VL and CD4+ cells count.
This work is designed to improve antiretroviral therapies in HIV-positive patients of Mendoza by the use of HLA B*5701 typing as pharmacogenetic test. This will allow a more rational treatment of patients with HIV infection and that preventing the HSR induced by ABC. This will optimize the adherence to long-term treatment and result in improved patient’s life quality. Furthermore, we will be able to corroborate the slow progressors status in patients that are positive HLA B*5701, as described in the literature

-Se incluirá el análisis ético de las propuestas  que se ofrezcan y se difundirá su metodología  de análisis.

El presente trabajo aplicará el método comparado y triangulación de fuentes. Ha sido diseñado para responder a los cuestionamientos planteados y para determinar cuáles son las necesidades sociosanitarias de los niños y sus familias y a partir de los resultados, efectuar recomendaciones sobre las medidas más adecuadas para contribuir a satisfacerlas, a partir del involucramiento responsable de todos los actores involucrados.

Chronicle pediatric disorders and terminal situations impact not just over kids suffering, but their family and society in general. Consequences suffered by the illed child may vary over the clinic and patient´s age. We have actually gaps that evidence that are no appropiate records about these serious disorders, we don´t exactly know how many others are in suffer, added to the lack of coordination with other health centers and no standardized diagnosis, treatments and patients tracing.

The present work will enforce to apply a compared and triangulation method. It has been designed to answer all kind of questions to determine social and sanitary needs for the illed kid and family, and from those results, create appropiate recommendations about actions to satisfy those needs, from the responsible commitment of every person involved around that child.      

La mayoría de los estudios indican que los efectos cardioprotectores de la melatonina se deberían a sus propiedades antioxidantes, sin embargo datos previos obtenidos en nuestro laboratorio, corroboraron este efecto pero a su vez demostraron que también inducen cambios electrofisiológicos que podrían ser mediados por la activación de sus receptores, la PKC y los canales KATP. Mediante el uso de bloqueantes selectivos de estos últimos, esperamos demostrar que todos ellos están involucrados en el mecanismo antiarrítmico de la melatonina.

La melatonina, hormona de la glándula pineal, además de su conocido efecto como inductora del sueño, también se ha comprobado que posee propiedades antioxidantes, antihipertensivas, antiinflamatorias y antiarrítmicas. Conocer los mecanismos involucrados en esta última propiedad es el objetivo principal de nuestra investigación.

Recordemos que las arritmias severas se desencadenan por la acción de diferentes factores que las gatillan y otros que contribuyen a mantenerlas. Entre los primeros se destaca la producción de radicales libres y la melatonina podría ejercer su acción antiarrítmica a través de su efecto antioxidante. Sin embargo se ha demostrado que la melatonina también es capaz de activar receptores de membrana con un efecto antiadrenérgico y además, modular distintas vías intracelulares. De relevancia para el estudio de las arritmias se encontraría la vía que involucra la proteína quinasa C (PKC) y los canales de potasio regulados por ATP (KATP), ya que estos tienen importantes efectos electrofisiológicos.

Trabajaremos en corazones aislados de rata sometidos a isquemia regional y al momento de la reperfusión administraremos melatonina. Para evaluar las vías arriba mencionadas, realizaremos el bloqueo de los receptores de melatonina con luzindol; el bloqueo de la PKC con cheleritrina; el bloqueo de la apertura de los canales KATP con glibenclamida y compararemos con los resultados obtenidos con esmolol, un bloqueante adrenérgico.

Dilucidar si estas vías mediadas por receptores participan en el mecanismo antiarrítmico podría ser de utilidad en el tratamiento y prevención de las arritmias a nivel clínico.

The results generated could contribute to a better understanding of the cardioprotective and electrophysilogical effects of melatonin

1- Caracterizar la vesícula (fagosoma modificado) donde reside Neisseria gonorrhoeae en células epiteliales polarizadas y no polarizadas, y su relación con las proteínas Rabs y sus efectores

2- Analizar las consecuencias de la infección para el transporte intracelular de la célula infectada y eventos de depolarización 

Los resultados obtenidos en el desarrollo de este proyecto permitirán definir más claramente la compleja maquinaria proteica que regula el tráfico vesicular a lo largo de la vía fagocítica y que resulta en la degradación intracelular del patógeno fagocitado. Neissieria gonorrhoeae es uno de los dos agentes bacterianos de transmisión sexual más diseminados en el mundo, ubicándose en importancia y número de casos detrás de Chlamydia trachomatis, nuestro principal objeto de estudio en el laboratorio. La investigación de ambos agentes afianzará nuestra posición como laboratorio de referencia en el estudio de enfermedades infecciosas de transmisión sexual.  La infección por Neisseria gonorrhoeae causa una respuesta inflamatoria en el tracto urogenital, seguida de una alteración de la mucosa, asociada a un incremento en la susceptibilidad al HIV tipo I. Además, la susceptibilidad a infecciones crónicas es un problema predominante en mujeres, debido a la naturaleza asintomática comúnmente asociada con cervicitis gonocócica y su subsiguiente propagación en el tracto genital superior. Esta infección ascendente ocurre en el 45% de las mujeres infectadas, y puede resultar en enfermedades inflamatorias pélvicas y bloqueos en las trompas de Falopio, generando infertilidad y/o embarazos ectópicos. Grandes esfuerzos han sido puestos en la investigación de las etapas tempranas de la invasión de N. gonorrhoeae en las células huésped. Sin embargo, las etapas más tardías de la invasión han sido pobremente caracterizadas. Descifrar el rol de ciertas proteínas como Rab39a, Rab39b y proteínas Rab características de distintas organelas (Golgi, endosomas de reciclado, endosomas tempranos y tardíos), así como algunos de sus efectores, en el desarrollo del fagosoma donde residen las bacterias será de gran utilidad para conocer los requerimientos del nicho intracelular donde se reproducen, el ciclo de vida de estas bacterias y su comportamiento para sobrevivir y parasitar las células que las hospedan. Cabe destacar que el ciclo de vida de esta bacteria no ha sido claramente demostrado, y podría ser revelado como resultado de nuestras investigaciones. El remodelamiento de la membrana fagosomal es crucial para una exitosa maduración fagosomal y la degradación del microorganismo fagocitado. Más aún, el reciclaje desde el compartimiento fagocítico es necesario para una eficiente presentación de antígenos y una efectiva respuesta inmune. Es evidente que numerosos microorganismos han adquirido la capacidad de modificar en forma selectiva el tráfico vesicular, de modo de generar una vacuola amigable donde reproducirse y crecer. Se propone difundir y discutir los resultados producto de este proyecto en el ámbito académico universitario y en el marco de reuniones científicas de sociedades de la especialidad. Se espera lograr la publicación de los resultados obtenidos durante este estudio en forma de artículos científicos originales en revistas internacionales de prestigio.

Los microorganismos patógenos han desarrollado diversas estrategias para sobrevivir y parasitar las células infectadas. Las Neisserias son bacterias capaces de manipular la maquinaria molecular de la célula hospedadora para evitar su degradación por fagocitosis e interferir con la respuesta inmune. De este modo, estas bacterias promueven su persistencia y replicación intracelular, al igual que otras bacterias patógenas como Chlamydia trachomatis, Salmonella, etc. Las GTPasas Rabs son moléculas de la célula eucariota esenciales para el control del transporte de vesículas intracelulares y de la vía fagocítica. Es por esta razón, que muchos microbios alteran el reclutamiento de estas proteínas a la membrana fagosomal como una estrategia de supervivencia, y así tergiversan la vía fagocítica normal, y evitan ser degradados en el fagolisosoma. El objetivo general de este proyecto es “caracterizar la maquinaria molecular utilizada por Neisseria gonorrhoeae para su supervivencia intracelular”. Se utilizará la tecnología de DNA recombinante y técnicas de microscopía de última generación. El conocimiento de las estrategias utilizadas por N. gonorrhoeae para modificar en forma selectiva el tráfico vesicular y generar un compartimento intracelular amigable donde crecer y reproducirse, permitirá diseñar nuevas herramientas farmacológicas complementarias a los antibióticos convencionales. Esta nueva generación de fármacos tendrá como blanco la relación microorganismo patógeno-célula hospedadora, e intentará restituir la capacidad de la célula hospedadora para eliminar las bacterias invasoras por fagocitosis, evitando de esta manera, la supervivencia y multiplicación intracelular de estos patógenos. 

El impacto de las enfermedades infecciosas sobre la salud de la población, en especial en países con menor capacidad económica, es muy alto. Más aún, el crecimiento de la inmigración desde países con menor desarrollo socio-económico, hacia países del primer mundo, hacen prever una posible expansión de la enfermedad hacia estas últimas regiones. La creciente resistencia a los antibióticos utilizados para su erradicación aumenta el riesgo de diseminación de la gonorrea. Este proyecto se desarrollará en el área de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Médicas, por lo que el apoyo a este proyecto redundará en directo beneficio de todos los integrantes de esta área, apoyando la consolidación de polo de investigación en dependencias de la Facultad. El desarrollo de este proyecto comprende el uso de diversas metodologías y técnicas que permitirán un adecuado entrenamiento y formación de estudiantes de postgrado que estén cursando su doctorado. Además, la colaboración con grupos en el extranjero, principalmente en Francia, Alemania e Irlanda, permitirá el intercambio de estudiantes, becarios y docentes, quienes mediante pasantías y visitas, podrán desarrollar parte del proyecto en dichos laboratorios. El plan de trabajo propuesto está en estrecha relación con los planes de tesis doctorales de los integrantes de este proyecto. Estos trabajos finales de tesis doctoral serán defendidos en el Programa de Doctorado de Biología de la Universidad Nacional de Cuyo en los próximos tres años. Los integrantes de este proyecto son docentes (rentados y ad-honorem) de la Universidad Nacional de Cuyo, participando en los cursos de grado: De las Moléculas a la Célula y Biología Molecular, y postgrado: Biología Celular y Molecular para alumnos de Doctorado del PROBIOL. Además, periódicamente organizamos cursos internacionales sobre temas de bioquímica, biología celular, inmunología y microbiología, lo que enriquece la oferta institucional de cursos de postgrado en Mendoza. En particular el estudio de la relación patógeno intracelular-célula hospedadora es un campo que a nivel internacional ha surgido y se ha desarrollado en forma notable en los últimos años y ocupa un nivel destacado en los congresos internacionales. A nivel nacional somos el único grupo que está estudiando la relación que establecen las Neisserias con la célula hospedadora, más aún, uno de los pocos grupos en el mundo que estudian conjuntamente Chlamydia y Neisseria en su relación con el huésped. La disponibilidad de fármacos útiles para el tratamiento de infecciones causadas por patógenos intracelulares es una tarea pendiente a nivel mundial. El conocimiento generado en este proyecto podrá ser extrapolado a otros microorganismos que alteren en forma semejante la vía fagocítica. Además del impacto sobre la salud y la industria farmacéutica, el estudio de nuevos fármacos capaces de controlar este tipo de infecciones será de gran relevancia y aplicación en el área de la microbiología y farmacología. Los resultados de este proyecto permitirán realizar aportes originales al conocimiento de esta área de estudio a nivel internacional, y continuar con la formación de recursos humanos que contribuirá en gran medida a la consolidación de la investigación en estos temas a nivel regional. 

Neisseria gonorrhoeae is using the trafficking machinery orchestrated by RabGTPases, for the blocking of phagosome maturation and pathogen degradation. To assess our objectives, we will take advantage of recombinant DNA technology and advanced techniques of confocal microscopy. The knowledge of the strategies used by Neisseria for selectively altering the vesicular trafficking and for generating a friendly environment to growth and multiply, will help to the development of new tools for the treatment of these infections. 

Los Objetivos del trabajo son dosar el ácido micofenólico en paciente transplantados lo cual hasta el momento no se realiza en nuestro medio y evaluar los efectos adversos relacionándolo con los niveles de la medicación de modo de poder establecer de si el dosaje de este inmunosupresor contribuye a un mejor cuidado del paciente tal como es habitual en otras partes del mundo.

La monitorización  de los niveles del inmunosupresor ácido micofenólico esperamos que genere,al igual que con los otros inmunosupresores, un seguimiento más adecuado del paciente trasplantado y se transforme en un instrumento apto tanto para evaluar la correcta dosis a administrar que asegure la supervivencia del injerto como evite los efectos adversos ya evidenciados que produce su sobredosificación.

Se pondrá en marcha el dosaje de Acido micofenólico (MPA) metabolito del inmunosuopresor Micofenolato sódico de uso habitual tanto en pacientes transplanatados renales como intratoráxicos pero que en nuestro medio no se utiliza la dosificación de sus niveles en sangre para evaluar tanto su eficacia (seguridad compliance del paciente y suspensión del tratamiento por efectos colaterales mayores )como los efectos adversos fundamentalmente gastrointestinales y hematológicos.

Para su dosaje utilizaremos cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) con detección UV.

El estudio será prospectivo, observacional con la evaluación de al menos unos 200 nuevos pacientes transplantados.

Los pacientes serán divididos en transplantados renales e intratoráxicos ( ya sea cardìacos o pulmonares ) y a su vez en pediatricos (hasta 12 años) y adultos .

Se evaluara la eficacia y seguridad de dosis estandars de Micofenolato sodico y mofeti Micofenolato  en éstos nuevos pacientes

Considerando en los transplantados renales la Función Renal mediante el IFG obtenido por fórmula MDRD y la proteinuria ,los efectos adversos gastrointestinales ( dispepsia, ùlceras ,hemorragias digestivas ) y hematológicos y por supuesto la supervivencia del injerto ,se tendrán en cuenta también las posibles asociaciones con otros inmuno supresores que se la hayan indicado al paciente  : Tacrolimus ( FK) , everolimus .etc.

En los pacientes transplantados intratoráxicos también se evaluará mortalidad  ,eficacia del tratamiento (rechazo celular agudo a través de BETP (Biopsias endomiocárdicas transyugulares percutánea ) desarrollo de enfermedad vascular del injerto efectos adversos gastrointestinales, hematológicos ,como la asociación con otros fármacos inmunosupresores compliance del paciente al tratamiento y suspensión del mismo por efectos adversos mayores.

De obtenerse las conclusiones esperadas se podrían establecer nuevos protocolos de seguimiento del paciente transplantado tratado con el inmunosupresoresor Mofetil micofenolato  ,lo que redundaría en un manejo más ajustado de las dosis suministradas y un mejor cuidado clínico  de éstos pacientes, evitando complicaciones clínicas , mejorando la calidad de vida y aumentando la supervivencia de nuestros pacientes

               Teniendo en cuenta que mas del 70% de los receptores de órganos de la Provincia de Mendoza pertenecen al Sistema Público, sea    Instituto Coordinador de Ablación e Implante de Mendoza (INCAIMEN), Obra Social de Empleados Públicos (OSEP), Programa Federal de Salud (PROFE) e Instituto Nacional de Seguridad Social de Jubilados y Pensionados (PAMI), esto impactaría en toda la Salud Pública al generar un uso mas controlado de un inmunosupresor masivamente utilizado por los trasplantólogos,redundando en una mejora de todos los parámetros de seguimiento,sobrevida del injerto y del paciente transplantado.
 

Description

We will start up the dosing of mycophenolic acid (MPA) an metabolit of the salts immunosuppressive mycophenolate used daily for patients with renal transplantation as well as intrathoracic, but in our field the dosification of their levels in blood it is not used for evaluating it’s efficacy or the adverse effects mainly gastrointestinal and haematological.

For the dosing we will use liquid chromatography of high resolution (HPLC) with detection UV.

The study will be prospective, observational with an evalutation of 200 new transplant pacient, at least. 

Pacients will be divided into kidney transplants and intrathoracic (cardiac or pulmonary) and also in pediatric patients (up to 12 years old) and adults.

Objetivo general:

• Desarrollar formas farmacéuticas de neurotoxinas botulínicas tipos A y B para uso clínico humano y animal, de adecuadas: pureza, potencia, actividad específica, estabilidad y esterilidad.

Objetivos específicos

1. Completar los estudios de formulación y estabilidad de la NTBo tipo A purificada.
2. Producir y purificar NTBo tipo B.
3. Controlar la pureza de los productos finales (NTBo A y B):
   1. Separar las distintas subunidades de los complejos tóxicos multi-proteicos de distinto peso molecular (LL, L, M y S).
   2. Caracterizar las subunidades en base a sus propiedades físicas y biológicas.
4. Adecuar la preparación de NTBo A y B para uso terapéutico.
5. Liofilizar las NTBo A y B en viales conteniendo las dosis terapéuticas adecuadas.
6. Determinar la estabilidad a distintas temperaturas (ambiente y refrigeración).
7. Asegurar las condiciones de esterilidad del producto final.
8. Redactar el manual de procedimientos, buenas prácticas de manufactura y bioseguridad.
9. Diseñar protocolos para la validación clínica en animales y humanos.
10. Comenzar los trámites para la obtención de la autorización de la ANMAT para iniciar las pruebas de validación clínica.

1. Obtener preparaciones estables de NTBo A y B:
   1. De distintos PM, de modo de adecuar las formulaciones farmacológicas a diferentes necesidades clínicas (por ej. mayor o menor difusión del producto en la masa muscular).
   2. De elevada pureza (DL₅₀/mg proteína), para minimizar la estimulación antigénica y producción de anticuerpos neutralizantes y aparición de resistencia farmacológica y fallo terapéutico (falta de respuesta clínica).
2. Producto LIOFILIZADO en una formulación de actividad, calidad y duración de acción farmacológica equivalentes a los de mayor circulación en el país, con un costo significativamente menor.
3. Disponer de un fármaco de menor precio, que permita sustitución de la importación y la cobertura de poblaciones con bajo poder adquisitivo y sin obra social.

Este proyecto debe considerarse continuación de los desarrollados entre 2003 y 2009. Si bien en ellos se planteaba la obtención del producto final liofilizado, este objetivo no pudo cumplirse por la no disponibilidad de un equipo adecuado y su elevado costo para adquirirlo. En este momento se está tramitando la importación de un liofilizador de escala piloto y baja producción. Desde el año 1980 se realiza la inoculación intramuscular de NTBo para tratamiento de desórdenes de la tonicidad muscular, principalmente para el tratamiento del estrabismo, blefaroespasmo, tortícolis, disfonías, espasmo hemifacial y otras afecciones^(1-14). La simplicidad del tratamiento lo hace una excelente alternativa a la cirugía no siempre exenta de riesgos o complicaciones. La acción principal es una parálisis muscular flácida, que permite la recuperación de la funcionalidad, que requiere entre 2 y 6 meses para su recuperación (duración de la acción farmacológica). En cuanto al rango terapéutico, la NTBo superaría en seguridad a la mayoría de las drogas. En esta última década el uso de la terapia con NTBo ha experimentado un asombroso crecimiento, con nuevas y múltiples indicaciones, especialmente neurológicas, y se ha convertido en el tratamiento de medicina estética con más rápido crecimiento en su demanda. La propuesta consiste en la producción de una preparación de NTBo tipos A y B, adecuadamente purificadas y estandarizadas, y de óptima estabilidad, para uso humano y animal. Sería ideal obtener preparados que durante la elaboración y almacenamiento la toxicidad no disminuya significativamente (elevada actividad específica: Unidades/mg de proteína), pudieran almacenarse a temperatura ambiente, mantengan mayor tiempo la actividad y con adecuada capacidad de difusión y mínima respuesta de anticuerpos. El efecto no es instantáneo, sino progresivo en los primeros días y óptimo entre 1 y 2 semanas después. Entre 3 y 4 meses más tarde, el efecto empieza a menguar y los músculos vuelven a contraerse. El resultado no es la cura definitiva necesitándose dosis repetidas. Su uso está limitado actualmente por el elevado costo de los productos importados del mercado.

1. Difusión de los resultados mediante publicaciones científicas, comunicación de trabajos en reuniones científicas y conferencias.
2. Transferencia a las autoridades sanitarias (Ministerio de Salud).
3. Talleres de capacitación práctica para médicos para la aplicación de la NTBo en distintas áreas de la clínica médica.
4. Registro de marca y patentamiento (de surgir un nuevo método de purificación o una formulación innovadora).
5. Transferencia a la industria farmacéutica si amerita.
6. Disposición de un producto de calidad, actividad y acción farmacológica equivalente al de mayor circulación en plaza a un precio menor, accesible a una población hoy excluida por los altos costos de los productos en circulación.
7. Ampliación de la cobertura a población de bajos recursos y/o sin obra social.

This project should be considered as continuing of developed between 2003 and 2009. During those years, although the final objective was the lyophilized final product, this goal was not met because of the unavailability of suitable equipment and high cost for us to acquire it. At this time we are handling the import of one freeze dryer equipment, of pilot scale and low production. Since 1980 is being used intramuscular inoculation of BoNT for treatment of disorders of muscle tone, primarily for strabismus, blepharospasm, torticollis, dysphonia, hemifacial spasm, and other neurologic disorders. The simplicity of treatment makes it an excellent alternative to surgery not always without risk or complications. The main action is a flaccid muscle paralysis which allows recovery of functionality, with a duration of drug action about 2 to 6 months. Regarding the therapeutic range (security), the BoNT exceed safety of most drugs. In the last decade the use of BoNT therapy has experienced amazing growth, with many new pharmacologic indications, especially neurological, and has become the treatment of aesthetic medicine with faster growth in demand. Our proposal involves the production of a preparation of BoNT types A and B, properly purified and standardized, and with potency and stability optimal for human and animal use. It would be ideal achieve preparations which during processing and storage: (1) not decreases significantly the toxicity (high specific activity: units / mg protein), (2) that could be stored at room temperature, maintaining longer appropriate activity, and (3) with minimum of diffusion and of antibody response capacity. The effect is not instantaneous, is progressive during the first days and optimal between 1 and 2 weeks later. Between 3 and 4 months later, the effect begins to wane and back muscles to contract. The result is not the ultimate cure, necessitating repeated doses. Its use is currently limited by the high cost of imported products in the market.

Objetivo general: Estudiar los mecanismos celulares y moleculares utilizados por Trypanosoma cruzi durante su ciclo biológico con el fin de reconocer posibles blancos terapéuticos contra la Enfermedad de Chagas.

Objetivos específicos:

1-      Estudiar la participación de la vía autofágica (parasitaria y del hospedador) y del metabolismo de las poliaminas (PA)  durante la invasión, diferenciación y replicación intracelular de T. cruzi.

2-      Estudiar la participación de la vía autofágica en la respuesta inmune innata contra la infección por Trypanosoma cruzi en un modelo murino.

Esta sección se desarrolló en cada uno de los puntos de la sección anterior

La enfermedad de Chagas es una enfermedad endémica en la República Argentina y en toda Latinoamérica. La alta prevalencia de la misma se debe a la rápida diseminación del vector en zonas rurales, a la gran cantidad de individuos infectados no diagnosticados y a que las terapias disponibles para su tratamiento (nifurtimox o benznidazol) son ineficientes, inespecíficas y provocan numerosos efectos secundarios. En este proyecto queremos profundizar el estudio de la participación de la autofagia sobre el proceso de invasión y diferenciación de T. cruzi en el interior de la célula hospedadora (Objetivo específico 1) y sobre la participación de la autofagia en la respuesta inmune innata durante la infección aguda por T. cruzi generada en ratones (Objetivo específico 2). El fin último del proyecto es la búsqueda de nuevos blancos en el parásito,  la célula hospedadora ó el organismo completo que contribuyan al desarrollo de nuevos fármacos más eficientes y específicos contra la Enfermedad de Chagas.

Este proyecto apunta a profundizar en los mecanismos  que gobiernan el curso de la infección por T. cruzi, teniendo como objeto la identificación de blancos, en el parásito, en la célula hospedadora y en el organismo completo que puedan afectar el ciclo de la enfermedad.   Los resultados de este proyecto podrían permitir en el futuro, el desarrollo de tratamientos más eficientes y específicos contra el Chagas que podrían abrir nuevas alternativas en la industria farmacéutica, medida sanitaria fundamental para la Salud Pública de nuestro país, del área endémica y para toda región donde el Chagas se ha vuelto emergente. Por otro lado, el presente proyecto contribuirá a la formación académica y científica de sus integrantes. Los resultados que se obtengan formarán parte de tesis doctorales,  tesis de grado, presentaciones a congresos y publicaciones internacionales.

Chagas disease is a global health problem that is disseminated in Latin America and nowadays is also presented  in some places of Europe and North America. The higher concerns of this disease are the high number of infected and non-diagnosed people and that available therapies are not efficient and produce several side effects. The aims of the present project are the study of the effect of the autophagic pathway in the Trypanosoma cruzi invasion and differentiation process occurred in the host cell. Furthermore, we are also interested in the study of the autophagic participation in the innate immune responses against T. cruzi in mice. The final aim is to found new targets in the parasite, host cell or the whole organism that contribute to develop new therapeutic drugs against thisdisease.

Objetivo general: Estudiar los mecanismos celulares y moleculares utilizados por Trypanosoma cruzi durante su ciclo biológico con el fin de reconocer posibles blancos terapéuticos contra la Enfermedad de Chagas.

Objetivos específicos:

1-      Estudiar la participación de la vía autofágica (parasitaria y del hospedador) y del metabolismo de las poliaminas (PA)  durante la invasión, diferenciación y replicación intracelular de T. cruzi.

2-      Estudiar la participación de la vía autofágica en la respuesta inmune innata contra la infección por Trypanosoma cruzi en un modelo murino.

Esta sección se desarrolló en cada uno de los puntos de la sección anterior

La enfermedad de Chagas es una enfermedad endémica en la República Argentina y en toda Latinoamérica. La alta prevalencia de la misma se debe a la rápida diseminación del vector en zonas rurales, a la gran cantidad de individuos infectados no diagnosticados y a que las terapias disponibles para su tratamiento (nifurtimox o benznidazol) son ineficientes, inespecíficas y provocan numerosos efectos secundarios. En este proyecto queremos profundizar el estudio de la participación de la autofagia sobre el proceso de invasión y diferenciación de T. cruzi en el interior de la célula hospedadora (Objetivo específico 1) y sobre la participación de la autofagia en la respuesta inmune innata durante la infección aguda por T. cruzi generada en ratones (Objetivo específico 2). El fin último del proyecto es la búsqueda de nuevos blancos en el parásito,  la célula hospedadora ó el organismo completo que contribuyan al desarrollo de nuevos fármacos más eficientes y específicos contra la Enfermedad de Chagas.

Este proyecto apunta a profundizar en los mecanismos  que gobiernan el curso de la infección por T. cruzi, teniendo como objeto la identificación de blancos, en el parásito, en la célula hospedadora y en el organismo completo que puedan afectar el ciclo de la enfermedad.   Los resultados de este proyecto podrían permitir en el futuro, el desarrollo de tratamientos más eficientes y específicos contra el Chagas que podrían abrir nuevas alternativas en la industria farmacéutica, medida sanitaria fundamental para la Salud Pública de nuestro país, del área endémica y para toda región donde el Chagas se ha vuelto emergente. Por otro lado, el presente proyecto contribuirá a la formación académica y científica de sus integrantes. Los resultados que se obtengan formarán parte de tesis doctorales,  tesis de grado, presentaciones a congresos y publicaciones internacionales.

Chagas disease is a global health problem that is disseminated in Latin America and nowadays is also presented  in some places of Europe and North America. The higher concerns of this disease are the high number of infected and non-diagnosed people and that available therapies are not efficient and produce several side effects. The aims of the present project are the study of the effect of the autophagic pathway in the Trypanosoma cruzi invasion and differentiation process occurred in the host cell. Furthermore, we are also interested in the study of the autophagic participation in the innate immune responses against T. cruzi in mice. The final aim is to found new targets in the parasite, host cell or the whole organism that contribute to develop new therapeutic drugs against thisdisease.

• Determinar la presencia de estrés oxidativo en las células de la mucosa oral de pacientes sin patología inflamatoria oral.
• Determinar la presencia y variaciones en el estrés oxidativo de células de la mucosa oral de pacientes con patología          inflamatoria oral.
• Determinar la relación entre evolución clínica y variaciones en el estrés oxidativo celular.
• Evaluar la eficacia clínica luego del tratamiento con antocianinas de uva en pacientes con patología inflamatoria oral.
• Determinar si las antocianinas producen variaciones en los niveles de estrés oxidativo de las células de mucosa oral.

Se espera mediante esta investigación poder demostrar que el estrés oxidativo en células epiteliales orales obtenidas mediante citología exfoliativa es objetivable con el método de dihidroetidina, y que existen cambios significativos en el nivel de estrés oxidativo en patologías inflamatorias orales. Además esperamos encontrar que existe una correlación entre el estrés oxidativo medido por el método de dihidroetidina en células exfoliadas y la evolución clínica de los pacientes. Deseamos comprobar que hay una disminución significativa del estrés oxidativo en células epiteliales orales de pacientes con patología inflamatoria oral tratados con antocianinas en relación con otros tratamientos no antioxidantes.

Introducción

Las patologías inflamatorias orales constituyen el motivo de consulta más frecuente en estomatología. El principal objetivo de este proyecto es determinar la utilidad de la determinación del estrés oxidativo en células del epitelio oral obtenidas mediante citología exfoliativa y su variación en patologías inflamatorias orales y con la respuesta al tratamiento con antocianinas.

Material y Métodos

• Se evaluarán pacientes con patología inflamatoria oral y sin ella.
•  Se determinará en cada caso el estrés oxidativo mediante el método de dihidroetidina en citología exfoliativa.
• En los pacientes con patología inflamatoria se tomará muestra de  áreas clínicamente sanas y áreas de mucosa oral con patología inflamatoria evidente.
• Se identificarán las células epiteliales mediante un marcador de superficie de queratinocitos unido a un fluorocromo y se analizará dichas muestras mediante extendidos citológicos y citometría de flujo.
• Se evaluará la respuesta clínica de los pacientes, así como también la variación del estrés oxidativo en los controles sucesivos.

Resultados esperados

• Se espera encontrar variaciones en el nivel de estrés oxidativo en células con lesiones de liquen oral respecto a zonas clínicamente sanas de la mucosa oral del mismo paciente y también en relación con pacientes sanos.
• A un grupo de pacientes con patología inflamatoria oral se le realizará tratamiento con un antioxidante natural, la antocianina de uva; y se evaluarán mediante extendidos citológicos y citometría de flujo de las células exfoliadas pre y postratamiento los niveles de estrés oxidativo y la respuesta clínica de los pacientes.
• Se realizará un análisis comparativo con pacientes sin patología inflamatoria y pacientes con tratamiento convencional.

Los resultados pueden modificar la práctica médica actual estableciendo una nueva estrategia terapéutica, natural, de bajo costo y bien tolerada. Esto permitiría además de reducir los costos en salud, una mayor accesibilidad del tratamiento.

Puede establecerse mediante la medición del estrés oxidativo con dihidroetidina un nuevo método de control evolutivo de la patología que junto con la citometría de flujo lo harían cuantificable y por ende más factible de medición.

Puede servir como base para trabajos posteriores que permitan ampliar el uso de este tratamiento en otras enfermedades.

Se espera que los pacientes que padecen este tipo de patología se vean beneficiados al obtener una mejoría clínica y sintomática y así mejorar su calidad de vida.

La patología oral inflamatoria, especialmente el liquen plano oral, predispone al desarrollo de cáncer oral, con lo cual se deduce que mediante el control evolutivo de estos pacientes y un tratamiento efectivo se actuaría de manera preventiva en la detección y tratamiento temprano del cáncer oral.

La formación de recurso humano representa otro de los beneficios que se espera obtener ya que se contribuirá a la formación de investigadores clínicos y de ciencias básicas sobre una temática poco estudiada en nuestro medio.

Además se espera comunicar estos resultados a profesionales del área de salud a través de la presentación de la información obtenida en este trabajo en eventos científicos y académicos locales (Jornadas de Investigación de la Universidad Nacional de Cuyo) y nacionales. Se prevé además la comunicación de los resultados en revistas especializadas de alto impacto.

Introduction

Chronic mucocutaneous diseases are frecuent in oral medicine. The aim of this study is to determine the oxidative stress in oral epithelial cells obtained by exfoliative cytology. Another objective is to measure its variation in oral inflammatory diseases and the response to anthocyanins treatment.

Material and Methods
- The study will include patients with and without oral inflammatory conditions.
- We will determine in each case oxidative stress in exfoliative cytology by the dihydroethydine method.
- Samples will be taken in ill and clinically healthy areas of the oral mucosa in patients with inflammatory pathology.
- Epithelial cells will be identified by a keratinocyte surface marker attached to a fluorophore and the samples will be analyzed in smears and by flow cytometry.
-We will evaluate clinical response as well as oxidative stress variation in follow-up visits.

Spected results

- We expect to find variations in the levels of oxidative stress in cells of oral lichen lesions regarding clinically healthy areas of the same patient, and also in relation to healthy patients.

- We will perform treatment with a natural antioxidant, the grape anthocyanin, in a group of patients with oral inflammatory disease and evaluate the before and after treatment results. Then we will proceed to a comparative analysis in patients without inflammatory disease and patients under conventional treatment.

El objetivo de este proyecto es estudiar los efectos conductuales de fármacos psicotogénicos en ratas y su correlación con modificaciones moleculares subyacentes. El propósito es ampliar las evidencias aportadas por nuestro Laboratorio en el campo específico de la investigación translacional en modelos de esquizofrenia. Se contemplará la posibilidad de comparar ratas normales y ratas sometidas a trastornos del neurodesarrollo a través de manipulaciones farmacológicas y dietarias, y el papel de la hipoxia neonatal. Se comparará el efecto de drogas psicotogénicas en ratas normales y sometidas a las mencionadas manipulaciones, como modo de inducir predisposiciones e hipersensibilidad a dichos efectos psicotogénicos. Se realizarán curvas dosis respuesta, y se compararán los grupos de ratas normales y tratados con neurotóxicos, pero también con hipoxia e hiponutrición. Se estudiará, en las ratas inyectadas con drogas psicotogénicas, normales y con trastornos del neurodesarrollo, la expresión y localización de las siguientes proteínas: AP-2, AP-1 y AP-180, sinaptobrevina, sinaptofisina, con los correspondientes anticuerpos monoclonales en ratas, comparando controles con aquellas sometidas a tratamiento. El mismo se realizará, fundamentalmente, con antagonistas glutamatérgicos en el cuerpo estriado ventral. Esta manipulación farmacológica ha sido clásicamente vinculada con las psicosis esquizofrénicas (ver Gargiulo y col. 1998, 2005; Acerbo y col., 2002) e inductora de una liberación masiva de catecolaminas (Carlsson y col., 1998), en vinculación con diversos tipos de antagonistas de la transmisión glutamátérgica y dopaminérgica (drogas neurolépticas) en animales sometidos a experiencias conductuales.

Se intentará interferir de modo significativo la cognición y la ansiedad, con sus consiguientes posibilidades de extrapolación translacional. Se espera que estos hallazgos guarden relación con las modificaciones en las proteínas en estudio, como hemos observado en estudios preliminares. Se estudiará asimismo la posibilidad de que estas modificaciones sean potencialmente modificables por los medicamentos de uso clínico en las psicosis. Esto tiene un interés clínico dado que hemos propuesto trastornos sensoperceptuales como homólogos a las trastornos perceptuales de las psicosis esquizofrénicas (Gargiulo y col., 1998, 1999, 2005; Gargiulo, 2003; Gargiulo y Landa, 2004; Martínez y col., 2002 a y b, Acerbo y col., 2002; Baiardi y col., 2007), la caída de los niveles de ansiedad como modelo de aplastamiento afectivo como síntoma residual de las esquizofrenias (Martínez y col., 2002), y las modificaciones inducidas en un test de exploración secuencial como trastorno cognitivo homólogo de las esquizofrenias (Baiardi y col., 2007). Asimismo, las variables del neurodesarrollo permitirán una aproximación experimental a través de modelos a la predisposición a las psicosis generadas por tóxicos y déficits alimentarios observada en estudios poblacionales. Esta predisposición se verá reflejada en una mayor susceptibilidad a las drogas psicotogénicas en animales sometidos a tratamientos con hipoxia, tóxicos o déficits nutricionales, comparados con ratas controles. Se utiliza métodos sencillos y realizables, que permiten aproximaciones claras y válidas.

Las principales líneas de nuestro Laboratorio han estado clásicamente relacionadas con modelos de esquizofrenia basados en la disminución del tono glutamatérgico en animales (Gargiulo y col., 1998, 1999, 2005; Gargiulo, 2003; Gargiulo y Landa, 2004; Martínez y col., 2002 a y b, Acerbo y col., 2002; Baiardi y col., 2007). Nuestros estudios fueron iniciados en pacientes esquizofrénicos alos que se aplicó pruebas neuropsicológicas (Del Vecchio y Gargiulo, 1992). De este modo hemos inducido modelos de síntomas cognitivos (Baiardi y col., 2007), positivos (Gargiulo y col., 1998, 1999; Martínez y col, 2002ª; Baiardi y col., 2007) y negativos de esquizofrenia (Martínez y col., 2002b). En el presente estudio se continuará con el estudio de la transmisión glutamatérgica en estos modelos (hipótesis glutamatérgica) y se estudiará el papel de otros sistemas de neurotransmisión (fundamentalmente noradrenérgicos y opoides) y su posible interacción en el Nucleus Accumbens Septi (NAS) en ratas. Continuaremos asimismo estudios iniciados en nuestro laboratorio con manipulación farmacológica de estructuras que proyectan a NAS, particularmente córtex prefronal (PFC), amígdala (AMY) e hipocampo (Hip) con el objeto de explicar las interacciones que se dan en esta estructura (Llano y col., 2012, 2013). Se estudiará el efecto del bloqueo farmacológico de NAS sobre la expresión y localización de proteínas de cubierta y sinápticas en diversas zonas cerebrales, partiendo de evidencias clínicas anteriores en pacientes esquizofrénicos (Browning y col., 1993) y modificaciones inducidas por tratamiento neuroléptico en la expresión de un gene de proteínas sinápticas en neuronas estriatales (Eastwood y col., 1994). En el presente proyecto se estudiará en ratas controles y tratadas la expresión y localización de las proteínas AP-2, AP-1 y AP-180, sinaptobrevina, sinaptofisina, con anticuerpos monoclonales. Se utilizará un bloqueo glutamatérgico del NAS, clásicamente vinculado con las psicosis esquizofrénicas (Gargiulo y Landa, 2004) e inductor de una liberación masiva de catecolaminas (Carlsson y col., 1998) e hiperfunción cortical (Baiardi y col., 2007).

Como en trabajos anteriores, se espera continuar ampliando los hallazgos previos en torno a la hipótesis glutamatérgica de las psicosis esquizofrénicas, a la que ya hemos aportado evidencias en trabajos previos, de modo tal que nos acerquemos a posibles transferencias al tratamiento psicofarmacológico de las mismas, siendo los posibles beneficiarios tanto los pacientes esquizofrénicos como la industria farmacéutica que podrá generar fármacos más específicos que los actuales. Debe señalarse también el hecho de que el presente proyecto permitirá la formación de recursos humanos, lo cual constituye un beneficio adicional alos anteriormente señalados.

This project aims to extend the prior knowledge provided by our group in the field of translational research schizophrenic psychoses. In the present study the effects of pharmacological psychotogenic treatments will be evaluated in behavioural and molecular experiments in rats. Cognition and anxiety, as models of positive and negative symptoms of schizophrenia, will be modeled and evaluate in animals. Behavioural and molecular effects induced by drug administration will be studied. We shall try to use normal and neurodevelopmentally disabled rats (early malnutrition and methyl-azoxymetanol acetate, MAM administration), aiming to induce neurodevelpmental disorders. Cognitive and anxiety tests will be used aiming to study behavioural effects of drugs, and membrane proteins will be measured in Nucleus Accumbens Septi (NAS) and related areas as a molecular correlate of drug effect on behavior. It could be expected an increase of psychotomimetic drugs sensitivity in disabled rats. It has a relevant projection to addictive behaviors to drugs and schizophrenic psychoses, suggesting an important role for early biological traumatic events in these disorders, and giving additional cues for the explanation of the addiction and the physiopathology of psychiatric illness.

El análisis bioquímico de las proteínas que se encuentran en las neuronas (y sus dominios submembranales) en desarrollo y estados patológicos forma parte de otros proyectos actuales o previstos en este laboratorio. La investigación de la compartmentalización de estas mismas proteínas servirá para aumentar y extender dichos proyectos, al mismo tiempo que utilizar los estudios funcionales involucrados en los otros proyectos para interpretar la significancia de los resultados de la investigación de la formación de complejos supramoleculares. Asimismo, el objetivo general es estabelecer la relación entre la formación de complejos de señalización en neuronas después de axotomía de los nervios espinales en circumstancias que permiten o no la regeneración. Los objectivos específicos para el próximo período de investigación son:

(i) Comparar el efecto de una una lesión periférica (axotomía ciática) y una lesión central (rizotomía) sobre la expresión de proteínas que promuevan o inhiben la regeneración.

(ii) Analizar el transporte central y periférica de dichas proteínas y su incorporación en complejos supramoleculares.

(iii) Identificar manipulaciones que pueden alterar los procesos identificados en (i) y (ii) para abrir nuevos caminos clínicos en la promoción de recuperación funcional después de injuria.

En los últimos años muchos estudios han sido dirigidos a la función de complejos supramoleculares en las vías de traducción de señales. No obstante, todavía se entiende poco de la relación entre la formación de dichos complejos, la modificación de proteínas por acilación (especificamente la S-palmitoilación) y patalogías en el sistema nervioso. Aca proponemos investigar estes relaciones usando modelos de injuria traumático y tóxico en el sistema nervioso, conjunto con los procesos de regeneración. Esperamos ver como se modifica los complejos en situaciones patalógicas, abriendo puertas a posibles intervenciones para aliviar las consecuencias de injuria y promover recuperación. Vamos a intentar integrar estes estudios con proyectos de transferencia clínica en el marco de la Facultad de Medicina de la UNCuyo.

     Los dominios supramoleculares son complejos submembranales que se forman en asociación con la membrana plasmática y tienen un papel importante en el control normal de funciones fisiológicas y en procesos patalógicos. El objetivo de este proyecto es contribuir a nuestro conocimiento de cómo la compartimentalización subcelular de proteínas de señalización, específicamente su presencia en dominios submembranales conocidos como “rafts”, contribuye a los procesos de degeneración y regeneración del sistema nervioso. En trabajos previos (incluyendo el los proyectos anteriores de SeCTyP) hemos mostrado cambios en la compartimentalización de varias proteínas de transducción de señales durante: i) sinaptogénesis, ii) después de tratamiento crónico con alcohol seguido de períodos de abstinencia, iii) tratamiento con factores de crecimiento y iv) después de axotomía. Proponemos que estos cambios están relacionados con los papeles específicos de dichas proteínas durante la injuria y recuperación.

     Varias de las proteínas que pueden asociarse de manera transiente con dominios submembranales sufren modificaciones covalentes por lípidos. Existe evidencia creciente indicando que una forma de la acilación de proteínas (S-palmitoilación) las dirige a dominios submembranales, incluyendo estructuras similares a rafts. En este proyecto, vamos a enfocar en el estudio de compartmentalización de proteínas asociadas con la regeneración en modelos específicos de daño traumático al sistema nervioso. Particularmente, hemos desarrollado modelos de axotomía periférica de los nervios ciático y safeno en la rata, que permiten la regeneración de los axones dañados con eventual recuperación funcional. Al contrario, un daño equivalente a las mismas neuronas al nivel a donde entran en el sistema nervioso – en la raíz dorsal de la médula espinal – no permite regeneración en el entorno del sistema nervioso central. Tenemos actualmente en desarrollo un modelo experimental para comparar las consecuencias de dichas dos tipos de daño sobre la compartmentalización de proteínas asociadas con la regenerción y su incorporación en complejos supramoleculares.

Dilucidaremos la importancia fisiológica de esta relación comparando los modelos de degeneración y regeneración que tenemos funcionando en el laboratorio, es decir de axotomía de nervios espinales y de intoxicación con alcohol, y en colaboración con otros investigadores de la Universidad Nacional de Cuyo (hipoxia, isquemia, dolor neuropático). Este proyecto es fundamentalmente una continuación del proyecto anterior (06/J394) con modificaciones según los hallazgos nuevos que obtuvimos durante 2011-2013, descritos en el informe final del proyecto anterior.

Se prevee cuatro vías principales de difusión para los resultados de este proyecto:

(1) Publicación de los resultados de la investigación en revistas con referato reconocidas internacionalmente.

(2) Presentación de los trabajos en congresos profesionales nacionales e internacionales, como las reuniones anuales de la Sociedad Argentina de Neuroquímica y las Jornadas locales de la Facultad de Ciencias Médicas y de la Universidad Nacional de Cuyo.

(3) Mantenimiento de un proyecto adecuado para la formación en invesigación de estudiantes de la Carrera de Medicina hasta graduados de la misma carrera, lo cuál dará oportunidades para estudiantes con orientación a la investigación de hacer tesinas o tesis de maestría y/o doctoral.

(4) Vinculación del proyecto con estudiantes en la Carrera de Medicina para que aprenden conceptos de Investigación y asociarlo con proyectos de Integración Clínica.

Supramolecular domains are submembrane complexes that form in association with the plasma membrane and play an important role in the normal control of physiological functions and in pathological processes. The goal of this project is to expand our understanding of how protein subcellular compartmentalization, particularly their presence in submembrane domains known as rafts, contributes to the processes of degeneration and regeneration in the the nervous system. In earlier work (including our previous SeCTyP projects) we have demonstrated changes in compartmentalization of signal transduction proteins in: i) synaptogenesis, ii) chronic exposure to alcohol and acutely after withdrawal, iii) treatment with neuronal growth factors and iv) after axotomy. We propose that these changes are associated with the specific roles that these proteins play during injury and recovery. A number of these proteins associate transiently with submembrane domains and undergo covalent modifications with lipids. There is substantial evidence that this process of acylation, specifically S-palmitoylation, can direct proteins towards membrane domains, including structures similar to rafts.

The focus of this project will be the study of the compartmentalization of proteins associated with regeneration in specific models of nervous system damage. Sciatic nerve axotomy in the rat is followed by regeneration and functional recovery. Conversely, an equivalent lesion of the central branch of the same neurons - in the spinal dorsal root - does not result in regrowth into the central nervous system. We are currently comparing the consequences of these two types of nervous system injury on the compartmentalization of regeneration-associated proteins and their incorporation into supramolecular complexes. We will elucidate the physiological importance of this relationship using models of degeneration and regeneration that are available in our laboratory, including the aforementioned axotomies, and toxic responses to chronic alcohol exposure; in collaboration with other researchers in the Universidad Nacional de Cuyo we will investigate the effects of hypoxia, isquemia and the development of neuropathic pain. This project is a continuation of the former SeCTyP project (06/J394) with modifications based on the result produced therein, described in the final report for 2011-2013.

A-Detectar: 

- casos positivos de infección por T. cruzi en las comunidades estudiadas. Posterior derivación al Programa Provincial de Chagas, para su tratamiento y seguimiento médico.

-focos domésticos y/o peridomésticos de infestación por vectores, para luego determinar    la prevalencia de T. cruzi en triatominos.

B- Aplicar la técnica de PCR en el diagnóstico de la infección por T. cruzi:

-en contenido intestinal de T. infestans: en paralelo a la búsqueda microscópica. 

Considerando los hallazgos de casos positivos de infección por T. cruzi en niños en edad escolar, obtenidos en trabajos previos y además, el hecho de incluir en este trabajo a toda la población que habita dichas áreas de estudio, sin límite de edad, esperamos detectar un importante número de individuos infectados por T. cruzi. De la misma manera, esperamos detectar un importante número de viviendas infestadas por el vector. Esto determinará la notificación al programa provincial de control de la enfermedad de Chagas a fin de que se realice la inclusión de estos individuos positivos y se consideren las medidas de control epidemiológico que sean necesarias implementar.

La aplicación de la técnica de PCR en contenido intestinal de los triatominos nos permitirá comparar esta técnica molecular con la técnica de observación microscópica.

Por otra parte, al extender los estudios seroepidemiológicos a toda la población que habita las áreas previamente evaluadas nos permitirá determinar las áreas prioritarias para las acciones futuras a desarrollar con el fin de contribuir con el objetivo de lograr frenar la transmisión vectorial de la infección por T. cruzi en nuestra provincia. 

La enfermedad de Chagas es un problema grave de salud pública; en América Latina 90 millones de personas están en riesgo de contraer la infección. Según la OPS,  en Argentina habría 7.300.000 personas expuestas, 1.600.000 infectadas y más de 300.000 afectadas por cardiopatías de origen chagásico. Según un diagnóstico de situación de las provincias endémicas realizado por INCOSUR, 2011, Mendoza junto con Chaco, Formosa, Santiago del Estero y San Juan se encuentra en el grupo de provincias con alto riesgo de transmisión vectorial. Esta situación es considerada históricamente como un problema rural. En trabajos sero/epidemiológicos previos realizados en zonas urbanas del Gran Mendoza, detectamos casos positivos de infección por Trypanosoma cruzi en menores de 15 años sin diagnóstico previo, por lo que no habían sido tratados. Además, en estas mismas poblaciones revelamos la existencia de distintos factores de riesgo epidemiológicos, tales como la presencia de viviendas mixtas, palomares, gallineros, avistaje de vinchucas en los domicilios y peridomicilios. Nos proponemos completar el abordaje serológico realizado incluyendo a toda la población que habita en las proximidades de las áreas ya evaluadas. Así como también realizar la vigilancia entomológica mediante la búsqueda activa de Triatoma infestans en domicilio y peridomicilio, para luego determinar si estos vectores se encuentran parasitados por T. cruzi. Por otra parte, nos proponemos aplicar la técnica de PCR en el diagnóstico entomológico comparando esta técnica con la de observación microscópica directa del contenido intestinal de los triatominos para la detección de T. cruzi en dichas muestras. Metodología: Se realizarán métodos serológicos de HAI, ELISA y/o IFI para determinar seroprevalencia y microscopía óptica para investigar infección de T. infestan por T. cruzi. Paralelamente se realizará PCR en contenido intestinal de los vectores. Los resultados de esta investigación permitirán incluir a los casos detectados en Programas Provincial de Chagas para su tratamiento y seguimiento médico y en el mediano a largo plazo para establecer factores de riesgo que determinen la priorización de departamentos o áreas para las acciones futuras a desarrollar. Por último, la difusión de los datos en el ámbito científico también contribuirá a promover la prevención de esta enfermedad en nuestra comunidad.

Se brindará información respecto de la importancia de la enfermedad de Chagas a toda la comunidad incluida en el estudio, la cual se verá beneficiada al implementar un proyecto que propone trabajar para prevenir y controlar la transmisión vectorial de la enfermedad de Chagas.

Asimismo, los resultados de esta investigación permitirán incluir a los casos detectados en Programas Provincial de Chagas para su tratamiento y seguimiento médico y en el mediano a largo plazo para establecer factores de riesgo que determinen la priorización de departamentos o áreas para las acciones futuras a desarrollar.

Por último, la difusión de los datos en el ámbito científico también contribuirá a promover la prevención de esta enfermedad en nuestra comunidad.

Chagas disease is a serious public health problem. In Latin America, 90 million people are at risk of infection. According to PAHO, Argentina has 7,300,000 people exposed, 1,600,000 infected and more than 300,000 affected with heart disease caused by Chagas. According to a situation analysis of the endemic provinces conducted by INCOSUR (2011), Mendoza as well as Chaco, Formosa, Santiago del Estero and San Juan are in the group of provinces with high risk of vector transmission. This situation was considered historically as a rural problem. In previous serological and epidemiological studies made in urban zones of Mendoza, we detected positive cases of Trypanosoma cruzi infection in children under 15 years previously undiagnosed, so had not received treatment. Furthermore, we revealed the existence of different epidemiological risk factors, such as the presence of mixed housing, henhouse, pigeon house, the presence of “vinchucas” in homes and surroundings. We intend to complete the serological approach including the entire population living in the vicinity of the areas already assessed. And also make entomological surveillance by actively seeking Triatoma infestans at home and around dwellings. Then determine whether these vectors are parasitized by T. cruzi. Moreover, we propose to apply PCR in the entomological diagnosis and compare this technique with direct microscopic triatomine intestinal content examination for T. cruzi detection. Methods: We will perform serological methods: HAI, ELISA and/or IFI to determine seroprevalence; and optical microscopy to detect T. cruzi infection of T. infestans. Parallel PCR will be performed in intestinal content. The results of this research will include cases detected in Chagas Provincial Programs for treatment and medical monitoring. Thus, in the medium- to long-term willestablish risk factors that determine the prioritization of departments or areas for future action to develop. Finally, the dissemination of the scientific data will also help to promote the prevention of this disease in our community.

OBJETIVOS

1- Caracterizar la participación de GTPasas Rab, especialmente Rab11, en el transporte intracelular de Brucella abortus

2- Comparar el comportamiento intracelular de la cepa virulenta de Brucella abortus con las cepas vacunales: S19 y RB51, a través de microscopía electrónica y confocal.

3- Estudiar el efecto de inhibidores de la kinasa Akt en la sobrevida intracelular y la replicación de de las distintas cepas de Brucella abortus

La línea de investigación sobre “Bases moleculares del transporte endocítico” fue iniciada por el Dr. Luis Mayorga en 1987 en U.S.A. quien caracterizó el proceso tanto a nivel morfológico como bioquímico. En mi trabajo de Tesis Doctoral, realizado bajo la dirección del Dr. Mayorga, continúe dichos estudios y la tesis fue concretada con éxito en el año 2003. En los últimos años, con la Dra. Teresa Damiani, hemos orientado nuestra investigación hacia el estudio del proceso de fagocitosis, en particular, en células infectadas con microorganismos patógenos intracelulares. Tanto el Dr. Mayorga como la Dra. Damiani participan como investigadores consultos del presente proyecto de investigación, y participarán en el diseño de los protocolos experimentales y en la interpretación de los datos obtenidos.

Este proyecto constituye la continuación de nuestros estudios previos, cuyos resultados han sido comunicados en numerosas presentaciones que han logrado reconocimiento en diferentes reuniones científicas y publicaciones. De hecho, el objetivo es complementar y completar los resultados obtenidos hasta el momento, en particular con inhibidores específicos de kinasas y Rab11. De este modo, intentaremos comprender fehacientemente el trastorno en la maduración del fagosoma provocado por Brucella como una estrategia de sobrevida intracelular.

Además, de publicaciones científicas o de divulgación general, este proyecto permitirá el desarrollo técnico y la formación de recursos humanos especializados en Biología Celular y Molecular, y en Microbiología.

Ciertos microorganismos son capaces de evadir las defensas del hospedador y convertirse en patógenos intracelulares. La fagocitosis es el principal mecanismo de defensa inespecífico celular, y es fundamental para el desarrollo de una respuesta inmune específica adecuada. Es por ello, muy importante para erradicar ciertas infecciones, conocer el modo en que dichas bacterias alteran la fagocitosis y las proteínas de la célula eucariota encargadas de regular el transporte en la vía fagocítica.

En estudios previos hemos demostrado que Brucella es capaz de ingresar en macrófagos, manteniéndose en compartimentos de la vía endocítica: demora la fusión con endosomas tardíos, y si llega a ellos es capaz de resistir el efecto de las enzimas lisosomales.

El objetivo de nuestro proyecto es avanzar en el estudio de los mecanismos moleculares que llevan a la supervivencia de Brucella abortus dentro de fagocitos profesionales y no profesionales.

En particular, estudiaremos como Brucella altera proteínas clave para el control del transporte intracelular (especialmente en la vía fagocítica) de la célula infectada. Estas proteínas llamadas Rab, pertenecen a la familia de GTPasas monoméricas y  hasta el momento hay más de 60 descriptas. Cada Rab se localiza en un compartimiento intracelular determinado y regula una etapa específica del transporte intracelular. Las proteínas Rab están activas en estado GTP y en la vía de activación participan ciertas kinasas. Utilizaremos inhibidores específicos de dichas kinasas para analizar su efecto en la maduración de fagosomas normales y de fagosomas conteniendo estas bacterias. Los resultados obtenidos serán de utilidad, en el futuro, para el diseño de fármacos para el tratamiento de infecciones ocasionadas por Brucella.

Dada la naturaleza del producto a obtener, la transferencia se hace mediante:

1-            Difusión de los resultados a través de publicaciones en revistas de nivel nacional e internacional.

2-            Presentaciones en congresos nacionales e internacionales.

3-            Colaboración con otros grupos, principalmente de Argentina, dedicados al estudio de diversas parasitosis intracelulares. Principalmente el grupo de investigación dirigido por el Dr. Luis Samartino, Director del  Instituto de Patobiología de INTA Castelar Buenos Aires y referente de Zoonosis para FAO

The phagocytosis, the principal unspecific cellular mechanism of defense, is subverted by some microorganisms to avoid the lethal effects of the immune response. In previous studies we have demonstrated that Brucella is capable of invading macrophages, being kept in compartments of the endocytic pathway. This bacterium resides in early endosomes, delays the merger with late endosomes, and if it comes to them is capable of resisting the effect of the lysosomal enzymes. The transport along the phagocytic pathway is controlled by a family of small GTPases named Rabs. The active form of Rabs is bound to GTP. The cycling GTP/GDP is controlled by several proteins, among them, the Akt kinase. The aim of our project is to advance in the study of the molecular mechanisms used by Brucella to survive inside professionals and not professionals phagocytic cells. Our hypothesis is that the bacterium alters the recruitment and activation of certain Rabs in order to generate a convenient intracellular niche where survive and replicate. In our laboratory we have developed experimental protocols that allow us to identify intracellular Brucella at the different steps of digestion. We have determined that the destruction of the virulent alive strain is inhibited in macrophages. This bacterium resides in early phagosomes that fuse less with lysosomes. However, in the few cases of phagolysosome formation, the bacterium resists the action of the degradative enzymes. Since Rab GTPases are key host proteins that regulate vesicular trafficking and phagosome maturation, we are interested on unravel the participation of Rab11 in the fate of Brucella-containing phagosomes. In addition, we will investigate the effect of some Akt inhibitors in the replication and infectivity of Brucella. This knowledge will be of interest to improve the treatment of infections caused by virulent Brucella.

Objetivo General

Analizar el campo de la medicina tradicional en la provincia de Mendoza, desde un enfoque interdiciplinario, que articula a la Antropología, la Etnografía, la Etnobotánica y la Medicina.

Objetivos Particulares

1.    Identificar referentes locales de la medicina tradicional dentro de la zona de estudio.

2.   Comprender los patrones y procesos involucrados en la selección de plantas de valor  medicinal en las poblaciones humanas locales.

3.    Identificar los recursos vegetales autóctonos o introducidos utilizados con diversos fines en la medicina  tradicional

4.   Analizar la utilización de medicaciones tradicionales no herbales (productos animales o minerales) en la medicina tradicional mendocina.

5.   Detectar  la  aplicación de procedimientos tradicionales utilizados por los practicantes de la medicina tradicional mendocina

6. Inquirir la opinión y percepción que tienen los pacientes acerca del rol del practicante de la medicina tradicional en la comunidad, y su efectividad en la salud.

7. Detectar la presencia y categorización de creencias o manifestaciones simbólico-espirituales en la medicina tradicional de la población.

8.  Indagar sí se transmite el conocimiento de la medicina tradicional en forma oral de generación en generación.

Uno de los retos más importantes consiste en integrar las experiencias y resultados de los estudios de caso y experiencias logradas de manera integrada con las comunidades locales. Esto con el fin de aportar a los estudios sobre medicina tradicional desde perspectivas integradoras de lo humano, fortalecer el desarrollo de las investigaciones de campo en todos los niveles, y  visibilizar los aportes de las comunidades locales en la relación salud- enfermedad.

En este proyecto se pretende realizar un relevamiento y diagnóstico de la situación, pero consideramos que la continuidad en el desarrollo de estos objetivos aportará a conseguir un vínculo entre la ciencia moderna (rigor metodológico, globalización…), y la antigua relación sanador enfermo (saberes ancestrales cultura local…) potenciando la integración de resultados beneficiosos para la comunidad en general.

Entendemos a la Medicina Tradicional como la suma total de conocimientos, herramientas y prácticas basadas en las teorías, creencias y experiencias indígenas de diferentes culturas, explicables o no, utilizadas en el mantenimiento de la salud, así como en la prevención, diagnóstico, mejoría o tratamiento de enfermedades mentales o físicas.

Los integrantes del equipo de trabajo se encuentran actualmente desarrollando diferentes actividades que conllevan a sentar precedente sobre las prácticas de uso de la flora medicinal y la recuperación del conocimiento botánico tradicional, como así también  la utilización de otras medicaciones tradicionales no herbales, diferentes terapias basadas en procedimientos tradicionales, distintos tipos de relación sanador-enfermo y diferentes modelos antropológicos etiológicos y terapéuticos.

El proyecto que se propone llevar adelante tiene dos líneas, por un lado vincular la relación salud y enfermedad vista desde la medicina tradicional y la ciencia moderna. Por otro, mediante un estudio interdisciplinario y sistemático analizar las profundas transformaciones, y los valores que la población tiene en relación con las medicaciones y prácticas tradicionales, dado que esta tradición está desapareciendo con vertiginosa rapidez. Entendemos que los registros sobre la significación cultural, la valoración y el uso de las plantas medicinales, recuperando los saberes botánicos tradicionales y su  articulación con la medicina convencional, constituye un aporte  tanto  al campo de estudios sobre medicina tradicional, a la difusión de saberes locales diversos en el tema, como a la medicina “oficial” en general.

En el marco de las investigaciones etnográficas que se vienen llevando adelante desde el año 2004 en el secano de Lavalle, como así también de su articulación a experiencias con fundaciones como la de YPF, ha surgido la inquietud y preocupación por parte de la población nativa, de realizar conjuntamente un registro etnobotánico, desde sus diversos potenciales, entre los que se encuentran su valoración y uso medicinal. Dicho registro es reconocido como patrimonio tangible. Como tal, podría incorporarse a futuro como uno de los componentes constitutivos de un archivo local (Museo o Centro de interpretación) con fines educativos y/o turísticos, como una forma de efectivizar la iniciativa nativa de poner en circulación sus tradicionales saberes sobre biodiversidad en otros ámbitos sociales más allá del local.

        Este proyecto involucra a investigadores de tres Unidades Académicas diferentes, con esto se fortalecen los vínculos y la interdisciplina en el marco de la docencia de grado, de posgrado, de la extensión y de la investigación universitarias.

              We understand Traditional Medicine as the sum total of the knowledge, skills and practices based on the theories, beliefs and experiences indigenous to different cultures, whether explicable or not, used in the maintenance of health, as well as in the prevention, diagnosis, improvement or treatment of physical and mental illnesses.  

              The team members are currently developing different activities that lead to precedent practices on use of medicinal plants and traditional botanical knowledge retrieval , as well as the use of other non- traditional herbal medications , different therapies based on traditional procedures , different types of healer -patient relationship and different etiologic and therapeutic anthropological models .
              The proposed project has two lines carry one hand to link the relationship between health and disease seen from traditional medicine and modern science. On the other, using a multidisciplinary and systematic study analyzing the profound, and the values ​​that people have regarding medications and practices, as this tradition is disappearing with dizzying speed . We understand that the records on the cultural significance, assessment and use of medicinal plants, recovering traditional botanical knowledge and its articulation with conventional medicine, is a contribution both to the field of traditional medicine studies, dissemination of local knowledge many in the field, as “official” medicine in general.

Objetivo general                      

Evaluar las secuelas neuroendócrinas y neuroquímicas, inducidas por la exposición prenatal a anfetamina, en respuesta a estrés en ratas hembras adultas y determinar el rol de las hormonas ováricas en este efecto.

Objetivos específicos

1-Evaluar el efecto de la exposición prenatal a anfetamina en la liberación de prolactina y corticosterona inducida por estrés por inmovilización.

2-Establecer el rol de estrógeno y progesterona en las respuestas de prolactina al estrés.

3-Determinar los niveles de expresión del ARNm de los receptores dopaminérgicos D₁, D₂ y D₃ y del transportador de dopamina, DAT, en núcleo accumbens (Nacc) y caudado putamen (CPu). 

Aportar al conocimiento de las alteraciones neuroquímicas provocadas por el consumo de psicoestimulantes durante el embarazo y sus implicancias en las respuestas neuroendocrinas en la vida adulta

Objetivo

Evaluar las secuelas neuroendócrinas y neuroquímicas, inducidas por la exposición prenatal a anfetamina, en respuesta a estrés en ratas hembras adultas y determinar el rol de las hormonas ováricas en este efecto.

Línea de Investigación: Investigación Básica aplicada a la Neuroquímica y Neuroendocrinología

Hipótesis de Trabajo

La exposición prenatal a anfetaminas deja secuelas que se manifiestan en la edad adulta afectando principalmente al sistema dopaminérgico mesocortical. El ambiente hormonal dado por los esteroides ováricos, estrógeno y progesterona modulan estos cambios. El estrés, que acompaña a muchas enfermedades, a través de la liberación de glucocorticoides, incrementa las funciones dopaminérgicas, especialmente en las regiones mesolímbicas e incrementa  la sensibilidad a los efectos reforzantes de las drogas de abuso  aumentando la sensibilidad a las mismas. Prolactina es una hormona que se libera en respuesta al estrés y su liberación también es modulada por la acción de los esteroides ováricos. Los cambios neuroquímicos inducidos por la exposición prenatal a anfetamina modificarían la liberación de prolactina y corticosterona en respuesta al estrés en edad adulta dependiendo del ambiente hormonal dado por los esteroides ováricos.

Metodología: Modelo Animal: Se utilizarán 2 grupos de ratas hembras adultas de la cepa Wistar  con tratamiento prenatal de anfetamina (2.5 mg/kg). Un grupo se usará en el día del estro y otro será sometido a una ovariectomía; 15 días después serán administrados  con estrógeno, estrógeno y progesterona ó aceite de maíz. Ambos grupos de ratas serán sometidos a estrés por inmovilización (2h).

Experimentos: Se medirán los niveles de prolactina y corticosterona por radioinmunoanálisis (RIA). Por Real Time PCR y Western Blot se determinará la expresión de los receptores dopaminérgicos D1, D2 y D3 y del transportador de dopamina, DAT, en núcleo accumbens y caudado putamen.

Resultados esperados

Aportar al conocimiento de las alteraciones neuroquímicas provocadas por el consumo de psicoestimulantes durante el embarazo y sus implicancias en las respuestas neuroendocrinas en la vida adulta 

Transferencia: Hacia la comunidad científica mediante la presentación de resultados en Congresos, Jornadas y publicaciones en revistas de divulgación científica.

Beneficios esperados: 1) Promover la formación de recursos humanos. 2) Profundizar el conocimiento de las secuelas que acarrea la exposición a drogas psicoestimulantes y su impacto en aspectos reproductivos en la edad adulta

Sex steroids exert an important influence on the Central Nervous System during critical periods of development and in the adulthood, referring to the organization and reorganization of neural circuits involved in behavioral and neuroendocrine functions. There is a sexual dimorphism in behavior, cognitive functions and in sexually dimorphic brain areas in vertebrates which depends mainly on the epigenetic actions of gonadal hormones, androgens and estrogens. Moreover, it has been found that sex differences in response to cocaine and amphetamine, evidenced as a behavioral response to increased psychomotor stimulant effects induced by these drugs, depends on the effect of estrogen action. In addition, prenatal exposure to amphetamine induces behavioral and neurochemical sequels in adulthood in both, females and males mainly affecting the dopamine system. The dopaminergic system is closely involved in response to drugs of abuse and also linked to stress responses and the modulation of neuroendocrine functions such as controlling the release of LH and prolactin hormones among others. Prolactin  is released in response to stress and its secretion is also modulated by the action of ovarian steroids. Based on the above evidence, it is very important to evaluate neuroendocrine and neurochemical effects arising from a history of prenatal amphetamine in adult female rats subjected to stress. Neurochemical changes induced by prenatal exposure to amphetamine can modify the prolactin release in response to stress in adulthood depending on the hormonal environment given by ovarian steroids.

Objetivo general

Nos focalizaremos en moléculas lipídicas esenciales y decisivas que participan en la RA durante el proceso exocítico. Pretendemos esclarecer los mecanismos moleculares que involucran esfingolípidos, particularmente la ceramida, en la exocitosis acrosomal y su relación con la maquinaria proteica interviniente. Proponemos además, dilucidar los mecanismos moleculares que regulan la organización de los dominios de PIP₂ en las membranas durante la RA.

Objetivos específicos

1.         Determinar si las ceramidas de diferente largo de cadena carbonada en su residuo de ácido graso inducen exocitosis por sí mismas o afectan la respuesta a diferentes estímulos exocíticos.  En caso que lo hagan, averiguar cómo las ceramidas están involucradas en transducción de señales durante la exocitosis acrosomal.

2.         Determinar si el incremento de la concentración de ceramidas endógenas (ácidos grasos de cadena muy larga) utilizando esfingomielinasas o la disminución de las mismas usando ceramidasas afecta la exocitosis.

3.         Elucidar el rol de proteínas que regulan la producción de PIP₂ y su hidrólisis durante la exocitosis acrosomal.

Desde el punto de vista científico esperamos lograr dos a tres publicaciones en revistas de buen índice de impacto. El proyecto permitirá la formación de recursos humanos: entrenamiento de 2 becarios posdoctorales y avance o finalización de 2 tesis doctorales. Asimismo, los conocimientos adquiridos se volcarán a la comunidad en tareas docentes llevadas a cabo por los integrantes del equipo. Esperamos contribuir al enriquecimiento de la capacidad de la investigación local, implementando nuevos abordajes y técnicas.

La secreción regulada es utilizada por numerosas células eucariotas para la inserción de proteínas y lípidos en las membranas y para liberar hormonas peptídicas y neurotransmisores. El modelo del espermatozoide permite analizar los mecanismos moleculares del proceso exocítico, respondiendo interrogantes de difícil abordaje en otros sistemas secretorios. La modulación de la reproducción así como el uso de  métodos de fertilización asistida y congelación de gametas en seres humanos y en animales es una práctica muy difundida. Sin embargo, los mecanismos moleculares involucrados en muchas de estas manipulaciones son todavía poco conocidos.  El plan presentado apunta a dilucidar aspectos claves de la exocitosis acrosomal, cuyo conocimiento es necesario para el diseño racional y el control de procedimientos que afectan la fertilidad en seres humanos y en animales.

 El espermatozoide posee una única vesícula secretoria que exocita frente a diferentes estímulos. Este proceso se denomina reacción acrosomal (RA), es un requerimiento absoluto para la penetración de la zona pelúcida del ovocito y para la fertilización. Hemos identificado proteínas indispensables para la fusión de membranas y la secuencia en la que estas funcionan. Hemos integrado y relacionado, en parte, esta maquinaria proteica con moléculas lipídicas que afectan la fusión de membranas y demostrado una cooperación funcional entre las mismas. Esta propuesta consiste en I) Determinar si las ceramidas de diferente largo de cadena carbonada en su residuo de ácido graso inducen exocitosis por sí mismas o afectan la respuesta a diferentes estímulos exocíticos.  En caso que lo hagan, averiguar cómo las ceramidas están involucradas en transducción de señales durante la exocitosis acrosomal; II) Determinar si el incremento de la concentración de ceramidas endógenas (que contienen ácidos grasos de cadena muy larga) utilizando esfingomielinasas o la disminución de las mismas usando ceramidasas afecta la exocitosis; III) Elucidar el rol de proteínas que regulan la producción de PIP₂ y su hidrólisis durante la exocitosis acrosomal. Para resolver estos interrogantes afectaremos la actividad de diferentes componentes de la cascada de señalización y mediremos su influencia en la exocitosis. Los resultados se analizarán a través de ensayos bioquímicos, funcionales y morfológicos. En los ensayos funcionales mediremos la exocitosis del gránulo acrosomal por citometría de flujo. Analizaremos la dinámica de los lípidos en la RA así como la distribución de moléculas in vivo y mediremos las fluctuaciones en la concentración de calcio intracelular. Con sondas fluorescentes monitorearemos distintos aspectos de la RA in vivo, en tiempo real y con alta resolución. Esta propuesta consiste en identificar la función de los lípidos durante la exocitosis, definir su relación con diferentes proteínas e integrarlos a las cascadas de transducción de señales ya conocidas para poder analizar la regulación del proceso exocítico completo. Pretendemos lograr un modelo molecular integrado de exocitosis acrosomal que podría ser extrapolado a otros sistemas secretorios.

-Establecimiento de líneas de trabajo que incorporan nuevas tecnologías al IHEM y a la Facultad de Ciencias Médicas de la UNCuyo.

-Se difundirán los resultados logrados en seminarios internos y generales, para todo el personal del IHEM.

-Formación de recursos humanos: avance y/o finalización de Tesis doctorales y perfeccionamiento de becarios postdoctorales.

-Publicaciones: se espera volcar los resultados en dos a tres publicaciones en revistas internacionales con referato y mediano-alto índice de impacto.

-Comunicaciones a congresos nacionales e internacionales: todos los integrantes del equipo irán a un congreso nacional o internacional por año.  Es de especial interés para nuestro grupo presentar y discutir nuestros resultados con pares de la comunidad internacional

During fertilization, the spermatozoon penetrates the zona pellucida to reach the oolema. Only sperm that have completed the acrosome reaction (AR) can accomplish this task. The AR is a calcium-regulated exocytosis where the membrane of the acrosome fuses to the plasma membrane. Exocytosis is a complicated and finely tuned process involving a large number of components that transiently associate and dissociate. The goal of this proposal is to identify and characterize lipid´s role and elucidate the sequence of the reactions they take part in during exocytosis using the AR as model system. To solve these issues we propose, i) to investigate if ceramides containing different long chain fatty acids have any effect on exocytosis and if it is so whether it is produced by itself or by affecting the response when exocytic stimuli are applied. We will elucidate the signaling network modulated/triggered by ceramides; ii) to increase or decrease the concentration of endogenous ceramides by incubating sperm with sphingomyelinases or ceramidases respectively and evaluate the effect of the treatment on exocytosis; iii) to elucidate the role of proteins that regulate PIP₂ synthesis and hydrolysis during acrosomal exocytosis. To assess these aims we will perform functional assays in permeabilized and non permeabilized sperm (evaluated by flow cytometry) in combination with other biochemical approaches namely Western blot, immunofluorescence, confocal microscopy, calcium measurements in life cells, in real time with high spatial and temporal resolution, and spectrofluorometry among others.

We hope this project will allow significant advances in our understanding of sperm AR at the molecular level progress that should ultimately lead to new and better techniques for enhancing fertility, identifying and treating certain forms of male infertility and preventing conception.

- Estudiar factores patogénicos de las cepas de Candida aisladas

- Introducción en la identificación taxonómica de especies de Candida por métodos moleculares

- Determinar y estudiar parámetros indicadores de contaminación de la calidad microbiológica
del agua con que cuentan los pobladores 

- Efectuar tratamiento estadístico de los resultados

- Dar a conocer ante los responsables de salud pública los resultados y conclusiones de este trabajo

Demostrar que los pobladores de zonas rurales del NE de Mendoza que no cuentan con un recurso hídrico microbiológicamente apto, malas condiciones de vida; por la escasez y mal manejo de este vital elemento, además de, nutrición deficiente, a los que se suma la falta de educación, de recursos económicos, de rutas de acceso; constituyen un grupo de riesgo, en cuanto a salud se refiere, con todas las consecuencias inmediatas y mediatas que esta problemática representa. Por lo tanto, con datos fehacientes llegar a los responsables y a quienes tienen en sus manos el idear y llevar a cabo medidas que tiendan a la solución paulatina de esta situación. A partir de las cepas de las especies de Candida, recuperadas de los individuos incluidos en el trabajo, profundizar el estudio de las características patogénicas de este microorganismo, para conocer más acerca del enemigo microbiológico oportunista, que se encuentra en la cavidad oral de estas personas. Aportar con datos epidemiológicos de la zona.

<span arial,helvetica,sans-serif;"="">Candida es un hongo anfibionte de piel y mucosas de numerosas personas, que vive en un frágil equilbrio con el hospedador, pero que es capaz de desarrollar enfermedad cuando se presentan causas predisponentes. Es una de las infecciones por agentes oportunistas más frecuente en seres humanos, observándose un incremento de la incidencia de las mismas en los últimos años. La colonización de este microorganismo, especialmente Candida albicans puede llevar a la infección sistémica cuando se presentan factores de riesgo, como el uso continuo de antibióticos de amplio espectro, esteroides u otros agentes inmunosupresores, diabetes mellitus, SIDA, depresión de las funciones fagocíticas o alteraciones locales del sistema gastrointestinal, pudiendo desarrollar candidosis y hasta diseminación hematógena. Este hongo tiene atributos de virulencia para colonizar y ocasionar daño de forma directa, al activar, resistir o desviar la respuesta inmune del hospedador. Además, la expresión de los mismos para causar infección, varían según el tipo, sitio y naturaleza de estos mecanismos defensivos del hospedador. La interacción entre el agente fúngico y el medio ambiente está afectada por su variabilidad antigénica, el cambio fenotípico y la transición dimórfica. Se pueden mencionar también, como factores potenciales de virulencia la morfología celular, actividad enzimática extracelular y factores de adherencia, como formación de biopelículas. Por otra parte, el agua de consumo, para higiene personal y domiciliaria, es considerada un indicador de condiciones sanitarias. Estudios efectuados por este grupo de trabajo, determinó que el recurso hídrico con que cuentan pobladores rurales del NE de Mendoza, es de mala calidad microbiológica, relacionado principalmente al manejo inadecuado del mismo y constituye un factor de riesgo para la salud. Consideramos que, determinar la portación de especies de Candida, la frecuencia relativa de las mismas, así como sus factores patogénicos, en estos individuos consumidores de esta agua, definiría su situación sanitaria y a partir de ello trabajar en la mejora de la misma. Los estudios de prevalencia de estas levaduras en la mucosa oral de hospedadores inmunocomprometidos relacionados con factores de riesgo, son bien conocidos, y son los que se deben tener en cuenta para adoptar medidas profilácticas o terapéuticas

Los resultados serán transferidos en eventos científicos (presentaciones orales y/o escritas), publicaciones y además se aportará con:

- Formación de recursos humanos

- Información sobre la portación de Candida, la frecuencia relativa de las especies aisladas, sus factores patogénicos, relacionada con factores predisponentes y de riesgo en la población estudiada

- Conocimientos para la prevención de patologías hídricas

- Cifras estadísticas regionales

- Entrenamiento de alumnos, técnicos y profesionales de la salud interesados en el tema

- Beneficiarios: médicos, bioquímicos, personal de equipo de salud, estudiantes, enfermeros, ingenieros en alimentación, bromatólogos, técnicos en alimentos

Candida is an fungus anfibionte skin and mucous membranes of many people living in a fragile full balanced with the host , but is able to develop disease when there are predisposing causes . This is one of the opportunistic infections agents common in humans , with an increase in the incidence of the same over the years . Colonization of this microorganism , especially Candida albicans can lead to systemic infection when risk factors , such as the continued use of broad spectrum antibiotics , steroids or other immunosuppressive agents, diabetes mellitus, AIDS , depression of phagocytic functions or alterations local gastrointestinal system and can develop thrush and even hematogenous spread . This fungus has attributes of virulence to colonize and cause damage directly, to activate , resist or divert the host immune response . Furthermore, expression of the same to cause infection depend on the type , location and nature of the defense mechanisms of the host. The interaction between the fungal agent and the environment is affected by its antigenic variability , the phenotypic change and dimorphic transition . It may also be mentioned as potential virulence factors cell morphology , extracellular enzymatic activity and adhesion factors ( biofilm ) . Moreover, drinking water for home and personal care , is considered one indicator of sanitary conditions. Studies conducted by the working group determined that the water resource available for them huarpes descendants of Lavalle , is of poor microbiological quality and constitutes a risk factor for health. We believe that , to determine the bearing of Candida species, the relative frequency of the same , as well as pathogenic factors in these individuals consuming this water , define their health status and from that work on improving it. Prevalence studies of these yeasts in the oral mucosa of immunocompromised hosts related risk factors are well known , and are the ones who should be considered for prophylactic or therapeutic measures

Estandarización del método de digestión controlada de la capa de CE para poder descubrir la superficie de las CM.

Descripción de la superficie de las células CM y CE con SEM en TS, con o sin digestión previa, de animales adultos en estado relajado y luego de la contracción con ET1.

Descripción de los cambios de la matriz extracelular y la ultraestructura de las CM y las CE desde el nacimiento a la etapa adulta.

Determinación del comienzo de la respuesta a la ET1 en TS en desarrollo y cómo modifica el ordenamiento de la pared peritubular. 

Descripción de la ultraestrura de la pared peritubular completa durante el desarrollo posnatal.

Determinación de cuáles estructuras celulares están involucradas en la contracción de la CM, sin cuyo desarrollo no se alcanza esta respuesta y cuáles son los otros elementos implicados en la pared que hacen posible la transmisión de la contracción. 

Alrededor de los túbulos seminíferos (TS) de los testículos de roedores adultos se encuentra una monocapa de células mioides (CM), a su vez cubierta por una monocapa de células endoteliales (CE) que forman los vasos linfáticos del intersticio. Ambas monocapas constituyen la pared peritubular, y son fácilmente identificables por microscopía electrónica de transmisión (TEM). Tanto las CM como las CE son células poligonales planas.

Las CM son un tipo especial de células musculares lisas, cuya contracción propulsa el fluido luminal hacia la rete testis. En un trabajo previo de nuestro laboratorio probamos por microscopía confocal y TEM que las CM poseen en su citoplasma filamentos de actina (FA) dispuestos en dos capas independientes entre sí, sin entrelazarse. También describimos que cuando las CM se contraen por acción de la endotelina-1 (ET1), los FA forman haces más gruesos pero se mantienen en las capas independientes.La ET-1 es un péptido sintetizado por las células de Sertoli y las CE.

En el proyecto anterior estudiamos las CM en el primer mes de vida extrauterina. En la rata neonata la pared del cordón seminífero está formada por múltiples capas celulares. Aunque los FA están presentes al nacimiento, se encuentran muy desordenados y recién se organizan dentro de la CM en la capa interna en el 15 dpn y en la capa externa en el 30 dpn. Estos hechos coinciden con la observación de los cambios de forma de CM.

En este nuevo proyecto estudiaremos la pared peritubular completa, observando la evolución de la ultraestructura de ambos tipos celulares desde el nacimiento, en que son indistinguibles al TEM, hasta la etapa adulta. También se observará la capacidad de respuesta de la CM a la ET1 con el paso del tiempo y cómo afecta al reordenamiento de la pared del TS, y en especial a la superficie de la CE.

Con el microscopio electrónico de barrido (SEM) se pueden estudiar fácilmente la superficie de las CE, externas en la pared del TS, pero es difícil interpretar la forma adoptada por las CM que se encuentran en la capa subyacente. Para solucionar este problema, el primer desafío de este trabajo será encontrar las condiciones óptimas de digestión de las CE de los TS con colagenasa para descubrir las CM.

Difusión de los resultados en conferencias, simposios y comunicaciones. Formación de recursos humanos. Este tema será incluido en la Tesis Doctoral de la Lic. Antonella Losinno. Además, permitirá el entrenamiento en preparación y observación de tejidos a una estudiante de la carrera de Medicina y a una estudiante de la carrera de Técnico en Ánatomía Patológica de la FCM- UNCuyo. Transferencia de las metodologías utilizadas en cursos de pre y posgrado. 

Surrounding the seminiferous tubules (ST) from adult rat testes there is a monolayer of myoid cells (MC), which is in turn covered by a monolayer of endothelial cells (EC) that form the lymphatic vessels in the interstitium. Both monolayers constitute the peritubular wall, and are easily identified by transmission electron microscopy (TEM). MC and EC are flat polygonal cells.

MC are a special kind of smooth muscle cells, whose contraction propels the luminal fluid to the rete testis. In a previous work from our lab, we proved that MC have actin filaments (AF) disposed in two independent layers inside their cytoplasm, without any interweaving. We also described that when MC contract by endothelin 1 (ET1), AF form wider bundles but keeping in the independent layers. ET-1 is a peptide synthetized by Sertoli and EC.

In the previous project, we studied MC during the first month of extrauterine life. In the neonatal rat the wall of the seminiferous cord is formed by multiple cellular layers. Although AF are present at birth, they are very disorganized and just settled inside MC at pnd 15 making the internal layer, and at pnd 30 making the outer one. These facts coincide with the changes of MC shape observed.

In his new project we will study the whole peritubular wall, observing the evolution of both kinds of cells ultrastructure since birth, when they are indistinguishable from each other, to the adult step. We will also observe the ability of MC to react at ET1 stimulus along this period and how this affects the redistribution of the peritubular wall, in special, the EC surface.

It is easy to study EC surface by scanning electron microscope (SEM) because these cells are external to the peritubular wall, but, instead, is difficult to distinguish the MC shape, as they are in an overlapped layer. To solve this problem, the first challenge of this project will be to find the best conditions to digest EC from ST with collagenase to uncover MC. 

a- Determinar los efectos de un tratamiento con ejercicios de miembro superior sobre
la calidad de vida, función articular y dolor en pacientes con AR y compromiso de
manos.

Mejorar el nivel de calidad de vida, independencia y función de miembro
superior en pacientes con AR con compromiso de manos, luego de participar en un
programa de intervención con ejercicios físicos, educación y férulas durante un
período de un año.

La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria crónica que afecta
a las articulaciones produciendo inflamación, pérdida de función y discapacidad.
Problemas como el dolor, la fatiga, la pérdida de movilidad articular y la debilidad
muscular pueden interferir con la independencia de la persona.
Estudios en pacientes con AR señalan que, después de cinco años de haber
sido diagnosticados con esta enfermedad, el 44% presentó discapacidad funcional
moderada y el 16% una marcada discapacidad funcional
Los protocolos de tratamiento para pacientes con AR que apuntan a la
educación, al uso de férulas y a la incorporación de programas de ejercicios de mano,
resultan ser una manera eficiente de mejorar la calidad de vida y la función. Existe
evidencia que sugiere que los programas de ejercicios son una de las intervenciones
que mayor impacto tiene en la evolución favorable de los pacientes sin perjudicar la
actividad de la enfermedad ni el dolor. Sin embargo en Argentina no se conocen
estudios que hayan analizado el efecto de los ejercicios en la mano reumática. A nivel
mundial los estudios en este sentido son escasos.

Destinatarios Directos
- Pacientes con Artritis Reumatoide (AR) y compromiso de manos.
- Destinatarios Indirectos
- Familiares de pacientes con artritis reumatoide.
- Comunidad en general
- Comunidad científica a través de la difusión de los resultados en actividades de
formación como congresos, jornadas

Rheumatoid Arthritis (RA) commonly affects the hands with inflammation,
deformity and weakness leading to reduced function. The effectiveness of exercise for
RA patients is uncertain. The aim of our study is to evaluate the effectiveness of an
exercise program for RA

General

Establecer si Hsp27 participa junto con sistemas de reparación al daño de ADN inducido por cadmio.

            Específicos

Evaluar luego del tratamiento con cadmio y recuperación en presencia y ausencia de Hsp27

1)      Daño al ADN

2)      Expresión de proteínas del sistema de reparación MLH1 y MSH2 (MMR) y ERCC 1(NER) y p53

En base a los antecedentes en el tema donde es bien conocido el efecto del cadmio, como carcinógeno y como metal que modifica varias vias de señalización, es necesario dilucidar que ocurre con el daño y reparación al ADN provocado por cadmio en presencia y ausencia de la proteína Hsp27. Estos resultados serán de gran avance para poder justificar los hallazgos recientes donde el tratamiento con cadmio luego de tres  horas y recuperación durante  24hs. provocó modificación del ciclo celular y la apoptosis. Esperamos encontrar que el cadmio en esta línea celular modifica las proteínas de reparación junto con la participación de la Hsp27. 

El cadmio podría jugar un rol en la iniciación y progresión tumoral, alterando la expresión de proto-oncogenes y aumentando el potencial metastásico de las células tumorales respectivamente En la actualidad, hay bastante debate si el Cadmio induce mutaciones directamente interactuando con el ADN generando aductos o indirectamente inhibiendo las enzimas antioxidativas y sistemas de reparación del daño del ADN, modulando la expresión génica y transducción de señales, aumentando la formación de especies reactivas de oxígeno, metilación del ADN, desregulación de la proliferación celular, alteración de la homeostasis entre mecanismos pro y anti apoptóticos, disrupción de la adhesión celular. En diversos estudios se ha observado que los sistemas de reparación del ADN son blancos importantes del Cadmio interfiriendo con todos los sistemas de reparación del ADN, como el NER, MMR, BER, HR y NHEJ.  Nuestro grupo ha reportado la colocalización nuclear entre proteínas del sistema MMR, hMLH1 y hMSH2, y las proteínas de golpe de calor HSP27 y HSP72  en linfocitos de sangre periférica de personas sanas expuestos in vitro a hipertermia y cisplatino. El objetivo de este proyecto es estudiar en una línea celular de cáncer de cuello uterino humana HeLa el rol de la proteína Hsp27 sobre la expresión de proteínas de sistema de reparación al ADN bajo el tratamiento con cadmio (bajas y altas concentraciones) y durante la recuperación. Este estudio permitirá acercarnos a los mecanismos que están involucrados en la toxicidad provocada por Cadmio y evaluar vías de señalización involucradas.  

Los resultados obtenidos de este proyecto serán  presentados en congresos nacionalese internacionales. Además, los resultados finales serán publicados en revistas de referato. Asimismo, los resultados que vayan surgiendo serán presentados en seminarios internos.

Los beneficiarios seremos todos los integrantes de este proyecto asi como también los integrantes del Laboratorio de Biología tumoral donde se establecerá una gran vinculación con la Dra Nadin y la Lic. Mayra Sottile, ambas con gran experiencia en el área de daño y reparación al ADN. Además los resultados de este proyecto tendran un gran impacto social pues  profundizaremos en  los mecanismos moleculares de un potente carcinógeno altamente frecuente en nuestro medio ambiente.

Cadmium could play a role in tumor initiation and progression by altering the expression of proto- oncogenes and increase the metastatic potential of tumor cells respectively Currently, there is considerable debate over whether cadmium induces mutations directly interacting with DNA adducts or generating indirectly by inhibiting enzymes and systems antioxidative DNA damage repair , modulating gene expression and signal transduction, increasing the formation of reactive oxygen species , DNA methylation, deregulation of cellular proliferation , altered mechanisms of homeostasis between pro and anti apoptotic cell adhesion disruption . Several studies have shown that the DNA repair systems are important targets of cadmium interfering with all DNA repair systems , such as NER , MMR , BER , HR and NHEJ . Our group has reported the nuclear colocalization between MMR system proteins , hMLH1 and hMSH2 , and heat shock proteins HSP27 and HSP72 in peripheral blood lymphocytes of healthy individuals exposed in vitro to hyperthermia and cisplatin. The aim of this project is to study in a human cervical cancer cell line HeLa the role of Hsp27 protein on protein expression of the DNA repair system under treatment with cadmium ( low and high concentrations ) and during recovery . This study will approach the mechanisms that are involved in cadmiun induced toxicity and evaluate the signaling pathways involved .

General

Establecer si Hsp27 participa junto con sistemas de reparación al daño de ADN inducido por cadmio.

            Específicos

Evaluar luego del tratamiento con cadmio y recuperación en presencia y ausencia de Hsp27

1)      Daño al ADN

2)      Expresión de proteínas del sistema de reparación MLH1 y MSH2 (MMR) y ERCC 1(NER) y p53

En base a los antecedentes en el tema donde es bien conocido el efecto del cadmio, como carcinógeno y como metal que modifica varias vias de señalización, es necesario dilucidar que ocurre con el daño y reparación al ADN provocado por cadmio en presencia y ausencia de la proteína Hsp27. Estos resultados serán de gran avance para poder justificar los hallazgos recientes donde el tratamiento con cadmio luego de tres  horas y recuperación durante  24hs. provocó modificación del ciclo celular y la apoptosis. Esperamos encontrar que el cadmio en esta línea celular modifica las proteínas de reparación junto con la participación de la Hsp27. 

El cadmio podría jugar un rol en la iniciación y progresión tumoral, alterando la expresión de proto-oncogenes y aumentando el potencial metastásico de las células tumorales respectivamente En la actualidad, hay bastante debate si el Cadmio induce mutaciones directamente interactuando con el ADN generando aductos o indirectamente inhibiendo las enzimas antioxidativas y sistemas de reparación del daño del ADN, modulando la expresión génica y transducción de señales, aumentando la formación de especies reactivas de oxígeno, metilación del ADN, desregulación de la proliferación celular, alteración de la homeostasis entre mecanismos pro y anti apoptóticos, disrupción de la adhesión celular. En diversos estudios se ha observado que los sistemas de reparación del ADN son blancos importantes del Cadmio interfiriendo con todos los sistemas de reparación del ADN, como el NER, MMR, BER, HR y NHEJ.  Nuestro grupo ha reportado la colocalización nuclear entre proteínas del sistema MMR, hMLH1 y hMSH2, y las proteínas de golpe de calor HSP27 y HSP72  en linfocitos de sangre periférica de personas sanas expuestos in vitro a hipertermia y cisplatino. El objetivo de este proyecto es estudiar en una línea celular de cáncer de cuello uterino humana HeLa el rol de la proteína Hsp27 sobre la expresión de proteínas de sistema de reparación al ADN bajo el tratamiento con cadmio (bajas y altas concentraciones) y durante la recuperación. Este estudio permitirá acercarnos a los mecanismos que están involucrados en la toxicidad provocada por Cadmio y evaluar vías de señalización involucradas.  

Los resultados obtenidos de este proyecto serán  presentados en congresos nacionalese internacionales. Además, los resultados finales serán publicados en revistas de referato. Asimismo, los resultados que vayan surgiendo serán presentados en seminarios internos.

Los beneficiarios seremos todos los integrantes de este proyecto asi como también los integrantes del Laboratorio de Biología tumoral donde se establecerá una gran vinculación con la Dra Nadin y la Lic. Mayra Sottile, ambas con gran experiencia en el área de daño y reparación al ADN. Además los resultados de este proyecto tendran un gran impacto social pues  profundizaremos en  los mecanismos moleculares de un potente carcinógeno altamente frecuente en nuestro medio ambiente.

Cadmium could play a role in tumor initiation and progression by altering the expression of proto- oncogenes and increase the metastatic potential of tumor cells respectively Currently, there is considerable debate over whether cadmium induces mutations directly interacting with DNA adducts or generating indirectly by inhibiting enzymes and systems antioxidative DNA damage repair , modulating gene expression and signal transduction, increasing the formation of reactive oxygen species , DNA methylation, deregulation of cellular proliferation , altered mechanisms of homeostasis between pro and anti apoptotic cell adhesion disruption . Several studies have shown that the DNA repair systems are important targets of cadmium interfering with all DNA repair systems , such as NER , MMR , BER , HR and NHEJ . Our group has reported the nuclear colocalization between MMR system proteins , hMLH1 and hMSH2 , and heat shock proteins HSP27 and HSP72 in peripheral blood lymphocytes of healthy individuals exposed in vitro to hyperthermia and cisplatin. The aim of this project is to study in a human cervical cancer cell line HeLa the role of Hsp27 protein on protein expression of the DNA repair system under treatment with cadmium ( low and high concentrations ) and during recovery . This study will approach the mechanisms that are involved in cadmiun induced toxicity and evaluate the signaling pathways involved .

Objetivo general: Determinar si la metilación/silenciamiento de genes supresores tumorales es útil para evaluar la agresividad tumoral.

Objetivos específicos:

OBJETIVO 1:

Determinar si el perfil de metilación tumoral en estadíos tempranos (pacientes con ganglios linfáticos negativos y receptor de estrógenos positivo) permite predecir la evolución de la enfermedad.

OBJETIVO 2:                  

Determinar si la metilación de los genes RAR-β y p73 en carcinomas ductales invasores produce su silenciamiento y se correlaciona con la evolución de las pacientes.

Determinaremos si el perfil de metilación de genes supresores tumorales en el tumor primario sirve para optimizar el diagnóstico de la agresividad de la enfermedad e identificar las pacientes que deberían recibir quimioterapia en estadíos tempranos de la enfermedad.

Comprobaremos si la metilación produce silenciamiento del gen con la consiguiente falta de expresión de la proteína RAR-β y p73 y si la ausencia de estas proteínas es un marcador de la agresividad del tumor.

El cáncer de mama es una enfermedad genética y epigenética, cuya incidencia en nuestro país es elevada. Uno de los desafíos que enfrenta el médico es decidir qué pacientes se beneficiarán con la administración de quimioterapia en el caso de mujeres con ganglios linfáticos negativos. Resultados previos de nuestro grupo de trabajo sugieren que el perfil de metilación tumoral (conformado por 49 regiones génicas que pertenecen a genes reguladores del ciclo celular) es un parámetro específico de cada paciente. También hemos observado que: a) la metilación aberrante del gen RAR-β en el tumor primario se correlaciona con invasión de los ganglios linfáticos, comprobando que la proteína RAR-β inhibe la migración de células tumorales mamarias y b) la metilación de p73 está relacionada con tumores más agresivos. En el presente proyecto las hipótesis de trabajo son: 1) El perfil de metilación tumoral puede contribuir a determinar la agresividad tumoral y la evolución de las pacientes que no tienen compromiso de ganglios linfáticos y 2) El silenciamiento de los genes RAR-β y p73 en carcinomas primarios de mama puede ser un marcador de agresividad tumoral que contribuya a determinar el pronóstico de las pacientes. Proponemos: OBJETIVO 1: Determinar si el perfil de metilación tumoral en estadíos tempranos (pacientes con ganglios linfáticos negativos y receptores de estrógenos) permite predecir la evolución de la enfermedad. OBJETIVO 2: Determinar si la metilación de los genes RAR-β y p73 en carcinomas ductales invasores produce su silenciamiento y se correlaciona con la evolución de las pacientes. Para desarrollar los objetivos planteados utilizaremos biopsias de carcinomas de mama de pacientes que hayan firmado o firmen el correspondiente consentimiento informado que fue aprobado por el Comité de Ética de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Cuyo en el marco del proyecto de Investigación “Estudio del silenciamiento epigenético de genes supresores tumorales en cáncer de mama”. Para estudiar la metilación de genes se empleará la metodología de MS-MLPA. Para evaluar si la metilación produce el silenciamiento del gen, se realizarán estudios a nivel de expresión proteica mediante inmunohistoquímica.

Los resultados preliminares del presente proyecto serán expuestos en congresos nacionales e internacionales de la especialidad, que cuentan con evaluación de pares. Los resultados finales serán publicados en revistas internacionales con referato. También se discutirán los resultados en seminarios internos de nuestra institución. Por otra parte, el desarrollo de este trabajo contribuirá en la consolidación de nuestro grupo y en la formación en investigación científica de la becaria de grado Mayra Lis Sottile Fleury.

Los resultados esperados podrán contribuir a garantizar el tratamiento adecuado y mejorar la calidad de vida en las pacientes con diagnóstico de cáncer de mama. Nuestros resultados buscan optimizar el diagnóstico de la agresividad del tumor en estadíos tempranos de la enfermedad, para brindarle a cada paciente la terapia adecuada evitando los defectos o los excesos en la administración de quimioterapia, que se refleja no solamente en la mortalidad sino también en la calidad de vida.

Breast cancer is a genetic and epigenetic disease whose incidence in our country is high. One of the challenges facing the physician is to decide which patients will benefit from chemotherapy administration in the case of women with negative lymph nodes. Previous results from our research group suggest that tumor methylation profile (comprising 49 gene regions that belong to cell cycle regulatory genes) is a patient -specific parameter . We also observed that : a) the aberrant methylation RAR- β gene in the primary invasive tumor correlated with lymph node and that the RAR- β protein inhibits the migration of human breast cancer cells and b) the methylation of p73 is associated with more aggressive tumors. In this project our hypotheses are: 1 ) The tumor methylation profile can help determine tumor aggressiveness and evolution of patients without lymph node involvement and 2) gene silencing RAR - β and p73 in primary breast carcinomas may be a marker of tumor aggressiveness to help determine the prognosis of patients. We propose : OBJECTIVE 1: Determine if the tumor methylation profile in the early stages (patients with negative lymph nodes and presence of estrogen receptors ) allows predicting the evolution of the disease. OBJECTIVE 2 : To determine whether methylation of RAR - β and p73 genes in invasive ductal carcinomas produces its silencing and correlates with the outcome of the patients. To develop the objectives we will study breast cancer biopsies from patients who have signed or signed the corresponding informed consent (approved by the Ethics Committee of the Faculty of Medical Sciences of the National University of Cuyo in the framework of the research project " Study of epigenetic silencing of tumor suppressor genes in breast cancer ). " To study gene methylation methodology we will use MS- MLPA . To assess whether methylation causes gene silencing, we will pwrfomr the level of protein expression by immunohistochemistry.

La población infantil  y adultos mayores de nuestro medio será beneficiada directamente con los resultados de este proyecto ya que con nuestros resultados podemos demostrar la existenciade las bacterias en los biofilm de las superficies y su transferencia a nuevos alimentos. Los resultados de este proyecto puede hacer tomar conciencia a las autoridades de Dirección de Nutrición e Higiene de los alimentos, Departamento Provincial de Ganadería y Senasa para realizar un mayor control de las superficies y de los productos finales.

Con el objeto de establecer medidas de prevención adecuadas se tendrá en cuenta que. la capacidad de algunos patogenos alimentarios de formar películas biológicas (biofilms) les permite sobrevivir a numerosos procesos de conservación y eluir tratamientos de limpieza y desinfección.

Además los resultados se comunicarán en publicaciones científicas, congresos y docencia y se contribuirá a la formación de recursos humanos en nuevas metodologías a través de becarios de investigación.

Escherichiacoli O157: H7 is a common bacteria in animalintestines .Thepresence in animalsfaecesprovidesthepotentialfortheseorganismsenteringthefoodchain, causingnumerousoutbreaks.
Theaim of thisstudywill be toassessthebiofilmproductiononstainlesssteel and glass, forevaluatethe transfer of thepathogenagentsbycontactingwiththesurfacetofoodproducts.
The presence of biofilmonsurfacesremains a concernfortheeffective control of thesepathogens, in particular in thoseproductsthat donotrequireheatingorcookingbeforeconsumption.
 

Objetivo general:

• Contribuir al conocimiento de la respuesta inmune específica frente a las toxinas Shiga en niños de la Provincia de Mendoza.

Objetivos específicos:

• Determinar la presencia de anticuerpos anti Stx1 y Stx2 en niños con  SUH agudo.
• Determinar la presencia de anticuerpos anti Stx1 y Stx2 en niños que han padecido SUH.
• Determinar la presencia de anticuerpos anti Stx1 y Stx2 en niños sanos.

Si bien en la Argentina no existen demasiados datos epidemiológicos acerca del rol de la respuesta inmune específica, un trabajo realizado en Buenos Aires en el que se estudia la  presencia de anticuerpos contra la Stx en niños luego de haber sufrido el SUH, y en un grupo de niños controles, sanos (Fernández-Brando y col., 2011) demuestra que  efectivamente luego de haber tenido SUH, un mayor porcentaje de niños presentan anticuerpos anti-Stx2, sugiriendo que estos anticuerpos podrían contribuir a prevenir un segundo episodio de SUH.

Con respecto al grupo control resulta interesante el hecho de que se encontró también en los niños sanos, que no habían padecido SUH en el pasado, un número muy elevado de sueros positivos anti-Stx2, lo que podría estar relacionado con el comportamiento endémico de la enfermedad en nuestro país, en el cual un porcentaje importante de la población está expuesta a la bacteria sin presentar manifestaciones clínicas.

Por otro lado es importante estudiar aun más el alcance de los anticuerpos anti-Stx2 ya que algunos estudios han demostrado que los que anticuerpos anti-Stx2 subunidad A interfieren con el transporte retrógrado de la toxina, y podrían interactuar con Stx2 cuando todavía está ligado a los receptores  de membrana (Krautz-Peterson y col., 2008) y que además tienen amplio espectro de actividad que incluye otras variantes de Stx2, tales como Stx2c (Sheoran y col., 2008; Lindgren y col., 1994)

El Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) es una enfermedad trasmitida por alimentos que afecta fundamentalmente a los niños menores de 5 años cuyo agente etiológico es la bacteria Escherichia coli productora de toxina Shiga (STEC).

El SUH es una entidad clínica caracterizada por anemia hemolítica microangiopática, trombocitopenia e insuficiencia renal aguda.

Esta enfermedad constituye en nuestro país la primera causa de insuficiencia renal aguda, la segunda de insuficiencia renal crónica en pediatría y es además, responsable del 20% de los transplantes renales en niños y adolescentes.

Con respecto a STEC, la producción de toxina Shiga (Stx) representa el factor de virulencia más importante de STEC. Existen evidencias que afirman que el daño endotelial es una acción directa de la acción de la toxina Stx que una vez liberada por las bacterias atraviesa la barrera intestinal y accede a la circulación sanguínea donde se une a un receptor específico (globotriaosilceramida,Gb3) presente fundamentalmente en el endotelio de pequeños vasos del colon, riñón, epitelio tubular renal y  sistema nervioso central. Dentro de Stx pueden distinguirse dos grandes grupos, las toxinas Shiga 1 (Stx1) y  2 (Stx2). En nuestro país predominan las cepas que poseen Stx2, principal responsable de la falla renal en el SUH.

Con respecto al huésped, existen evidencias clínicas y experimentales de que la inmunidad específica determinada fundamentalmente por la presencia de anticuerpos anti-Stx disminuye el riesgo de SUH. Surgen entonces algunos interrogantes que evidencian que, a pesar de que en los últimos años se ha avanzado en el conocimiento de los mecanismos  patogénicos de esta enfermedad y de su agente etiológico, existen aun  aspectos desconocidos acerca de esta patología. Desde el punto de vista clínico se destaca la  baja frecuencia de re-infecciones por STEC.  Desde el punto de vista epidemiológico resulta interesante el hecho de que esta enfermedad afecte fundamentalmente a niños menores de 5 años. Esto lleva a pensar que existe una respuesta específica protectora responsable de estos hechos siendo la presencia de anticuerpos anti- Stx, que bloquean la toxina, esencial para la no repetición de la enfermedad. Es entonces el objetivo de este trabajo  determinar la presencia de anticuerpos anti-toxina Shiga en niños con síndrome urémico hemolítico enteropático y en niños que no lo han padecido, ya que no existen demasiados trabajos de este tipo y es importante profundizar la contribución de la respuesta inmune como herramienta esencial para conocer la patogénesis del SUH, generar tratamientos más eficaces como vacunas preventivas y terapéuticos que contribuyan a disminuir la incidencia de esta enfermedad en nuestro país.

Los resultados obtenidos en este proyecto serán comunicados en reuniones locales, presentados en congresos y enviados a publicar en revistas con referato.

Con respecto a los beneficiarios permitirá aportar a Salud Pública datos epidemiólogicos  que permitan caracterizar el perfil serológico en la población infantil de Mendoza. Además de contribuir dicho conocimiento con los diferentes grupos de investigación en la profundización del conocimiento de la patogénesis del SUH y en la generación de tratamientos más eficaces.

Hemolytic Uremic Syndrome (HUS) is a foodborne illness that mainly affects children under five years whose etiologic agent is the bacterium toxin-producing Escherichia coli (STEC).

HUS is a clinical entity characterized by microangiopathic hemolytic anemia, thrombocytopenia and acute renal failure.

This disease in our country is the leading cause of acute renal failure, the second of chronic renal failure in children and is also responsible for 20 % of kidney transplants in children and adolescents.

STEC regarding the production of Shiga toxin (Stx) represents the most important virulence factor of STEC. There is evidence to claim that endothelial damage is a direct action of Stx toxin action once released by the bacteria through the intestinal barrier and access the bloodstream where it binds to a specific receptor (globotriaosylceramide ,Gb3) present mainly in the endothelium of small vessels of the colon , kidney, renal tubular epithelium and central nervous system. Within Stx can distinguish two large groups, Shiga toxins 1 (Stx1) and 2 (Stx2). In our country dominated by strains possessing Stx2, primarily responsible for renal failure in the SUH.

With respect to the host, clinical and experimental evidence exists that specific immunity mainly determined by the presence of anti- Stx HUS risk decreases. Then some questions arise that indicate that, although in recent years there has been progress in the understanding of the pathogenic mechanisms of this disease and its causative agent , there are still unknowns about this disease. From the clinical point of view emphasizes the low frequency of re- infection by STEC. From the epidemiological point of view it is interesting that the disease primarily affects children under 5 years. This suggests that there is a specific protective response responsible for these acts being the presence of anti-Stx antibodies that block the toxin, not essential for disease recurrence. It is therefore the aim of this study was to determine the presence of Shiga toxin antibodies in children with hemolytic uremic syndrome enteropathy and children who have suffered because there are too many jobs of this type and it is important to deepen the response contribution immune as an essential tool for the pathogenesis of HUS, generate more effective treatments and preventive and therapeutic vaccines to help reduce the incidence of this disease in our country.

a) Se propone el estudio de  los niveles de DHEAs, Cortisol, Prolactina, Testosterona y ACTH por RIA  con la finalidad  de profundizar en el estudio del eje hipofiso-adrenal y su relación a  la génesis de los trastornos afectivos., especialmente conducta depresiva y agresiva en humanos.
b) Aproximar a un intento de clasificación de las alteraciones basadas en los parámetros  mencionados en humanos. Es de hacer notar que en la actualidad los datos sobre clasificaciones neuroendócrinas de estos trastornos son contradictorios. Intentar establecer un criterio de clasificación en base a la cuantificación del CART y de BDNF en humanos
c) Relacionar los  parámetros neuroendócrinos y comportamentales con los niveles de CART  y BDNF obtenidos.
e)   Estudio de los efectos de la administración de CART en los modelos animales.

El objetivo del presente plan de investigación se relaciona con la influencia del eje hipofiso-adrenogonadal (sistema neuro-endócrino) sobre  algunos aspectos moleculares a través del CART y su influencia sobre los parámetros cognitivo-conductuales que se observan en las diferentes psicopatologías, principalmente conducta depresiva y agresiva

Los resultados obtenidos permitirán explicar la relación del sistema neuroendócrino y molecular (CART mediante) en los trastornos de  depresión y de personalidad, como así también permitirá estudiar las variaciones del eje hipotálamo-hipofisoadrenal y su relación con el CART frente al tratamiento de ansiolíticos, antidepresivos y antipsicóticos. Se han obtenido datos preliminares que relacionan los niveles séricos de CART en adictos al alcohol con los niveles de malonildialdehido (MDA) obteniéndose diferencias significativas respecto a los controles( Bianchi,2011)
Aportar datos experimentales para aclarar los mecanismos del CART como antidepresivo y del BDNF como parámetro de diagnóstico y seguimiento de los trastornos de personalidad.

La depresión mayor y los subtipos de depresiones, conjuntamente con los trastornos de personalidad y la conducta agresiva y adictiva son las enfermedades mentales con mayor incidencia en la salud pública de la población dado que éstos flagelos pueden afectar a millones de personas cada año.( Murray,1996). Si bien de acuerdo a los manuales utilizados del DSM IV( 1994) se diagnostican estas psicopatologías con diferentes criterios no pueden descartarse los factores biológicos que pueden transformar a sujetos sanos en sujetos portadores de verdaderas psicopatologías. La etiopatogenia de éstos trastornos resultan de una interacción entre los  factores genéticos, epigenéticos, bioquímicos y moleculares con los factores comportamentales y psicológicos( Krishnan 2010). Bloem (2011) observa diferencias significativas en la  concentración de hormonas relacionadas con el eje HPA y la expresión de CART en diferentes sexos en el cerebro medio de depresivos suicidas y controles estableciendo una estrecha relación con las modificaciones del HPA( eje hipotálamo-hipofiso adrenal) y las variaciones del CART. Originalmente descubiertos por Spiess en 1981, se describieron como “péptidos desconocidos con función desconocida” Estos son considerados neurotransmisores putativos o co-transmisores y se localizan en diferentes procesos y órganos, por ejemplo: acción de psicoestimulantes( Jaworski,2003), ingesta y peso corporal (Hunter,2003,Koilu,1997, Kristensen, 1998), estrés y glucocorticoides(Balkan,2003., Koilu, 1997 .,Vrang 2003), control neuroendócrino( Ivanusic,2012,Rodriguez,2011,Zhang,M 2012).
Por otro lado se ha demostrado la importante participación del BDNF en la génesis de los trastornos afectivos y sobre todo a nivel del diagnóstico y tratamiento de los pacientes con depresión mayor y esquizofrenia. ((Pae,C.,2012), Yasui-Furukori( 2012) , Zhang,X.Y.,2012 y Favalli,2012)

En el presente proyecto se pretende investigar:

Los resultados del presente proyecto serán transferidos a los siguientes  sectores:
a) Sector Científico y Tecnológico: a través de los mecanismos habituales de comunicaciones científicas, por ejemplo ateneos o seminarios o bien reuniones en conjunto con otras unidades académicas, institutos y hospitales.
Las publicaciones constituyen un medio óptimo para la transferencia en este sector. Se piensa en enviar los resultados obtenidos a revistas nacionales o internacionales con arbitraje. La participación en reuniones científicas es de fundamental importancia para la transferencia al sector científico y tecnológico. Para ello se piensa en presentar los resultados obtenidos en el X Congreso Internacional de Estados Depresivos y Simposio Internacional de conducta violenta y agresiva  a realizarse en Mendoza en el año 2014, en el 34º  Simposio” Espacio , cuerpo y conducta a través del test de Bender(Junio 2014 Buenos Aires.) y en el 10º Congreso Argentino de Psicoinmunoendocrinología a realizarse en  Buenos Aires en el mismo año..
b) Sector Socio Cultural: Información general de la actividad científica de la Facultad de Ciencias Médicas a través de jornadas de divulgación y difusión a nivel de los Institutos de  exponiendo la importancia del estudio de los factores neurobiológicos y moleculares.
c) Beneficios esperados : Se espera obtener beneficio científicos, académicos y clínicos en relación a la participación del eje hipofiso-adrenogonadal  ,sus aspectos moleculares y la incorporación del CART y BDNF en el diagnóstico pronóstico y tratamiento de la conducta  depresiva agresiva y adictiva.
Merece especial atención el estudio y comprensión del eje hipotálamo Hipofisoadrenal , y su relación con el sistema neurotransmisor molecular del  (CART)  y de BDNF en los trastornos de personalidad, como la conducta violenta y depresiva por el alto índice de impacto que esta patología refleja en el funcionamiento de nuestras sociedades.
d) Formación de recursos humanos: El interés en el tema ha permitido la incorporación de un estudiante de pregrado, y de dos residentes en la Especialización en Clínica Psiquiátrica.).

“Basic and clinic  approach to aggressive and  depressive behavior. CART ( cocaine-amphetamine-regulated-transcript) peptides  and BDNF in human ”Molecular and psychoneuroendocrine factors”

Drug addiction and depressive disorders is defined today solely on the basis of behavioral abnormalities, for example loss of control over drug intake and compulsive drug taking despite horrendous  adverse  consequences. These behavioral abnormalities develop gradually and progressively during a course of repeated exposure to a drug of abuse include alcohol, and can persist for months or years after discontinuation of drug use. The stability of the behavioral abnormalities that define addiction and depressive disorders suggest a role for hypothalamic-pituitary adrenal axis (HPA) and gene expression in this process. According to this view repeated exposure to a drug or s depressive factors, the amounts, and even the types, of genes expressed in specific brain region. Such altered expression   of genes them mediates altered function of individuals neurons and the large neural circuits within which the neurons operate. On the other hands, this modification include several changes in endocrine system. The are many mechanism by which repeated exposure to a drug of abuse or depressive disease could alter gene expression in the brain, principally the gene expression of mRNA- CART (cocaine-Amphetamine-regulated- transcript) the BDNF. CART peptides are among the most recently discovered putative peptide neurotransmitters and are thought to be involved in feeding, reward and reinforcement, development, sensory processing, endocrine regulation and stress. The name CART refers to mRNA discovered by Douglas et al. and is an acronym for cocaine and amphetamine-regulated-transcript. The first CART peptide fragment identified nearly two decades ago in extracts of sheep hypothalamus and was partially sequenced. In 1995, Douglass et al. described CART –mRNA as one that increased rat striatum alter acute administrations of cocaine and amphetamine. In the present work we investigate several behavioral disorders in relation to endocrinology and molecular approach with the CART peptides blood and the personality test, depression, obsessive compulsive disorder and controls. This result may be to help to the best understanding of the molecular and endocrine factors related to  the addictive, aggressive and depressive behavior.     

Para ello se analizará la localización en el retículo endoplásmico, del receptor interno a IP3 (vía de ET_AR) y del receptor a reanodina (vía ET_BR) utilizando inmuno microscopía e inmunofluorescencia con anticuerpos específicos. 

Para ello se analizará la localización de los receptores ET_AR y ET_BR en la cara interna y externa de la célula MP por inmunofluorescencia con anticuerpos específicos. En el retículo endoplásmico de la cara externa e interna de la célula MP, se detectará la ubicación del receptor interno a IP3 (vía de ET_AR) y del receptor a reanodina (vía ET_BR) utilizando inmuno microscopía e inmunofluorescencia con anticuerpos específicos. 

- Difusión de los resultados en Conferencias, comunicaciones y publicaciones.

- Transferencia de las metodologías utilizadas en cursos de posgrado.

- Formación de recursos humanos.

In this project, using rat testis, we plan to evaluate the localization of the ET-1 receptors ET_AR y ET_BR and they signal component. Also, we plan to evaluate the changes in the behavior of ET-1 receptors of PM cells of hypertensive rats.

1) Estudiar la relación entre el consumo de oxígeno del epitelio del colon humano in Vitro y la secreción de cloruro en condiciones basales.

2) Evaluar el efecto de inhibidores y estimulantes de la secreción de cloruro sobre el metabolismo energético del epitelio.

3) Comparar cuantitativamente el efecto de diferentes inhibidores y secretagogos sobre el consumo epitelial de oxígeno.

4) Estimar la relación cuantitativa (estequiometría aparente) entre el transporte de cloruro y el consumo de oxígeno.

5) Determinar si dicha relación cuantitativa es fija o varía según el inhibidor o estimulante empleado.

1. Aportar una mejor comprensión de energética del proceso secretorio.

2. Contribuir al conocimiento de la fisiología y fisiopatología del aparato digestivo.

3. Proporcionar una visión más completa de la alteración de la función epitelial causada por la estimulación excesiva de la secreción de cloruro.

5. Formar recursos humanos en investigación.

Objetivos. 1) Estudiar la relación entre el consumo de oxígeno del epitelio del colon humano in Vitro y la secreción de cloruro en condiciones basales. 2) Evaluar el efecto de inhibidores y estimulantes de la secreción de cloruro sobre el metabolismo energético del epitelio.

3) Comparar cuantitativamente el efecto de diferentes inhibidores y secretagogos sobre el consumo epitelial de oxígeno. 4) Estimar la relación cuantitativa (estequiometría aparente) entre el transporte de cloruro y el consumo de oxígeno. 5) Determinar si dicha relación cuantitativa es fija o varía según el inhibidor o estimulante empleado. Línea de investigación: Está orientada a determinar la interrelación entre el transporte electrolítico intestinal y su dependencia del metabolismo aerobio.  Hipótesis de trabajo. Sobre la base de trabajo previo, se postula que

1) La secreción basal de cloruro requiere una fracción significativa del consumo de oxígeno epitelial. 2) Consecuentemente, la inhibición de dicha secreción reduce la demanda epitelial de oxígeno. 3) Por el contrario, la estimulación de la secreción de cloruro aumenta proporcionalmente la demanda epitelial de oxígeno. 4) el aumento de la demanda de oxígeno con la estimulación del transporte de cloruro es independiente del fármaco o agente neurohumoral empleado. Metodología. Previo consentimiento informado y cumpliendo las normas establecidas en la versión vigente de la declaración de Helsinki, se obtendrán muestras viables de colon humano de especímenes quirúrgicos obtenidos en procedimientos terapéuticos y  de biopsias de colon obtenidas con fines diagnósticos. Las muestras se trasladarán al laboratorio siguiendo un protocolo de bioseguridad para el manejo de material biológico. Los experimentos se realizarán en condiciones basales (con amilorida agregada en el lado apical para bloquear el transporte electrogénico de Na⁺), en ausencia nominal de cloruro (reemplazado por sulfato)  y en presencia de bloqueantes y estimulantes del transporte de cloruro. El epitelio se estudiará en cámaras de Ussing convencionales y cámaras modificadas: 1) para determinación del consumo de oxígeno en mucosa aislada, preservando el transporte iónico vectorial (medido como corriente de cortocircuito previo bloqueo del transporte de sodio) y 2) Para realizar determinaciones en muestras de biopsias (microcámara). Se determinarán las modificaciones de las variables electrofisiológicas y el consumo de oxígeno en diferentes condiciones funcionales. Los resultados serán analizados, según corresponda, mediante tests t de Student, ANOVA o regresión simple. Producto a obtener: Conocimiento de la fisiología gastrointestinal humana y de sus modificaciones en condiciones patológicas. Formación de recursos humanos.  Sistema de transferencia:  Comunicaciones, conferencias, cursos, material electrónico (Web), artículos científicos en publicaciones periódicas con evaluación de pares. Beneficios esperados: Mejor conocimiento de la función intestinal en condiciones normales y patológicas; bases racionales para la interpretación de trastornos clínicos y su tratamiento, en particular constipación, colon irritable y diarrea secretoria; formación de recursos humanos.

La transferencia se realizará mediante comunicaciones científicas en congresos, conferencias, cursos, informes en la Internet, artículos de divulgación y trabajos científicos en revistas especializadas con evaluación de pares.

Los beneficiarios previstos son los profesionales y estudiantes de ciencias de la salud, los becarios que recibirán formación en investigación e, indirectamente, los pacientes con afecciones gastroenterológicas y la población general en cuanto a su conocimiento.

Aims. 1) To study the relationship between human colon epithelium oxygen consumption and chloride secretion in vitro under basal conditions; 2) To assess the effect of chloride secretion inhibitors and stimulants on epithelial oxygen consumption; 3) To compare quantitatively the effects of the various agents on chloride transport and oxygen consumption; 4) To estimate the quantitative relationship (apparent stoichiometry) between chloride transport and oxygen consumption and 5) to evaluate whether that relationship is constant or varies according to the agent employed. Research line. It is directed to characterize the dependence on aerobic metabolism of ion transport processes in intestinal epithelia.  Working hypotheses. Base don previous work, it is hypothesized that: 1) Basal chloride secretion demands a significant fraction of epithelial oxygen consumption; 2) Inhibition of chloride secretion reduces epithelial oxygen consumption; 3) stimulation of chloride secretion increases proportionally the epithelial oxygen demand and 4) the increased demand caused by secretagogues depends on the magnitude of the increase in chloride secretion but not in the particular agent employed. Methods. After informed consent, viable samples of human colon will be obtained from surgical resections and biopsies. Experiments will be performed in basal conditions, or after adition of blockers and stimulants of chloride transport in conventional Ussing chambers and in special chambers: One for oxygen consumption measurement in conditions which preserve electrogenic ion transport, measured as short-circuit current, and a second one designed to use small samples from biopsies. Results will be analyzed, as indicated, by Student’s t tests, ANOVA and simple regression.  Expected benefits: Contribution to the knowledge of intestinal transport function in normal and abnormal conditions; rationale for interpretation and management of clinical disorders, training of human resources. Transfer system:  Free communications at scientific meetings, lectures, courses, electronic broadcasting (Internet), peer-reviewed scientific papers. Expected benefits. Deeper knowledge of intestinal function in health and disease, rationale for the interpretation of clinical disorders and their management, particularly constipation, irritable bowel syndrome and secretory diarrhea.

Teniendo en cuenta el amplio conocimiento y aporte a la comunidad científica realizado en el laboratorio respecto de la relación de las HSP en cáncer, nos interesa ampliar la investigación hacia la búsqueda y validación biológica de miRNA para HSP27. Así mismo evaluaremos el efecto de los miRNA sobre diversos procesos en los cuales está involucrada HSP27 en cáncer de mama, como ser proliferación celular, metástasis, apoptosis y resistencia a antineoplásicos. 

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Búsqueda in silico de potenciales miRNA para el ARNm de HSP27.

• Validación biológica de los miRNA encontrados in silico.

• Evaluación del efecto de los miRNA para HSP27 sobre los distintos procesos donde

participa: proliferación celular, migración, apoptosis.

En el presente proyecto pretendemos el hallazgo de miRNA capaces de regular la expresión de hsp27. Estos podran ser evaluados luego por la acción biológica que presenten y su impacto en los diferentes procesos del cancer. Los estudios propuestos en el presente plan brindarán información valiosa respecto de la biología básica de los mecanismos de regulación epigenética de HSP27, los cuales podrían generar nuevos blancos terapéuticos para el cáncer de mama.

La proteína Hsp27 pertenece a la familia de proteínas HSP (Heat shock proteins: proteínas de golpe de calor), estas son proteínas moduladoras de la capacidad de las células para responder a varios tipos de lesiones, estrés oxidativo, choque térmico, y otros factores de estrés. Las HSPs funcionan asistiendo al correcto plegado y estabilización de las proteínas, además participan en el de proteínas dañadas para su restablecimiento o posterior degradación. Hsp27 se encuentran sobreexpresada en una amplia variedad de cánceres, incluyendo al cáncer de mama, donde promueven el crecimiento tumoral, disminuyen la apoptosis celular y también se ha documentado que su expresión afecta negativamente al tratamiento con antineoplásicos como ser herceptina y doxorubicina. Ha sido demostrado que Hsp27 fomenta también las características metastasicas de las células de cáncer de mama. Estos motivosimpulsan actualmente la investigación de las Hsps como dianas moleculares en la terapia del cáncer. Los miRNA son una clase conservada de pequeños ARN no codificantes de alrededor de 22 nucleótidos de longitud, funcionan controlando negativamente la expresión génica de numerosos transcriptos. El mecanismo ocurre a través de la unión por complementariedad de bases a la región 3' no traducida de los ARNm conduciendo a su degradación o inhibiendo la traducción de los mismos. Los miRNA han sido implicados en la iniciación y progresión del cáncer a través de su capacidad de regular la expresión de genes y proteínas que regulan la proliferación, muerte celular y metástasis. En los últimos años se están desarrollando diversas terapias basadas en el uso de miRNA. Los datos experimentales indican que existen fenotipos de cáncer que pueden ser modificados por la expresión orientada de miRNAs. Basándose en esto se están desarrollando miRNA basados en terapias contra el cáncer, ya sea solos o en combinación con terapias dirigidas actuales, con el objetivo de mejorar la respuesta de la enfermedad y aumentar las tasas de curación, por lo que la terapia basada en miRNA proporciona un nuevo enfoque anti-tumoral en estudio para la terapia del cáncer. El genoma humano contiene alrededor de 1000 miRNAs los cuales tienen como blanco alrededor del 60% de los genes humanos. Hasta ahora todavía no ha sido descripto ningún miRNA para HSPs por lo cual es de suma importancia ahondar en este tema. En el presente estudio haremos hincapié en la búsqueda y estudio de miRNA para HSP27. Esta es nuestra incumbencia: desentrañar la regulación de la expresión de Hsp27 por miRNA específicos y analizar el efecto de los mismos en los procesos proliferación, migración y apoptosis del cáncer de mama.

El presente proyecto será desarrollado en el Instituto de Medicina y Biología Experimental de Cuyo (IMBECU), el cual posee varios grupos dedicados a la investigación del cáncer. Nuestras estudios aportaran nuevos conocimientos sobre los procesos moleculares del cancer, específicamente sobre la regulación epigenética de los genes de HSPs por medio de miRNA, estos aportes beneficiaran a la comunidad científica de nuestro instituto. Además es nuestra intención interaccionar en nuestras investigaciones con otros grupos colegas del instituto como también del exterior. Los estudios propuestos en el presente proyecto se encuentran dentro del area de investigación molecular básica, esperamos que nuestra investigación realize aportes en este nivel respecto del cancer, la modulacion epigenetica y de la biología celular. Pero ademas es nuestra intención que los resultados a futuro puedan ser tomados y aplicados en el area de la terapeutica del cancer de mama.

Hsp27 protein belongs to HSPs family (Heat shock proteins), these are proteins that modulate the ability of cells to respond to various types of injury, oxidative stress, heat shock and other factors stress. HSPs work assisting the correct folding and stabilization of proteins, also participate in the kidnapping of damaged proteins for subsequent degradation or restoration. Hsp27 are overexpressed in a variety of cancers, including breast cancer where promotes tumor growth, inhibiting cellular apoptosis. It has been documented that Hsp27 expression adversely affects expression antineoplastic therapy such as Herceptin and Doxorubicin. Hsp27 has been shown that promotes the metastatic breast cancer cells. These motives drive currently the investigation of Hsps as molecular targets for cancer therapy. miRNAs are a conserved class of small non-coding RNA of about 22 nucleotides. miRNAs work negatively controlling gene expression of numerous transcripts. The mechanism occurs through the binding base complementarity to the 3' untranslated region of the mRNA, this leads to mRNA degradation or inhibition of its translation. miRNAs have been implicated in the initiation and progression of cancer through its ability to regulate the expression of genes and proteins that regulate cell proliferation, cell death and metastasis. In recent years, various therapies are being developed based on the use of miRNA. Experimental data indicate that there are cancer phenotypes that can be altered by targeted expression of miRNAs. Based on this, there are developing cancer therapies based on miRNA, either alone or in combination with current therapies. In order to improve the responsiveness of the disease and increase the healing rates, miRNA based therapy provides a new anti tumor approach studied in cancer therapy. The human genome contains about 1,000 miRNAs which target about 60% of human genes. So far, has not been described any miRNA for HSPs, so this is a critical topic to explore. In this study we focus on the search and study of miRNA for HSP27. This is our concern: unravel the regulation of expression of specific miRNA Hsp27 and analyze the effect of these processes in proliferation, migration and apoptosis of breast cancer.

1. Obtener preparaciones de NTBo A de cepa prototipo, provenientes de casos de BL y otros orígenes.
2. Caracterizar biológicamente las NTBo:
   1. Toxigenicidad en Dosis Letal 50% (DL50).
   2. Actividad hemaglutinante frente a glóbulos rojos.
3. Caracterizar molecularmente las toxinas: tipo de complejo producido por la cepa, peso molecular (PM) e integridad de complejos (LL, L, M y S).
4. Estudiar y caracterizar los blancos moleculares de las toxinas obtenidas (VAMPs, sintaxin, SNAP-25, sinaptotagmina).
5. Establecer las vías de ingreso de las toxinas en cultivos de células Caco-2

Se pretende conocer características propias que pudieran diferir de la cepa prototipo y  de otros orígenes. Las diferencias debidas a las propiedades de las NTBo (PM, presencia o no de hemaglutininas, actividad hemaglutinante, etc), podrían colaborar con el esclarecimiento del mecanismo de la patogenia del botulismo del lactante. El conocimiento  y la implicancia de tal diversidad para un mismo serotipo de toxina, colaborarían en el desarrollo de pruebas diagnósticas, en la inmunoterapia del botulismo e incluso en el uso clínico-terapéutico de las NTBo. Desde el punto de vista epidemiológico los datos obtenidos contribuirán en la caracterización de las cepas  propias de esta región geográfica.

Esta línea de investigación  permitirá además la formación de investigadores y becarios.

El botulismo es una enfermedad neuroparalítica de alta letalidad que afecta al hombre y a distintas especies animales, causado por las neurotoxinas botulínicas producidas por Clostridium botulinum (tipos A al G) y, cuyo hábitat natural es principalmente el suelo.

El botulismo del lactante es producido por toxiinfección, por la ingestión de esporas, colonización y posterior producción de toxina in situ (intestinal), en su mayoría serotipo A y en niños menores de 12 meses de edad. Es una de las causas de muerte súbita, y su diagnóstico presenta dificultades por la manifestación de  síntomas no específicos y el amplio espectro en  la severidad  de los mismos. (Koepke y col, 2008)

Las neurotoxinas botulínicas (NTBo) son proteínas progenitoras sintetizadas como complejos de diferente PM: LL (únicamente tipo A), L (tipos A, B, C, D y G) y M (tipos A, B, C, D, E y F), de aproximadamente 900, 600 y 300 kDa, respectivamente. La fracción con actividad tóxica corresponde a una proteína de 150 kDa, asociada a componentes proteicos no tóxicos (hemaglutinantes y no hemaglutinantes). El componente tóxico y las otras proteínas accesorias le confieren cierta estabilidad y acción protectora frente al medio ácido y a las proteasas intestinales (Sugiyama y col., 1977). Otros autores sugieren que la hemaglutinina podría participar en la traslocación de la NTBo en el intestino delgado y en la captura de la toxina en los terminales nerviosos (Matsumura y col., 2007; Zhou y col., 2005). Actualmente y debido a las gran divergencia en la secuenciación genómica de la NTBo tipo A, como en su composición aminoacídica, se ha dividido el tipo serológico en subtipos, según A1, A2, A3, y A4. (Smith y col. 2005).

Dado que C. botulinum tipo A y las cepas proteolíticas de los tipos B y F poseen una alta homología génica y no pueden ser diferenciados metabólica ni bioquímicamente, pero sí por la  prueba de neutralización de toxina en ratón, se puede esperar pocas diferencias fenotípicas así como en sus NTBo entre las cepas del tipo A de distintos orígenes.

La importancia de conocer las características de las toxinas de las cepas de nuestra región, y establecer posibles diferencias, podrían estar relacionados  con la virulencia, la capacidad patógena, y los mecanismos de transporte de la toxina. En  nuestros estudios preliminares hemos determinado que todas estas cepas producen el complejo NTBo M (300 kDa) sin actividad hemaglutinante y relacionadas con el subtipo A2.  Esto propondría una vía alternativa al  mecanismo de ingreso intestinal de la toxina por translocación propuesto por otros autores (Fujinaga  Y, 2010) , el cual estaría relacionado con una mayor afección  neuronal (Pier CL y col (2011).  Este proyecto propone una continuidad de estos estudios e incluye un estudio molecular más profundo relacionado con la actividad enzimática de las toxinas autóctonas.

1. Transferencia
   1. Publicaciones con/sin referato en revistas científicas de amplia circulación nacional e internacional.
   2. Comunicación en reuniones científicas.
   3. Actividades de extensión a través del dictado de seminarios en las unidades de investigación.
   4. Formación de recursos humanos en investigación básica con posible aplicación clínica.
2. Beneficiarios:
   1. Los conocimientos aportados colaborarían para el inicio de estudios relacionados a la inmunoterapia  de la enfermedad.
   2. Utilización de los resultados como herramienta en estudios de biología celular y molecular, por ejemplo en mecanismos de transcitosis, exocitosis, etc.
   3. Utilización de resultados en epidemiología de la enfermedad en nuestra región.

Botulinum neurotoxins (BoNTs), the most potent protein toxins known, cause botulism and are produced by a heterogenous group of neurotoxigenic bacteria including Clostridium botulinum.

Based on their antigenic specificity, BoNTs are classified into seven serotypes (A–G). BoNT/A, B, E and F accounting for most recorded cases of human botulism. BoNTs are important disease causing agents, potential bioterrorism agents and pharmaceuticals for treating neuromuscular disorders and cosmetic use.

Infant botulism (BL) is a wideworld distributed; pathology caused by Clostridium botulinum (Cb) type A (toxiinfection). The soil (Su) is the main reservoir of the bacterial and probably the main source of infection in infants. It is relationed white of sudden death, and his diagnosis presents difficulties for the manifestation of not specific symptoms and the wide spectrum in the severity of the same . (Koepke et al, 2008). The NTBo is proteins progenitoras synthesized as complexes of different PM: the LL (only type A), L (types A, B, C, D and G) and M (types A, B, C, D, and F), of approximately 900, 600 and 300 kDa, respectively. The fraction with toxic activity corresponds to a protein of 150 kDa, associated with not toxic components (hemaglutinantes and not hemaglutinantes).

The importance of knowing the characteristics of the toxins of strain of our region, and to establish possible differences, they might be related to the virulence, the pathogenic capacity, and the mechanisms of the toxin transport. In our preliminary studies we have determined that our strain produced the complex NTBo M (300 kDa) without activity hemaglutinante and related to the subtype A2. This there would propose an alternative route to the mechanism of intestinal transport for ephitelial barrier  of the toxin for translocación proposed by other authors (Fujinaga et al, 2010), who would be related to a powerfull  affection neuronal (Pier CL et al. 2011). This project proposes a continuity of these studies and includes molecular study related to the enzymatical activity toxin of strain of our region.

1.     Características del endosimbionte que pueden contribuir a la inferencia filogenética:

1.1.        Determinación de la presencia de rubisco y de la secuencia de su gen, y su relación a la filogenia del gen 16S rRNA del simbionte.

1.2.        Composición de las cubiertas externas del endosimbionte.

1.3.        Endosimbiosis en otros gasterópodos

2.     Secreción in vivo e vitro de proteasas:

2.1.        Caracterización de las endo- y exopeptidasas secretadas en el tracto intestinal, y su correlación con los hallazgos de Godoy et al. (2013).

2.2.        Secreción in vitro por el endosimbionte aislado de la proteasa 32 kDa (Godoy et al., 2013) y su inhibición por antibióticos.

Referencia

Godoy, M.S., Castro-Vazquez, A. & Vega, I.A. 2013. Endosymbiotic and host proteases in the digestive tract of the invasive snail Pomacea canaliculata: Diversity, origin and characterization. PLoS One 8: e66689.

1.         Aspectos filogenéticos:

Esperamos encontrar en los corpúsculos C de P. canaliculata un gen de rubisco afín al de las eudicotiledóneas (Dellagnola et al., enviado) y compatible con los estudios del gen que codifica el 16S RNA ribosomal, como así también, y una pared celular sensible a la hialuronidasa (como muchas cianobacterias, y por la alcianofilia que hemos observado en la pared de los corpúsculos C).  En cuanto a los estudios comparativos de la endosimbiosis con otros cenogasterópodos, esperamos que las sondas bacterianas hibridizen sobre los corpúsculos C y K en otras especies de ampuláridos y litorinimorfos

2.        Aspectos funcionales:   

Esperamos encontrar una significativa secreción de la proteasa 32 kDa por parte de los endosimbiontes aislados in vitro, y una inhibición de esta secreción por antibióticos.  

Referencias:

Dellagnola, F.A., Koch, E., Castro-Vazquez, A. & Vega, I.A. enviado. Plastid 16S rRNA gene and maternal transmission of a unique endosymbiont of the apple snail Pomacea canaliculata.

Las mitocondrias y los cloroplastos constituyen los 2 ejemplos más destacados y conocidos de endosimbiontes intracelulares de origen procariota asociados a las células eucariotas de sus huéspedes y que son transmitidos maternalmente. Pomacea canaliculata (Caenogastropoda, Ampullariidae) es un molusco de agua dulce autóctono de nuestro país, estrechamente asociado a una pléyade de organismos epi- y endosimbióticos. En particular, las células epiteliales de la glándula digestiva de este animal alojan un organismo procariota (con dos morfotipos identificados como “C” y “K”) que se transmite en forma directa madre-cría y que es molecularmente afín a los cloroplastos, a pesar de retener características de organismo de vida libre.  Esta singular asociación simbiótica, aunque mejor estudiada en P. canaliculata, también parece estar presente en otros ampuláridos y otras especies pertenecientes a la familia Littorinimorpha. En este proyecto abordaremos los dos aspectos más intrigantes de la biología del endosimbionte de P. canaliculata, su posición filogenética y su posible significado funcional en el huésped. El primer aspecto será abordado a través del estudio de (a) los marcadores moleculares (16S RNA ribosomal y rubisco) y de la composición de las cubiertas externas del endosimbionte y (b) de la distribución de la simbiosis en especies dentro o fuera de la familia. El segundo aspecto será abordado a través del estudio y caracterización de las proteasas endosimbióticas y del huésped secretadas al tubo digestivo.

Formación de RRHH:

Dr. Martín Sergio Godoy, beca postdoctoral solicitada al CONICET

Lic. Alejandra D. Campoy-Díaz, beca de postgrado solicitada al CONICET para hacer su doctorado

Transferencia:

Consideramos que los ámbitos propios de la transferencia de un proyecto de investigación básica son:

          (a) transferencia a la docencia de grado y postgrado.

         (b) publicaciones en revistas de circulación internacional.

         (c) comunicaciones en jornadas y reuniones científicas.

Nos proponemos ejercer la transferencia en todos estos ámbitos.

Mitochondria and chloroplasts are the best known examples of intracellular prokaryotic endosymbionts associated with eukaryotic cells and that are maternally  transmitted. Pomacea canaliculata (Caenogastropoda , Ampullariidae) is a freshwater gastropod native to our country closely associated with a wide variety of epi - and endosymbiotic organisms. In particular, the epithelial cells of the digestive gland of this snail contain a pigmented prokaryotic organism (with two morphotypes identified as "C" and "K") that is transmitted directly from mother to offspring and is molecularly related to chloroplasts, despite it retains morphological characteristics of free-living organism. This unique symbiotic association (although better studied in P. canaliculata) also appears to be present in other species of ampullariids, as well as other species belonging to the Littorinimorpha. This research project will address the problem of the phylogenetic position of the endosymbiont of P. canaliculata and the possible functional significance of this association. The first aspect will be addressed through the study of (a) the molecular markers (16S ribosomal RNA and rubisco) and the composition of the outer wall of the endosymbiont and (b) the distribution of the endosymbiont inside and outside of the family Ampullariidae. The second aspect will be addressed through the (a) study and characterization of endosymbiotic and host proteases secreted into the digestive tract and (b) the ability of the symbiont to accumulate heavy metals present in drinking water.

Formulación y Fundamentación del Problema a Investigar:

HC y Diferenciación alterada

Como introdujimos más arriba, la transformación del Golgi y la vesícula acrosómica involucra que los microtúbulos se inserten en el anillo perinuclear del acrosoma en formación. La membrana del acrosoma posee colesterol normalmente. Pero en trabajos previos observamos que la zona acrosomal del espermatozoide se ve sobrecargada de colesterol en dietas grasas y que el aceite de oliva adicionado a la dieta lo corrige (10 y 11). Es probable que su incremento altere la relación esteroles y esfingolípidos.  Así cuando los microtúbulos deban insertarse en esta membrana (mediante los raft) se encuentren desbalanceados estos sectores de membrana y por ello no se pueda traccionar la vesícula hasta una su posición correcta. Así se podrían explicar las formas anómalas de acrosoma-acroplaxoma que hemos detectado (Figura 2B).

HC y baja Eficiencia  (número de espermatozoides en semen) del túbulo seminífero

Por otro lado, en tejidos como el hematopoyético con alta proliferación y diferenciación celular – similar en esas características con el túbulo seminífero - el exceso el colesterol ofertado (HC) inhibe ambas variables (14). Por ello es probable que el número de final células presente en el semen se vea afectado.

Apoptosis, HC y bajo número de espermatozoides en semen

La dieta grasa promueve un aumento de colesterol en sangre y muy probablemente en tejidos periféricos. Este incremento genera un desbalance del metabolismo de los lípidos. La sobrecarga de colesterol celular dispara los mecanismos de apoptosis en varios tejidos (15) y probablemente en el túbulo seminífero. Si aumenta el número de células que van a apoptosis la eficiencia del túbulo seminífero desciende.

HC y Sobrecarga de colesterol

El colesterol tiene mecanismos intracelulares de esterificación, eliminación (por ejemplo formación de bilis) o utilización para síntesis de hormonas, membranas (6). Pero en las células no especializadas en términos endocrinos o hepáticos la sobrecarga no es bien manejada y se dispararía la vía de señalización de apoptosis por medio de la denominada vía de las fosfolipasas (16).

Literatura:

14. PLOS ONE. 2012;7(11):E47286. DOI: 10.1371/JOURNAL.PONE.0047286. EPUB 2012 NOV 7. HEMATOPOIETIC STEM/PROGENITOR CELL PROLIFERATION AND DIFFERENTIATION IS DIFFERENTIALLY REGULATED BY HIGH-DENSITY AND LOW-DENSITY LIPOPROTEINS IN MICE. FENG Y, SCHOUTEDEN S, GEENENS R, VAN DUPPEN V, HERIJGERS P, HOLVOET P, VAN VELDHOVEN PP, VERFAILLIE CM. SOURCE: INTERDEPARTEMENTAAL STEM CELL INSTITUTE, KATHOLIEKE UNIVERSITEIT LEUVEN, BELGIUM. YINGMEI.FENG@MED.KULEUVEN.BE

15. PLoS One. 2012; 7(7): e39448. Published online 2012 July 2. doi:  10.1371/journal.pone.0039448. PMCID: PMC3388073. The Response of the Prostate to Circulating Cholesterol: Activating Transcription Factor 3 (ATF3) as a Prominent Node in a Cholesterol-Sensing Network. Jayoung Kim, Dolores Di Vizio, Taek-Kyun Kim, Jonghwan Kim, Minjung Kim, Kristine Pelton, Steven K. Clinton, Tsonwin Hai, Daehee Hwang, Keith R. Solomon, and Michael R. Freeman

16.  J Biol Chem. Author manuscript; available in PMC 2007 October 29. Published in final edited form as: J Biol Chem. 2007 September 14; 282(37): 27100–27114. Published online 2007 July 12. doi:  10.1074/jbc.M701316200.PMCID: PMC2044506. NIHMSID: NIHMS31824. Attenuated Free Cholesterol Loading-induced Apoptosis but Preserved Phospholipid Composition of Peritoneal Macrophages from Mice That Do Not Express Group VIA Phospholipase A2*,S Shunzhong Bao,‡ Yankun Li,§ Xiaoyong Lei,‡ Mary Wohltmann,‡ Wu Jin,‡ Alan Bohrer,‡ Clay F. Semenkovich,‡ Sasanka Ramanadham,‡ Ira Tabas,§ and John Turk‡,1.

Objetivos:

1. Visualizar/cuantificar la acumulación de colesterol en testículo, túbulo seminífero e intersticio, en animales bajo DG (conejos HC), protegidos y controles.
2. Determinar la forma en que se produce el montaje del acrosoma/acroplaxoma en las espermátides en conejos controles, HC y protegidos.
3. Analizar/cuantificar proporcionalmente el número de células apoptóticas en túbulos seminíferos de conejos controles, HC y protegidos.
4. Demostrar la baja eficiencia de los túbulos seminíferos en conejos bajo dieta grasa en comparación con los normales y su variación en los protegidos por AO. 

Alcanzar una calidad tal en los resultados que permita publicar en revistas internacionales con referato como los trabajos previos de nuestro grupo.

Los resultados de este proyecto servirán también de apoyo al Programa que nos subsidia la Universidad por la sinergia que tendrán ambos trabajos.

Por otro lado desde ambas instancias programa y proyecto se ha realizado una activa difusión sobre los efectos beneficiosos del aceite de oliva brindando charlas a la comunidad, programas radiales, medios gráficos y de radio. 

El colesterol es un marcador no solo de las clásicas patologías crónicas no trnsmisibles sino que recientemente puede ser también de infertilidad. Hemos descripto cambios seminales y espermáticos acompañando a dietas grasas con niveles séricos altos de colesterol. Entre ellos un bajo número de espermatozoides asociado a un incremento  de las formas anormales. Estos cambios se deberían por estudios preliminares a trastornos en el túbulo seminífero por baja eficiencia en la producción de espermatozoides y un mal ensamble del acrosoma durante la espermiogénesis. Sin embargo, estos cambios fueron revertidos por la adición de aceite de oliva virgen a la dieta. Los mecanismos celulares son desconocidos pero datos preliminares apuntan a que el exceso de colesterol dispara la vía apoptótica, inhibiría el ciclo celular y alteraría la inserción de los microtúbulos en el acrosoma en desarrollo favoreciendo las malformaciones de la cabeza espermática. Si bien datos preliminares apoyan estas ideas aún falta mayor desarrollo que esperamos realizar en este proyecto.

La comunidad local y nacional se verán beneficiados por la argumentación científica en cuanto al consumo del aceite de oliva y esto impulsará su producción beneficiando a toda la cadena productiva.

Cholesterol is a marker not only of the classical non-communicable chronic diseases but recently may also be of infertility. We have described changes -accompanying high serum cholesterol- in sperm cells and seminal fluid under fat diets. Sperm abnormalities include a low number of spermatozoa associated with an increase of abnormal shape. These changes should be by preliminary studies inside the seminiferous tubule. Low production efficiency and poor sperm acrosome assembly during spermatogenesis were observed. However, these changes were reversed by the addition of olive oil to the diet. The cellular mechanisms are unknown but preliminary data suggest that excess of cholesterol triggers the apoptotic cell death, inhibit the cell cycle and alter the insertion of microtubules in developing acrosome. Although preliminary data support these ideas still need further development that we expect to realize in this project.

El objetivo general del presente proyecto es describir la interacción de proteínas SNAREs, que forman parte de la maquinaria de fusión de la vía endocítica y exocítica, con la vacuola que aloja a Trypanosoma cruzi. Esto involucra a los siguientes objetivos específicos:

1.   Establecer el rol de Vamp7 en el desarrollo de la vacuola parasitófora y en el progreso del ciclo infectivo.

2.   Determinar el rol de Vamp3, Vti1b y SNAP23 en el desarrollo de la vacuola parasitófora y etapas posteriores del ciclo infectivo.

3.   Caracterizar el efecto de Varp y c-Src, moduladores de la actividad de Vamp7, sobre el proceso de invasión celular y desarrollo del ciclo infectivo.

Con este proyecto esperamos generar nuevos conocimientos relativos a la maquinaria de la célula huésped involucrada en la formación de la vacuola parasitófora de T. cruzi. La identificación de factores determinantes para la infección presentará una nueva serie de proteínas susceptibles a ser moduladas por el parásito. Inclusive, permitirá hipotetizar posibles blancos terapéuticos. En este sentido, podemos especular que drogas que inhiban la actividad de c-src, como PP2 y desatinib, podrían interferir en el proceso de infección por T. cruzi.

Con este proyecto se apunta a consolidar el grupo de investigación centrado en el estudio de la biología de Trypanosoma cruzi y la célula huésped, dirigido por la Dra. Patricia Romano. Este grupo lleva 8 años trabajando en esta línea de investigación, con publicaciones que han impactado en la comunidad científica. 

Trypanosoma cruzi es el agente causal de la enfermedad de Chagas. Los trypomastigotes, forma infectiva del parásito, debe transitar por el compartimento lisosomal de la células huésped para establecer una infección productiva. Este parásito explota tras vías para lograr este cometido: La vía endocítica, la exocitosis lisosomal y la autofagia. La participación de estas vías en el proceso de invasión nos plantea estudiar los componentes de la maquinaria de fusión del tráfico vesicular. Las proteínas SNAREs son mediadores indispensables para todos los eventos de fusión de membranas, último paso en el tráfico vesicular. Las SNAREs en la vesículas dadora (v-SNAREs) interaccionan con las del compartimiento aceptor (t-SNAREs), formando un complejo SNARE que actúa como efector en el proceso de fusión. En este proyecto, buscamos identificar las proteínas SNAREs involucradas en el proceso de invasión y en el establecimiento de la infección por T. cruzi. Vamp7 es una v-SANRE involucrada en la fusión de lisosomas con endosomas tardíos y membrana celular, a través de la interacción con t-SNAREs específicos. Entonces, proponemos evaluar la función de esta v-SNARE durante la invasión celular por T. cruzi. Los t-SNAREs que interaccionan con Vamp7 nos permitirán determinar, sin ambigüedades, la participación de las vías dependientes de esta proteína durante la entrada del parásito. Además, estudiaremos el efecto de dos moduladores de la actividad de Vamp7, Varp y c-Src, en el contexto del proceso de infección. El hallazgo de proteínas clave de la célula huésped involucradas en la invasión por T. cruzi abre un nuevo panorama para la intervención farmacológica.

Los conocimientos generados y la experiencia científica serán volcados a la docencia de grado y posgrado, de la cual los integrantes del grupo participan activamente.

Esperamos que este proyecto reditúe en, al menos, una publicación en una revista de divulgación científica, con referato y alto de índice de impacto.

Los resultados preliminares serán presentados en la Sociedad Argentina de Biología Celular y Bioquímica (SAIB) previstas para el año 2014 y 2015, así como, en las Jornadas de Investigación de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNCuyo. También, se prevé participar de eventos de divulgación científica dirigidos a la sociedad, como pueden ser las “Jornadas de Puertas abiertas del IHEM”.

Los beneficiarios directos de este proyecto son becarios de doctorado y posdoctorado que integran el grupo.

Trypanosoma cruzi is the causative agent of Chagas disease. Trypomastigotes, the infective form of the parasite, must transit the host cell lysosomal compartment in order to establish a productive intracellular infection. This parasite exploits different cellular pathways to access host cell lysosomes: Endocytosis, lysosomes exocytosis and autophagy. The involvement of these pathways during the invasion process led us to investigate components of the vesicular traffic. SNARE proteins are key mediators of all intracellular vesicle fusion events, the final step in vesicular traffic. Vesicular SNAREs (v-SNAREs) interact with their target SNAREs (t-SNAREs) to form SNARE complexes, which mediate membrane fusion. In this project, we sought to identify SNARE proteins involved in the invasion process and the establishment of T. cruzi infection. We propose to assess the function of Vamp7, a v-SNARE involved in lysosomes fusion through interactions with plasma membrane and endosomal t-SNAREs, during parasite invasion. Vamp7 t-SNAREs partners will allow us to discriminate unambiguously the participation of Vamp7 dependent pathways during parasite entry. Additionally, Vamp7 known modulators, Varp and c-Src, will be studied in the context of T. cruzi invasion. Discovery of key proteins involved in the T. cruzi infection process would have the potential to be exploited as targets for drug therapy.

1.         Defensas inmunitarias:

           1.1.   Investigar la presencia de células madre (progenitoras hemocitopoyéticas o mesenquimales) circulantes.

           1.2.   Investigar el rol de las distintas barreras orgánicas en la respuesta a antígenos (bacterianos y de A. cantonensis).

           1.3.   Investigar la formación in vitro de esferoides en respuesta a los antígenos precedentes.

2.         Defensas contra el daño oxidativo:

            2.1.   Completar el estudio de la participación de defensas enzimáticas (CAT, SOD) y no enzimáticas (ácido úrico, glutatión reducido)                       durante el ciclo actividad-hibernación.

            2.2.   Estudiar la participación de chaperonas moleculares (Hsc70, 73 kDa; Hsp70, 72 kDa y Hsp90 durante el ciclo de actividad-                               hibernación.

Con este proyecto esperamos:

1. Encontrar células madre circulantes en P. canaliculata, pero que a la vez se anclan en ciertos tejidos que adquieren entonces el carácter de hemopoyéticos. Entre ellos los más notables serán los islotes hemocitarios renales. También esperamos encontrar que la exposición a antígenos (bacterianos y de A. cantonensis) promueve la formación de esferoides hemocitarios en el riñón y en el pulmón, y que lo mismo podrá ser repetido in vitro.

2.  Que la ampularia manifieste una poderosa respuesta antioxidante y de chaperonas moleculares frente a la reoxigenación posterior a la hibernación.

La ampularia Pomacea canaliculata es un gasterópodo de agua dulce que presenta diversas estrategias adaptativas para enfrentar diferentes estresores ambientales bióticos y abióticos. Las defensas inmunitarias de esta especie y su habilidad para tolerar períodos de actividad y quiescencia, se muestran como estrategias adaptativas que podrían dar cuenta de la gran capacidad invasora alrededor del mundo.  P. canaliculata está asociada a numerosos simbiontes en su rango de distribución original, aunque sólo algunos pueden estar implicados en enfermedades humanas como dermatitis (urticaria de los nadadores) y, notablemente, la meningoencefalitis eosinofílica (provocada por el nemátodo Angiostrongylus cantonensis). Además de las barreras físicas contra los agresores (conchilla, tegumento), este animal esta dotado de un sistema inmune innato compuesto de hemocitos, los cuales no sólo se encuentran en circulación, sino que frecuentemente infiltran diversos tejidos y órganos y además, son capaces de formar aglomerados esferoidales en el riñón y pulmón que participan en la defensa contra los agresores. Por otra parte, este animal es capaz de enfrentar dos ciclos de actividad-quiescencia (uno de estivación y otro de hibernación) que implican la alternancia de hipoxia y reoxigenación, y la participación de defensas antioxidantes y de chaperonas moleculares; aunque el estado de conocimiento bioquímico y proteómico de la estivación ha avanzado substancialmente, la hibernación recién ha comenzado a estudiarse (Sectyp-UNCuyo, 2011-2013). El abordaje de ambas estrategias de defensa de esta ampularia se hará a través de los siguientes objetivos específicos: (a) caracterizar las células troncales comprometidas con linaje/s hemocitario/s, (b) investigar la participación de las diferentes barreras orgánicas in vivo (riñón y pulmón) e in vitro (agregados de hemocitos en cultivo) frente al desafío de antígenos bacterianos (lipolisacárido) y parasitarios (A. cantonensis, en colaboración con los Dres. Alessandra Morassutti y Carlos Graeff-Teixeira, de la Pontificia Universidade de Rio Grande do Sul, PUCRS) y, (c) profundizar el estudio de las diferentes defensas antioxidantes enzimáticas y no enzimáticas durante el ciclo actividad-hibernación.

Formación de RRHH:

Cristian RODRÍGUEZ, tesista de doctorado, PROBIOL, UNCuyo.

Pablo M. GIUFFRIDA, estudiante de grado, becario CIN.

Transferencia:

Consideramos que los ámbitos propios de la transferencia de un proyecto de investigación básica son:

          (a) transferencia a la docencia de grado y postgrado.

         (b) publicaciones en revistas de circulación internacional.

         (c) comunicaciones en jornadas y reuniones científicas.

Nos proponemos ejercer la transferencia en todos estos ámbitos.

The apple snail  Pomacea canaliculata is a freshwater gastropod presenting several adaptative strategies to cope biotic and abiotic envirinmental stressors. The immune defenses and the ability to tolerate periods of activity-quiescence may account for the invasive capacity of this snail. P. canaliculata is associated to numerous symbionts in its original range, but only some are involved in human diseases such as dermatitis (‘swimmers itch’) and, notably, to eosinophilic meningitis (provoked by the nematode Angiostrongylus cantonensis). Beyond the physical barriers against aggressors (shell, integument), this animal is endowed with an innate immune system composed of hemocytes, which are both in the circulation and as infiltrating cells in several tissues and organs, and are able to form spheroidal aggregates in the kidney and the lung. Besides that, this apple snail is able to cope with the stress of two ecophysiological cycles of activity-quiescence (estivation, hibernation) which imply sequential hipoxia and reoxygenation, with the involvement of antioxidant defenses and molecular chaperones: even though our knowledge of the biochemical and proteomic  mechanisms of estivation has significantly advanced, those of hibernation have only been preliminary studied (SECTyP-UNCuyo, 2011-2013). These defenses will be approached through the following specific objectives: (a) characterization of stem cells committed to the hemocyte lineage/s, (b) investigation of the involvement of the different organ barriers in vivo (kidney and lung) and in vitro (hemocyte aggregates in culture), ad their response to challeng by bacterial (lipopolysaccharide) and parasite antigens (A. cantonensis, in collaboration with Drs. Alessandra Morassutti y Carlos Graeff-Teixeira, Pontificia Universidade de Rio Grande do Sul, PUCRS)  and (c) the completion of the study of enzymatic and non-enzymatic antioxidant defenses during the activity-hibernation cycle.

Objetivo primario: Determinar la frecuencia de marcadores inmunológicos para enfermedad celíaca y enfermedad tiroidea en personas mayores de 18 años, con diabetes tipo 1 atendidos por profesionales del Hospital Universitario de Mendoza y del Hospital Sícoli del Departamento de Lavalle.

<p style="text-align: left;" dir="rtl" 36pt;="" text-align:="" left;'="">Objetivo secundario: Reconocer variables clínicas, evolutivas y de laboratorio, asociadas a la presencia de anticuerpos para enfermedad celíaca en personas con DM.

Determinar la frecuencia de marcadores inmunológicos de EC y enfermedad tiroidea, en pacientes con DM1.

•             Introducción

                La naturaleza autoinmune de la lesión beta en la diabetes tipo 1 (DM1) fue demostrada inicialmente por los hallazgos de  anticuerpos anti Islote (ICA) en 1974. Posteriormente fueron descubiertos otros marcadores de autoinmunidad en DM1, como los anticuerpos anti-GAD, anti-insulina, anti IA-2A y anti ZnT8.

                La DM1 frecuentemente coexiste con otras enfermedades autoinmunes órgano-específicas como la enfermedad tiroidea autoinmune, la enfermedad celíaca y la enfermedad de Addison, entre otras. Cada una de ellas presenta anticuerpos específicos que actúan como marcadores humorales. Si bien su presencia no es sinónimo de enfermedad clínica, constituyen un factor de riesgo para el desarrollo de la enfermedad autoinmune.

                La enfermedad celíaca (EC) es un cuadro permanente de intolerancia al gluten, caracterizado por una lesión de la mucosa del intestino delgado, que se produce como consecuencia de una respuesta inflamatoria inadecuada ante la ingesta de gluten en individuos genéticamente susceptibles. Su espectro clínico es variado y comprende desde la forma clásica que se presenta con síndrome de malabsorción hasta formas silentes o con presentaciones atípicas. La EC puede tener consecuencias como baja talla, osteoporosis, anemia, abortos, infertilidad, epilepsia, ataxia, calcificaciones cerebrales occipitales, aftas recurrentes o dermatitis herpetiforme.

                La prevalencia de los anticuerpos relacionados con enfermedad celíaca presenta una amplia variación geográfica. Estudios serológicos en donantes de sangre en Suecia mostraron una prevalencia de 1:256. Estudios similares indicaron en EEUU una prevalencia 1:250, en Finlandia 1:99, en Israel 1:157, 1:37 en México, en San Pablo, Brasil 1:273, y en Brasilia 1:681.

                En nuestro país se publicó en 1993 un estudio que mostró una prevalencia en niños de 1:1377 en hospitales de la Ciudad de Buenos Aires y en La Plata.  En 1999, en un estudio realizado en muestras de suero de exámenes prematrimoniales en el área de La Plata, se reportó una prevalencia de 1:167.

                El 12% de los pacientes con DM1, presenta anticuerpos marcadores de EC, pero solo el 4-9% de ellos manifiesta la enfermedad.

•             Objetivos

Objetivo primario: Determinar la frecuencia de marcadores inmunológicos para enfermedad celíaca y la frecuencia de enfermedad tiroidea en personas mayores de 18 años, con diabetes tipo 1 atendidos por profesionales del Hospital Universitario de Mendoza y del Hospital Sícoli del Departamento de Lavalle.

        Objetivo secundario: Reconocer variables clínicas, evolutivas y de laboratorio, asociadas a la presencia de anticuerpos para                     enfermedad celíaca y enfermedad tiroidea en personas con DM1.

•             Metodología

                               La investigación se llevará a cabo por profesionales de la salud del Hospital Universitario de la Universidad Nacional de Cuyo y del Hospital Sicoli de Lavalle, consistirá en la realización de una encuesta (anexo 1) y la determinaciones de Anticuerpos Antitransglutaminasa, Inmunoglobulina A total, Hormona Estimulante de Tiroides y Anticuerpos Anti Peroxidasa Tiroidea, a pacientes mayores d 18 años con diabetes tipo 1, que accedan a participar del estudio previa firma de consentimiento informado. Las tomas de muestra para las determinaciones de laboratorio se llevarán a cabo en el Hospital Universitario de la Universidad Nacional de Cuyo.

                               A partir del comienzo del estudio, se invitará a todo paciente con DM1 a participar del estudio. Si ya tuviera el diagnóstico de enfermedad celíaca, igualmente se lo invitará a participar, a fin de conocer la presencia de autoinmunidad tiroidea y las variables clínicas. También se guardarán muestras de suero a -80°c, para posibles determinaciones en el futuro.

                               En aquellos casos que los Anticuerpos Antitransglutaminasa sean positivos, se recomendará la realización de una video endoscopia digestiva alta, con toma de biopsias del intestino delgado, para corroborar el diagnóstico de enfermedad celíaca, según recomendaciones de guías nacionales e internacionales.

                               La duración total del estudio será de 18 meses, se espera contar con un total de 180 pacientes.

                               En aquellos pacientes, en los que se confirme el diagnóstico de enfermedad celíaca (anticuerpos antitransglutaminasa positivos y confirmación histológica), se realizará el seguimiento de los registros en la historia clínica, en busca datos de laboratorio como hematocrito, hemoglobina, ferritina, saturación de transferrina, proteínas, albumina, calcemia, fosfatemia y vitamina D.

El hecho de conocer la frecuencia de marcadores de enfermedad celíaca y de enfermedad tiroidea en personas con Diabetes tipo 1 en nuestro medio, permitirá mejorar las estrategias de detección de esas patologías y así mejorar la salud, calidad de vida y optimizar el uso de recursos en salud.

• Actualizar y clasificar las historias clínicas de pacientes que han consultado en el Instituto de Genética de la FCM, UNCuyo y que presenten aberraciones cromosómicas que afecten el número o la morfología del cromosoma X en el estudio de cariotipo.

• Evaluar la presencia de marcadores de riesgo cardiovascular con métodos no invasivos como el ecodoppler vascular y la expresión del gen ACE2 en sangre periférica mediante ELISA.

• Analizar la relación cariotipo- fenotipo entre diferentes aberraciones del cromosoma X y la expresión del gen ACE2 en sangre periférica mediante ELISA.

<p justify;"=""> Establecer en la provincia de Mendoza un protocolo de seguimiento que permita incluir las técnicas no invasivas mencionadas como parámetro pronóstico en el seguimiento de los pacientes portadores de anormalidades del cromosoma X.

1- La metodología de ecodoppler vascular es una técnica no invasiva, sensible, específica y confiable para la detección de marcadores pronóstico de riesgo cardiovascular y disfunción endotelial en pacientes con aberraciones del cromosoma X.

3- La detección de SRY por PCR es una técnica económica, sensible y específica para la detección de la presencia de material de cromosoma Y, y debiera complementar el estudio cromosómico de todas las pacientes con diagnóstico presuntivo de síndrome de Turner en los laboratorios de citogenética.

5- Resulta de utilidad clínica determinar la relación entre citogenética y expresión génica como marcador pronóstico en los pacientes estudiados, ya que los marcadores propuestos favorecen la elección de estrategias terapéuticas adecuadas y permiten la definición del pronóstico clínico.

Se define al cromosoma X como uno de los cromosomas sexuales. Su morfología lo califica como submetacéntrico, en donde el centrómero aparece desplazado hacia uno de los extremos generando un brazo corto “p” y un brazo largo “q”. Las anomalías de este cromosoma pueden ser numéricas, cuando afectan la cantidad de cromosomas X presentes en una célula o estructurales, cuando modifican la morfología del mismo. El tipo de aberración cromosómica puede, además, estar presente en todas las células o sólo en una proporción de las mismas, situación conocida con el nombre de mosaicismo celular. Entre las anormalidades descriptas, las de tipo numérico afectan con mayor frecuencia a la población general y ocasionan situaciones de aneuploidía, siendo la monosomía (pérdida completa de uno de los cromosomas del par) y la trisomía (presencia de un cromosoma extra en el par) las formas más comunes. La mayoría de las aberraciones que afectan al cromosoma X quedan incluidas bajo la denominación de Síndrome de Turner, el cual ocurre con una frecuencia de 1 de cada 2000 recién nacidas vivas mujeres. Los rasgos típicos en estas pacientes son: talla baja, cuello alado (pterigium coli) y disgenesia gonadal entre otros. La variabilidad en la expresión fenotípica suele ser el resultado de fórmulas cromosómicas diferentes, estimándose que el 30% de los casos estaría clínicamente subdiagnosticado. El 50% de las pacientes presenta en el estudio de cariotipo monosomía (45,X). En el resto se observa aberraciones citogenéticas variadas que incluyen pérdidas (deleción), duplicación de uno de los brazos (isocromosomas), cromosomas en anillo o presencia de material del cromosoma Y en todas las células o en un porcentaje de las mismas. El incremento en la morbi-mortalidad es un rasgo cardinal en las pacientes con síndrome de Turner, describiéndose en ellas un riesgo de muerte prematura tres veces mayor al de la población en general y la expectativa de vida reducida en al menos una década.Los factores de mal pronóstico son atribuidos a causas endocrinológicas, nerviosas, cardiovasculares, respiratorias, digestivas y genitourinarias que acompañan a esta entidad. Sin embargo, se postula a la enfermedad cardiovascular como la principal responsable del descenso en la expectativa de vida y se considera que más de la mitad del exceso de mortalidad es atribuible a esta causa. Publicaciones recientes han demostrado la presencia de aterogénesis prematura en pacientes con este síndrome, describiendo incluso casos con afectación en la vida embrionaria(1). La evaluación y cuantificación de diferentes factores de riesgo como: hipertensión arterial, insulino-resistencia, dislipidemia, obesidad, deficiencia estrogénica, deficiencia de hormona de crecimiento (GH) o un sistema de coagulación hipercoagulable en este grupo, permite establecer la asociación a aterosclerosis.Si bien existe una correlación probada entre la expresión fenotípica y el cariotipo de estas pacientes en relación a la presencia de distintos tipos de cardiopatías congénitas(2), anomalías electrocardiográficas(3)y la asociación con cuadros de diabetes y otros trastornos autoinmunes, la causa subyacente a la disfunción del endotelio vascular aún no está completamente estudiada. En las etiologías propuestas se han postulado varios genes como candidatos (TGFβ, VEGF, etc) pero la participación de los mismos no está aún del todo clara. De entre las aberraciones numéricas que afectan al cromosoma X no incluidas en el grupo anteriormente mencionado se cita: el síndrome de Klinefelter, las trisomías y tetrasomías de este cromosoma. El síndrome de Klinefelter cuyo cariotipo es generalmente 47,XXY, se acompaña fenotípicamente de talla alta, infertilidad secundaria a azoospermia y disminución del volumen testicular. Resulta llamativo que en este síndrome también se estén estudiando marcadores de riesgo ya que, la bibliografía reciente, describe que los pacientes afectados presentan una reducción de la expectativa de vida y aumento de la mortalidad por patología cardiovascular. Aunque las anomalías citogenéticas o los efectos de la disminución de la testosterona se proponen como agentes causales, la etiología permanece aún poco clara(4). Surge entonces, de acuerdo a la literatura consultada, la necesidad de contar con marcadores que permitan estratificar el riesgo de estos pacientes con la finalidad de valorar el estado del lecho vascular, determinar cambios en la conducta clínica y establecer su pronóstico. De los métodos de diagnóstico no invasivos que predicen el riesgo cardiovascular y la disfunción endotelial se propone la utilización del ecodoppler vascular. Esta metodología permite cuantificar el engrosamiento a nivel vascular del complejo íntima- media (ECIM), valorando la ecogenicidad a nivel de las arterias carótidas (parámetro estático) o evaluar la dilatación mediada por flujo a nivel de la arteria braquial (DMFB) luego de su oclusión (parámetro dinámico). El resultado de estos estudios guarda estrecha correlación con otros marcadores de aterogénesis como son los que evalúan perfil lipídico, insulinorresistencia y estrés oxidativo(5,6,7). Algunas de estas metodologías han sido empleadas en pacientes con síndrome de Turner y han demostrado su utilidad en el diagnóstico temprano de la enfermedad vascular endotelial(8). Algunos estudios recientes proponen al gen ACE2 como un nuevo marcador candidato de riesgo cardiovascular. Este gen ubicado en el cromosoma X (locus Xp22), codifica para la enzima convertidora de angiotensina II y juega un rol fundamental en el sistema renina- angiotensina- aldosterona. Algunas de sus funciones principales estarían involucradas en el control de la tensión arterial, el remodelado vascular, la inflamación, trombosis y ruptura de la placa ateromatosa(9). Actualmente se investiga la asociación de polimorfismos o mutaciones que alteran la expresión de este gen como mecanismos desencadenantes de disfunción endotelial, pero su relación con aberraciones del cromosoma X aún no ha sido aún estudiada. El objetivo de este estudio es evaluar el riesgo cardiovascular ampliando la utilización del ecodoppler vascular como parámetro predictor de riesgo, a todos los pacientes portadores de aberraciones cromosómicas del X con la finalidad de establecer la existencia de una relación cariotipo- fenotipo. Considerando el locus del gen ACE2 se pretende además, investigar la correlación entre la expresión génica de este gen en sangre periférica y su relación con el cariotipo del grupo de pacientes estudiados. Se propone estudiar un mínimo de 30 pacientes con alteraciones citogenéticas estructurales o numéricas del cromosoma X que hayan consultado en el Instituto de Genética de la Facultad de Ciencias Médicas y que presten su consentimiento. En el Instituto de Genética se actualizarán los datos de las historias clínicas respectivas, detallando específicamente las variables fenotípicas del examen físico y se registrarán aquellos parámetros determinantes del pronóstico clínico que hayan sido previamente estudiados en cada paciente (tensión arterial, perfil lipídico, insulinorresistencia, índice HOMA, tratamiento hormonal de reemplazo y obesidad) así como la fórmula cromosómica resultante del estudio de cariotipo. En el grupo de pacientes con síndrome de Turner y atendiendo a lo recomendado por la bibliografía reciente, se analizará mediante extracción de ADN, la presencia o ausencia de material del cromosoma Y (gen SRY) aunque no existan signos de virilización en el fenotipo o alteraciones sugestivas en el cariotipo(10). Se evaluará, además, la expresión del gen ACE2 determinando la actividad de la enzima convertidora de angiotensina II en sangre periférica de los pacientes seleccionados, mediante la utilización del Kit Enzyme-linkedImmunosorbentAssayForAngiotensin I ConvertingEnzyme 2 (ACE2), provisto por la marca USCN de LifeScience. El equipo integrante de Investigaciones Cardiológicas de Cuyo realizará la evaluación de los parámetros vasculares estáticos (ECIM) y dinámicos (DMFB) en el grupo de pacientes seleccionados a través del estudio de ecodoppler vascular. Se relacionarán los datos del estudio citogenético con las variables clínicas seleccionadas, los marcadores de riesgo por ecodoppler vascular y la expresión del gen ACE2 en sangre periférica y se efectuará el análisis estadístico. Con los resultados se espera determinar la relación entre variantes en el cariotipo y la expresión de marcadores de riesgo cardiovascular con importancia pronóstica. Se pretende relacionar además los hallazgos de la citogenética, la clínica y la expresión proteica así como valorizar los marcadores propuestos como factores pronósticos que permitan en un futuro modificar la conducta terapéutica de manera temprana, en pos de una mejora en la calidad de vida de los pacientes. Bibliografía 1- Mortensen et al, Cardiovascular Phenotype in TurnerSyndrome—Integrating Cardiology,Genetics, and Endocrinology. Endocrine Reviews, October 2012, 33(5):677–714 2- Poprawski, et al. Cardiovascular abnormalities in patients with Turner syndrome according to karyotype. Own experience and literature review. ARCHIWUM MEDYCYNY WEWNĘTRZNEJ 2009; 119 (7-8) 3- Bondy CA, Van PL, Bakalov VK et al. Prolongation of the cardiac QTc interval in Turnersyndrome. Medicine. 2006;85:75-81. 4- Di Mambro et al, Endothelial progenitor cells as a new cardiovascular risk factor in Klinefelter’s syndrome. Molecular Human Reproduction, 2010,Vol.16, No.6 pp. 411–417. 5- Lars Lind et al. Brachial Artery Intima-Media Thickness and Echogenicityin Relation to Lipids and Markers of Oxidative Stress in ElderlySubjects:-The Prospective Investigation of the Vasculaturein Uppsala Seniors (PIVUS) Study. Lipids (2008) 43:133–141. 6- Andersson J et al, Echogenecity of the carotid intima–media complex is related to cardiovascular risk factors, dyslipidemia, oxidative stress and inflammation:The Prospective Investigation of the Vasculature in Uppsala Seniors (PIVUS) study.Atherosclerosis June 2009 (Vol. 204, Issue 2, Pages 612-618. 7- Lind L et al, The echogenicity of the intima- media complex in the common carotid artery is related to insulin resistance measured by hyperinsulinemic clamp in elderly men. ClinPhysiolFunct Imaging. 2013 Mar;33(2):137-42. 8- Clodagh S O’Gorman1 et al, Impaired endothelial function in pediatricpatients with Turner Syndrome and healthycontrols: a case-control study. International Journal of PediatricEndocrinology 2012, 2012:5. 9- Burrel L et al,TheACE2 gene: its potential as a functionalcandidate for cardiovascular disease. Clinical Science (2013) 124, 65–76. 10- Rocco de Oliveira RM et al, Y chromosome in Turner syndrome: review of the literature.Sao Paulo Med J. 2009; 127(6):373-8. 11- Thompsom et al. Genética en Medicina. 7° Edición. 2008. Masson. Elsevier. España. 12- Turtle et al. Assessing and addressing cardiovascular risk in adults with Turner Syndrome. Blackwell Publishing Ltd (2012)

2- La aplicación de las técnicas propuestas en forma integrada representará una innovación en la metodología diagnóstica en nuestro medio y en la región.

4- La validez de los parámetros de riesgo cardiovascular propuestos en este grupo le brindará a colegas de diferentes especialidades la posibilidad de su uso en otras patologías que conlleven un alto riesgo de disfunción endotelial y aterogénesis.

<p justify;"=""> 5- Se brindará en cada caso el correspondiente asesoramiento genético y los resultados obtenidos se informarán a cada paciente si manifiestan interés en conocerlos. .

General

Los espermatozoide recién eyaculados, son incapaces de fecundar, necesitando cumplir con etapas previas como la “capacitación espermática” (Austin , 1952; Chang , 1951) y la reacción acrosomal (Yanagimachi, 1994). Una correcta capacitación requiere la perdida de factores decapcitantes presentes en el plasma seminal (Bedoford  and CHANG, 1962; Chang , 1951), como así también la presencia de Ca²⁺ y HCO^-₃. Este proceso genera cambios tanto en la cabeza como  en el flagelo dando como resultado hipermotilidad y la capacidad de exocitar el contenido acrosomal (De Lamirande E. et al., 1997). En el laboratorio es posible imitar la capacitación removiendo el plasma seminal y agregando factores como albumina, Ca²⁺ y HCO^-₃ (De Lamirande E. et al., 1997).

Mientras diferentes grupos han demostrado las cascadas de  eventos intracelulares que ocurren durante la capacitación espermática (Harrison, 2004) (Salicioni et al., 2007) (Leclerc and Goupil, 2002) (Baker et al., 2006) (Salicioni et al., 2007) (Battistone et al., 2013), poco es lo que sabemos respecto del estado de la maquinaria de fusión de membranas (necesaria para la reacción acrosomal) durante dicho proceso.

            Una gran cantidad de datos experimentales evidencian que la maquinaria de fusión de membranas se encuentra inactiva, evitando fusiones de membranas prematuras en espermatozoides capacitados (De Blas et al., 2005); (Zanetti and Mayorga, 2009); (Branham et al., 2009; Michaut et al., 2001; Roggero et al., 2005; Zarelli et al., 2009).

Por todo esto, este proyecto tiene por objetivo general, estudiar los eventos de  maduración de la maquinaria molecular de fusión de membranas durante el proceso de capacitación en espermatozoides humanos.

Objetivos específicos:

1. Sabemos que en espermatozoides capacitados, las SNAREs se encuentran ensambladas en complejo cis, insensibles a neurotoxinas. Por otro lado, datos preliminares en espermatozoides no capacitados muestran que las SNAREs son sensibles a neurotoxinas. Estas observaciones indican que durante la capacitación la maquinaria de fusión sufre una suerte de maduración, generando resistencia a las neurotoxinas. En este sentido, deseamos estudiar cual es el rol que cumplen los diferentes factores de la capacitación como Ca⁺², HCO^-₃ y albúmina en el ensamblaje de los SNAREs y dilucidar las cascadas de señalización que participan en este proceso.
2. Sabemos que NSF se encuentra fosforilada en tirosina en espermatozoides ya capacitados, siendo necesario su desfosforilación para dar lugar a la fusión de membranas (Zarelli et al., 2009). Si bien una característica fundamental de la capacitación es el aumento de proteínas fosforiladas principalmente en residuos tirosina  (Ficarro et al., 2002), hasta el momento no existen estudios que muestren el estado de fosforilación de NSF en espermatozoides no capacitados. (Zarelli et al., 2009). Por lo tanto proponemos como segundo objetivo  determinar cuál es el estado de fosforilación de NSF antes y durante la capacitación y cómo es regulado dicho proceso.
3. Sabemos que sinaptotagmina se encuentra fosforilada en espermatozoides capacitados en reposo, y que uno de los primeros pasos de la exocitosis acrosomal, requiere la desfosforilación de esta proteína por la fosfatasa calcio dependiente calcineurina (Castillo et al., 2010). Nuestro interés es determinar cómo se regula la fosforilación de sinaptotagmina durante la capacitación.

Como se menciono anteriormente, los resultados preliminares muestran que las proteínas SNAREs se encuentran en estado monomérico, sensibles a neurotoxinas, en espermatozoides incubados en un medio deficiente en BSA. Esta observación indica que espermatozoides no capacitados o capacitados deficientemente poseen una maquinaria de fusión de membrana inmadura, incapaz de responder ante estímulos fisiológicos inductores de la reacción acrosomal. De manera similar, creemos que una capacitación deficiente en factores como Ca²⁺ y HCO^-_3, impediría la correcta maduración de la maquinaria de fusión de membranas, siendo por lo tanto incapaces de exocitar el contenido acrosomal. Así, el juego de incorporación al medio de capacitación de algunos factores pero no todos, nos será útil para determinar la secuencia de eventos, para lograr una correcta maduración de las SNAREs.

Es sabido que en eventos tardíos observados durante la capacitación, la presencia de albumina produce una depleción parcial de colesterol de la membrana plasmática y un aumento de Ca²⁺, lo cual provocaría la activación de tirosin kinasas (Baker et al., 2006; Krapf et al., 2010). Estos últimos eventos generan un incremento de las proteínas fosforiladas en tirosina, hipermotilidad espermática y la preparación final para exocitosis acrosomal. Así entonces la incubación de espermatozoides no capacitados, con o sin β-ciclodextrina será de vital importancia para conocer si la maduración de la maquinaria de fusión es dependiente de la depleción de colesterol de la membrana plasmática o si es BSA per se la que induce dicha maduración.

La fosforilación de proteínas se ha descripto como un evento necesario para una correcta capacitación. En nuestro laboratorio, se observó que la chaperona NSF se encuentra fosforilada en tirosina en espermatozoides capacitados en reposo, siendo necesario su desfosforilación para que el proceso de exocitosis se lleve a cabo. Esperamos que en espermatozoides no capacitados NSF debiera encontrarse no fosforilada, permitiendo que las SNAREs se encuentren en estado sensibles a neurotoxinas. Mientras que durante la capacitación NSF sería fosforilada en tirosina,  generando así el estado ensamblado de las SNAREs, resistente a neurotoxinas.

Como hemos mencionado, durante la capacitación se ponen en marcha una importante cantidad de eventos de señalización. Creemos que parte de estos eventos, generan la  inactivación por fosforilación de Sinaptotagmina. Esperamos que los espermatozoides no capacitados posean sinaptotagmina no fosforilada, contribuyendo a un estado desensamblado o inmaduro de la maquinaria de fusión de membranas.

La capacitación espermática y la reacción acrosomal, son eventos previos necesarios para la fusión de gametas. Así, la capacitación confiere al espermatozoide modificaciones tanto en la cabeza como en el flagelo, dando como resultado, hipermotilidad y la capacidad de exocitar su contenido acrosomal. Por otro lado, la reacción acrosomal permite la exocitosis del contenido acrosomal,  produciendo además cambios en la topología de su membrana, para poder fusionarse con el ovocito.

In vivo,  la capacitación espermática requiere del contacto de esta célula con el tracto genital femenino, mientras que, in vitro, la capacitación puede ser imitada removiendo el fluido seminal y agregando factores “capacitantes” como albumina, Ca²⁺ y HCO^-₃. Diferentes grupos han estudiado los eventos de señalización que ocurren durante la capacitación, mientras que en nuestro grupo se han estudiado aquellos eventos requeridos para una correcta fusión de membrana durante la exocitosis acrosomal. A pesar de todo esto, existen aun numerosos puntos sin estudiar que vinculan ambas etapas necesarias para la fecundación.

Este proyecto propone como objetivos,  estudiar cual es el estado de la maquinaria de fusión de membranas en etapas previas y durante la capacitación espermática, haciendo énfasis en las proteínas SNAREs, NSF y sinaptotagmina;  estudiar cómo influyen los factores capacitantes como albumina, Ca²⁺ y HCO^-₃ sobre la maquinaria molecular exocítica; y determinar los eventos de señalización que de estos factores deriven sobre la maduración de la maquinaria de fusión de membranas.

-Establecimiento de líneas de trabajo que incorporan nuevas tecnologías al
IHEM y a la Facultad de Ciencias Médicas de la UNCuyo.
-Se difundirán los resultados logrados en seminarios internos y generales, para todo el personal del IHEM.
-Formación de recursos humanos: se planifica la incorporación de estudiantes de medicina, como así también alumnos del ICB  y de universidades nacionales para realización de tesis de licenciatura.
-Publicaciones: se espera volcar los resultados en dos a tres publicaciones en revistas internacionales con referato de mediano-alto índice de impacto.
-Comunicaciones a congresos nacionales e internacionales: todos los integrantes del equipo irán a un congreso nacional o internacional por año.  Es de especial interés para nuestro grupo presentar y discutir nuestros resultados con pares de la comunidad internacional

Sperm capacitation and acrosomal reaction are necessary and previous events for gamete fusion. Capacitation modifies both head and flagellum, conferring the ability to exocyts the acrosomal content and hypermotility. Furthermore, acrosome reaction produce membrane topology changes, allow the fusion with the egg.

In vivo, capacitation need the sperm contacts  with the female genital tract, while, in vitro, can be imitated by removing the seminal fluid and adding " capacitating factors " as albumin , Ca^{2 +} and HCO ^-₃. Different groups have studied the signaling events produces during capacitation, as the same time our group has studied those events required for proper membrane fusion during acrosomal exocytosis. Even so, there are many points have not been studied until now which allows the link of these two process.

The aims of this project, pretend clarify which is the membrane fusion machinery state before and during capacitation process, doing focus on SNAREs, NSF and synaptotagmin proteins; to study how does the capacitating factors (albumin , Ca2 + and HCO-3) work over molecular membrane fusion machinery ; and to find the signaling events involved on this molecular  machinery maturation.

Objetivo General: 

 Estudiar la participación de estos inhibidores de serín proteasas presentes en el fluido epididimario en el fenómeno de asociación de espermatozoides.

Objetivos Específicos:

-Determinar  el origen de los inhibidores de proteasas presentes en el fluido epididimario caudal.

-Analizar la participación de los inhibidores de proteasas en la formación  de las asociaciones de espermatozoides (Rosetas) durante su almacenamiento en la cola del epidídimo.

-Determinar si la secreción de Serpina IF es un proceso andrógeno- dependiente y cuál será el efecto de la privación de andrógenos en su participación en la asociación transitoria de espermatozoides in vitro.

-Avanzar el la elucidación de los mecanismos moleculares y celulares subyacentes que permiten la correcta maduración epididimaria de la gameta masculina.

-Publicar los resultados obtenidos en revistas de reproducción , indexadas de difusión internacional y buen factor de impacto.

-Extender los conocimientos adquiridos a la actividad docente.

Durante el tránsito   epididimario se producen  una serie de eventos que permiten a los espermatozoides adquirir la maduración necesaria para cumplir su rol en la fertilización.   Uno  de estos fenómenos, la asociación de espermatozoides entre sí, se observa sólo en las regiones más distales del  epidídimo (cola y conducto deferente) y ha sido descripta en numerosas especies de mamíferos. En la rata estas asociaciones se denominan  Rosetas y consisten en una decena de espermatozoides unidos por sus cabezas, mientras permanecen  almacenados. Luego de la eyaculación,  los espermatozoides adquieren movilidad y se desprenden gradualmente hasta desensamblar completamente las Rosetas. En trabajos previos mediante sucesivas cromatografías purificamos  una fracción de proteínas  con  PM  entre 40 y 80 KDa,  a partir del fluido epididimario de rata de la región caudal. Al  agregar estas proteínas   a una  suspensión de espermatozoides aislados, observamos  la reasociación  de espermatozoides en Rosetas   in Vitro. Mediante   espectrometría MALDI TOF  identificamos  en esta fracción proteica  dos miembros de la familia de las SERPINAS (inhibidores de serín proteinasas): a-1 Antitripsina  y Serpina 1F. Mediante inmunohistoquímica y microscopía de fluorescencia utilizando anticuerpos contra Serpina 1F determinaremos la localización de esta proteína a lo largo del tracto epididimario. La extracción de ARN total de los distintos regiones  nos permitirá mediante RT-PCR establecer la expresión de Serpina 1F a lo largo del ducto epididimario.  La andrógenodependencia de la secreción de Serpina IF y el efecto de la privación de andrógenos en la asociación transitoria de espermatozoides durante el tránsito epididimario se analizará mediante la administración de antiandrógenos.  El papel que cumplen las enzimas antiproteolíticas en la maduración epididimaria es desconocido hasta el momento,  pero podrían estar relacionadas con la protección de los espermatozoides   mientras se encuentran almacenados antes de ser eyaculados.   

 Potenciales beneficiarios del proyecto:

-Contribución  a la actividad agropecuaria mediante el mejoramiento del conocimiento actual de los mecanismos involucrados en la reproducción animal.

-Promoción  del mejoramiento continúo de la actividad académica de las clases dictadas a los alumnos.

-Búsqueda de nuevos conocimientos aplicables a las incógnitas de la andrología actual.  

During the epididymal transit  a series of  events take place that allow the sperm to acquire the necessary ripeness to fulfill his role in the fertilization. One of these phenomena, the transient  sperm association,   is observed only in the more distal regions of  the epididymis (tail and vas deferent) and it has been descript in numerous species of mammals. In the rat  these associations are named Rosettes and consist of a dozen of sperms joined by their heads, while they remain stored. After the ejaculation, the sperms acquire motility and the  sperm detach gradually untill the rosette is completely dis assembled. In previous works by means of successive chromatographies we purify a fraction of proteins with PM between 40 and 80 KDa, from the rat epididymal fluid  from the caudal region. On having added these proteins to a suspension of isolated sperms, we observe the reassociation of sperms  conforming Rosettes  in vitro . By means of  MALDI TOF  spectrometry  we identify in this proteic  fraction two members of the  Serpin family (Serin proteases inhibitors):   alpha 1 Antitrypsin and Serpin 1F. By means of inmunohistoquímica and fluorescence microscopy  using antibodies against Serpin 1F we will determine the location of this protein along the epididymal tract. The extraction of total ARN from  different regions will allow us by means of RT-PCR to establish Serpin's expression. The androgen dependency of Serpin  IF secretion  and the effect of the androgens deprivation  in the transient sperm association  during the epididymal transit  will be analyzed by means of the administration of  an antiandrogen. The rol  of anti proteolytics enzimes in epididymal maturation is not known up to the moment, but they might be related to the protection of the sperms while they are stored before being ejaculated.

Objetivos

El objetivo principal del presente trabajo es investigar si existe un efecto no genómico del AR en la motilidad y morfología de células de cáncer de mama.

Objetivos específicos:

1-           Investigar si existe un efecto no genómico del AR, en la regulación del proceso de migración mediante el control de moesin, c-Src y FAK en células de cáncer de mama T47-D.

2-           Identificar el posible mecanismo molecular por el cual el AR regularía/modularía, mediante fosforilaciones específicas, la actividad de moesin, c-Src, y FAK.

3-           Determinar el posible efecto no genómico del AR en la morfología en células de cáncer de mama, mediante el estudio del remodelamiento del citoesqueleto actínico y la redistribución de proteínas involucradas en la migración e invasión celular (moesin, FAK y c-Src).

Esperamos corroborar que el AR además de modular la expresión de proteínas vinculadas con la migración (moesin, c-Src, y FAK) podría activar dichas proteínas a tiempos breves; generando la misma respuesta final que es la inhibición de la migración.

También esperamos observar un efecto no genómico del AR, en la regulación del proceso de migración mediante el control de las proteínas estudiadas e intentar caracterizar dicho efecto en la morfología en células de cáncer de mama, mediante el estudio del citoesqueleto actínico. Así mismo intentaremos dar respuesta en el análisis de las vías de señalización y los procesos de fosfolilación/desfosforilación que estarían envueltos en dicho efecto. 

Los resultados preliminares del presente proyecto serán expuestos en congresos nacionales e internacionales de la especialidad, que cuentan con evaluación de pares. Los resultados finales serán publicados en revistas internacionales con referato. También se discutirán los resultados en seminarios internos de nuestra institución. Por otra parte, el desarrollo de este trabajo contribuirá en la consolidación de nuestro grupo y en la formación en investigación científica de la becaria del Instituto Nacional del Cáncer, Gisel Gauna.

Además, la ejecución del proyecto permitirá incorporar a nuestro instituto metodologías de biología molecular de vanguardia,  como lo es la interferencia del ARN con small interfering RNA, transfecciones con plásmidos negativos y positivos, técnicas de inmunofluorescencia, etc.

Objetivo general

Contribuir al conocimiento de la participación de los mastocitos en la patogénesis del cáncer de mama.

Objetivos particulares

1. Identificar por inmunohistoquímica los mastocitos intratumorales y peritumorales, inmunopositivos a NGF en ratones con cáncer de mama derivados de líneas celulares IBH-4 e IBH-6.
2. Cuantificar los mastocitos NGF positivos intratumorales y peritumorales, en tumores de diferentes grados de desarrollo, correspondientes a ratones con cáncer de mama derivados de líneas celulares IBH-4 e IBH-6.
3. Correlacionar el volumen tumoral (obtenido en trabajos previos) con el número de mastocitos inmunopositivos a NGF intratumorales y peritumorales, correspondientes a ratones con cáncer de mama derivados de líneas celulares IBH-4 e IBH-6.

<span justify;"="">Estos aportes podrían servir además como sustento para futuros procedimientos diagnósticos o bien para terapias que reviertan la propagación del cáncer de mama y de otros cánceres que tengan características similares en cuanto a la acumulación de mastocitos alrededor de la zona de invasión de la neoplasia, como el cáncer cérvico-uterino, el melanoma maligno y el adenocarcinoma colorrectal. 

<span justify;"="">Los mastocitos son células de origen hemopoyético que migran a los tejidos conectivos, donde maduran dependiendo de las condiciones microambientales y pueden promover tanto el desarrollo como la inhibición del crecimiento tumoral de diferentes maneras. Lo promueven a través de moléculas como la heparina (angiogénesis), la histamina y distintos factores de crecimiento como el factor de crecimiento nervioso (NGF, del inglés: neuron growth factor). Al mismo tiempo, por ser células ricas en metaloproteasas, favorecen la invasividad del tumor. Por otra parte, los mastocitos podrían también inhibir el desarrollo tumoral por la secreción de varias citoquinas y enzimas proteolíticas que participan en la inducción de apoptosis de células malignas, tales como la IL-4. Se necesita seguir profundizando en las investigaciones acerca del rol dual de estas células tanto en la inhibición como en la promoción del crecimiento tumoral. En trabajos previos hemos estudiado la relación entre las poblaciones de mastocitos intra y peritumorales con el desarrollo del tumor, en distintas líneas de cáncer de mama desarrolladas en ratones atímicos. Ahora, nos proponemos estudiar distintos tipos de mediadores como el factor de crecimiento nervioso (NGF) para ver su posible vinculación con el desarrollo tumoral. Para ello, se extraerán los tumores desarrollados en los animales, se evaluará el grado de desarrollo de los mismos a través de la medición de su volumen y se fijarán y se procesarán con la técnica histológica para luego realizar la inmunomarcación del NGF. Se procederá a la toma de microfotografías para la posterior cuantificación de las superficies tumorales y al conteo de mastocitos en las regiones intra y peritumorales con un programa para análisis de imágenes “Image J” (mofometría). Los resultados se evaluarán estadísticamente. Teniendo en cuenta que el cáncer de mama es la enfermedad neoplásica más común en mujeres y que pocos estudios se han realizado hasta el momento en relación con la función de los mastocitos en la patogénesis del cáncer de mama, el presente plan propone estudiar la probable participación de mastocitos en el desarrollo tumoral de cáncer mamario. 

La transferencia se realizará por medio de presentaciones a congresos específicos del tema y por publicaciones de ámbito internacional. Además, se pretende contribuir a la formación de recursos humanos, fundamentalmente estudiantes de medicina que podrán iniciarse o continuar tareas en el campo de la investigación científica y en el entrenamiento de tareas de laboratorio. 

Mast cells derive from a specific bone marrow progenitor cell and migrate into tissues where they mature depending on the microenvironmental conditions. Mast cells may promote tumour development throughmany different ways: could facilitate tumour angiogenesis through heparin-like molecules and by secretion of histamine and growth factors Moreover mast cells are also rich in metalloproteases that contribute to the majority of proteolytic components necessary for tumour invasiveness. On the other hand, mast cells could also be detrimental to tumour growth by secreting several cytokines and proteolytic enzymes participating in inducing apoptosis of the malignant cells, such as IL-4. The dual role of mast cells in inhibiting or promoting tumour growth needs to be further investigated. We study the relation with mast cells intra-tumour and peri-tumour in two cells lines of breast cancer developmented in atimic mice. Tumours will be extract, mesaurement and fixing with formalin and embedded in paraffin. The material will cut in 4-6 μm thick sections, deparaffinised and stained with inmunochemestry by anti-NGF. Microphotography will obtain, mast cell intra and peri-tumour will count and process with image analize “image J”. Statistical analyses will make. Few studies of stromal mast cells in invasive breast carcinomas have been done and two previous studies have indicated that many stromal mast cells are correlated to a favourable prognosis. However, the studies are still few and further investigations are needed in order to elucidate the precise role of mast cells in the tumourigenesis. 

DEMOSTRAR EL EFECTO HIPOGLUCEMIANTE Y ANTIOXIDANTE DEL EXTRACTO METANÓLICO  DE PLANTAGO MAJOR EN RATAS DIABÉTICA INDUCIDAS POR ALLOXANA.

* Determinar los valores de glucemia basales y experimentales en las ratas diabéticas.
* Investigar a través de la determinación de la insulina  el probable efecto secretagogo del extracto metanólico del llantén.
* Estudiar el perfil lipídico de las ratas diabéticas como parámetros de complicaciones en DM II
* Evaluar la función renal de las ratas tratadas con alloxana por las posibles alteraciones en la función renal. Se medirá creatinina y urea.
* Determinar parámetros indicadores de estrés oxidativo: MDA( malonildialdehído) y mecanismos de defensa TAS y SOD ( Antioxidantes totales y superóxido dismutasa)
 

Los resultados que se esperan de este trabajo es  demostrar el efecto hipoglucemiante del  Plantago major en ratas tratadas con alloxana  y su propiedad antioxidante al neutralizar la producción de radicales libres evitando la lipoperoxidación y sus consecuencia.
También  esta el compromiso de hacer investigación con sentido social considerando que los resultados obtenidos puedan ser de utilidad  como terapéutica complementaria  en la diabetes Mellitus.

Los resultados obtenidos en este Proyecto serán presentados en jornadas , ateneos, congresos . Podrán ser publicados en revistas nacionales y extranjeras y serán divulgados en seminarios.
Queda abierta la posibilidad de incorporación de estudiantes avanzados , becarios al equipo de investigación .
El beneficio a nivel social es el de disponer del Plantago major como una terapia alternativa , basada en compuestos naturales , para el tratamiento de la diabetes mellitus II , enfermedad que se ha incremento a través de los años y con alto impacto social.
 

Diabetes mellitus comprises a group of metabolic diseases characterized by hyperglycemia due to an absolute deficit ( I Diabetes Mellitus ) or relative insulin (Diabetes Mellitus II ) leading to metabolic abnormalities in carbohydrate , lipid and protein .
Neither the glucose can enter the cells of the body nor be used efficiently. This produces an imbalance between the production of reactive oxygen species (ROS) and antioxidant defense capacity by introducing the oxidative stress. This in turn causes degeneration of the cell walls of blood vessels, retinal damage, kidney damage, atherosclerosis, among other CNS disorders. The oral hypoglycemic agents are a heterogeneous group of drugs that reduce blood glucose level after oral administration through pancreatic and extrapancreatic mechanisms. Anti-diabetic medicinal plants can become a viable alternative for those hypoglycemics in order to improve the quality of life of those suffering from this pathology.
Plantago major (Plantain) is a medicinal plant use very old. Published works attributed of antioxidant, analgesic, gastric cytoprotective as well as hypoglycemic and hypocholesterolemic effects.
The purpose of this investigation is to study the antioxidant and hypoglycemic activity of Plantago major in diabetic rats experimentally induced by alloxan.
Wistar rats were used (24 ) of 180-200 g distributed into four lots .
Control Lot 1, Lot 2 diabetic rats induced by alloxan, Lot 3 diabetic rats induced by alloxan and treated with metformin and Lot 4: diabetic rats induced by alloxan and treated with metabolic plantain extract ( 500mg ) . Intraperitoneal injection of alloxan at doses of 150 mg / kg body weight perform the experimental Type II diabetes. Within seven days of the administration of alloxan, we determine the blood glucose level to verify the establishment of Diabetes Mellitus type II, obtaining blood samples from each animal by puncture of the tail vein. Then proceed to give plantain extract and metformin metabolic by stomach tube. After treatment hypoglycemic blood it will extract blood at the time: 0, 120, 240 and 360 minutes for determination of blood glucose, insulin, MDA and TAS. We also evaluate lipid profile (cholesterol, triglycerides, HDL - cholesterol, LDL –cholesterol), and urea and creatinine to analyze the renal complications in diabetes mellitus II. ANOVA with one or 2-way followed by Bonferroni test evaluate the results.
Expected results are that lyophilized Plantago major at 10% produce lowering of blood glucose in diabetic rats by reducing oxidative stress that avoids the complications associated with diabetes. Therefore, it would be a therapeutic alternative in the treatment of diabetes mellitus II.

·         Relacionar el desempeño de dichas cohortes con la procedencia escolar.

<p 53.45pt;"=""> ·         Optimizar la oferta de preparación que brinda la Facultad de Ciencias Médicas para el ingreso a sus carreras. 

Cuando se implementó el curso de nivelación semipresencial, hace once años, se pensó en una oferta de preparación para los aspirantes que fuera lo suficientemente completa y eficiente como para garantizar la igualdad de oportunidades en el ingreso a la Universidad.

En el transcurso de este tiempo, en base a la evaluación continua de la propuesta y la adecuación y ajustes permanentes  de la organización y de  los recursos educativos, el curso se ha convertido en un requisito prácticamente indispensable para los estudiantes que aspiran a ingresar.

Sin embargo y debido al compromiso con la sociedad de la universidad pública de gestión estatal como la nuestra, consideramos que es necesario aumentar los esfuerzos para lograr que los estudiantes lleguen con mejor preparación a las instancias de nivelación y tengan mayores posibilidades de éxito en los exámenes.

Entendemos que esta mejora en la preparación debe lograrse en la etapa de educación media, y que las acciones propuestas podrán influenciar positivamente en las escuelas responsables de dicha formación que podrán tener egresados mejor capacitados para enfrentar las exigencias del ingreso y permanencia en la Universidad.

Los aspirantes a las carreras de la Facultad no logran compensar la brecha existente entre los conocimientos que  poseen y los que están demandando las carreras ofrecidas, únicamente mediante la preparación individual y la preparación que brinda la Universidad.

En el proyecto anterior se alcanzó el objetivo de caracterizar a los aspirantes según su procedencia y modalidad escolar, demostrando que aquellos que tienen mayores chances de ingresar son los que provienen de colegios dependientes de la Universidad Nacional de Cuyo en primer lugar y de escuelas privadas en segundo lugar. Con respecto a la modalidad, la de Ciencias Naturales fue un buen predictor para la carrera de Medicina y de Técnicos, mientras que para Enfermería fue indistinto. Para completar el estudio se hace necesario analizar otra información que posee la Unidad de Admisión, como por ejemplo, el desempeño de los aspirantes en el curso de nivelación  y relacionarla con la información recolectada previamente.  De este modo se podría establecer el valor predictivo de ciertos indicadores para ingreso y la permanencia de los estudiantes.

• Objetivos:

·         Analizar el desempeño de los aspirantes a las carreras de la Facultad de Ciencias Médicas en el curso de nivelación para las cohortes 2010, 2011, 2012 y 2013.

·         Relacionar el desempeño de dichas cohortes con la procedencia escolar.

·         Optimizar la oferta de preparación que brinda la Facultad de Ciencias Médicas para el ingreso a sus carreras.

La transferencia se realizará a través de la difusión de los resultados por los canales informativos que ofrece la universidad, presentación en congresos, jornadas y publicaciones.  Los beneficiarios serán los estudiantes de nivel medio que aspiran a ingresar a las carreras de la Facultad de Ciencias Médicas.

The selection of candidates for admission to Medical and other careers of Health Sciences is a constant topic of today both nationally and internationally. The Faculty of Medical Sciences of the National University of Cuyo has a selective system by examination of contents of secondary education and offers a leveling course of one semester. It is observed that a high percentage of applicants fail to offset the difference between the knowledge possessed and offered claiming careers, only using coaching and preparation offered by the Faculty . In the previous project was reached in order to characterize the candidates according to their origin and school mode , showing that those who have higher chances of entering are those from schools under the National University of Cuyo in the first place and private schools secondly .

To complete the study is necessary to analyze other information held by the Admission Unit, for example, the performance of the candidates in the leveling course and relate it to the information previously collected. In this way one could establish the predictive value of certain indicators for entry and retention of students.

• Objectives:

• Analyze the performance of aspiring to careers in the Faculty of Medical Sciences in the course of leveling for cohorts 2010, 2011 , 2012 and 2013 .

• Relate the performance of those cohorts with school origin .

• Optimize the supply of preparation provided by the Faculty of Medical Sciences for admission to their careers.

Objetivo general:

Examinar la respuesta al poscondicionamiento en modelos experimentales de obesidad y síndrome metabólico y su relación con la expresión de adipocitoquinas.

Objetivos específicos

1. Evaluar la evolución temporal de posibles cambios electrocardiográficos en los animales tratados con una dieta alta en grasa y fructosa con el fin de determinar posibles marcadores pronósticos.

2. Describir las propiedades electrofisiológicas de esta dieta en corazones aislados de rata, combinando electrogramas de superficie y potenciales de acción transmembrana y analizar la respuesta de estos corazones ante la injuria por isquemia/reperfusión.

3. Estudiar si el poscondicionamiento es capaz de proteger contra las taquiarritmias ventriculares en este modelo animal.

4. Evaluar el remodelado eléctrico asociado a marcadores de estrés oxidativo plasmáticos y tisulares.

5. Determinar los efectos de la modulación de algunas adipocitoquinas en el contexto de dietas hipergrasas.

En este estudio esperamos corroborar que exposición crónica a dietas altas en grasas y fructosa aumentará las arritmias inducidas por la isquemia-reperfusión y que atenuará la protección conferida por el poscondicionamiento.

Los resultados obtenidos podrían aportar mayor información a la comprensión de los efectos que tiene la exposición a factores de riesgo coronario sobre los mecanismos que participan en la génesis de las arritmias de reperfusión, principalmente datos sobre las variables electrofisiológicas ofreciendo un potencial sustento científico para interpretar los resultados de los estudios clínicos sobre los efectos del poscondicionamiento, que actualmente se llevan adelante.

Además, los aportes de esta investigación serán comunicados en reuniones científicas de la especialidad y enviados para su publicación en revistas con referato.

El poscondicionamiento isquémico es una maniobra cardioprotectora con propiedades antiarrítmicas que se manifiestan al realizar breves episodios de isquemia intermitente al inicio de la reperfusión. Si bien esta sencilla maniobra es muy promisoria para ser aplicada a nivel clínico, se desconoce si sus efectos beneficiosos se mantienen en corazones expuestos a factores de riesgo coronario. Nos proponemos evaluar si una dieta alta en grasa y fructosa favorece el desencadenamiento de arritmias en un contexto de estrés oxidativo aumentado como la injuria por isquemia/reperfusión, si interfiere con el efecto protector del poscondicionamiento, y si esto se relaciona a remodelado estructural y electrofisiológico provocados por la dieta. Trabajaremos con ratas Wistar alimentadas durante 6 semanas con una dieta habitual o con una dieta suplementada con 20% de grasa y 20% de fructosa. Durante el protocolo evaluaremos la evolución del peso, presión y posibles cambios en el ECG. Al finalizar compararemos el perfil metabólico y de adipocitoquinas. Estudiaremos la respuesta electrofisiológica de los corazones aislados y sometidos a isquemia/reperfusión y a la maniobra de poscondicionamiento isquémico. Demostrar que el poscondicionamiento mantiene su efecto cardioprotector en modelos experimentales de los factores de riesgo coronario serviría de soporte para estudios clínicos en curso. Los resultados podrían justificar y orientar sobre posibles diferencias en la respuesta terapéutica.

Los resultados se enviaran para ser presentados en congresos y reuniones científicas, como así también se preparan para publicarlos en revistas de la especialidad.

Demostrar que esta sencilla maniobra terapéutica mantiene su efecto cardioprotector en modelos experimentales de los principales factores de riesgo coronario como el sexo masculino, la hipertensión arterial y el síndrome metabólico serviría de soporte para estudios clínicos en curso. Los resultados podrían justificar y orientar sobre posibles diferencias en la respuesta terapéutica

Ischemic postconditioning is cardioprotective maneuver with antiarrhythmic properties which consist in brief intermittent episodes of ischemia at the onset of reperfusion. While this simple maneuver is very promising for clinical application, it is unknown whether the beneficial effects are maintained in hearts exposed to coronary risk factors . We intend to evaluate whether a diet high in fat and fructose favors the triggering of arrhythmias in a context of increased oxidative stress like ischemia/reperfusion, if it interferes with the protective effect of postconditioning, and if this is related to structural and electrophysiological remodeling caused by the diet. We will use Wistar rats fed for 6 weeks with a normal diet or a diet supplemented with 20% fat and 20 % fructose . During the protocol we will evaluate the evolution of the weight, pressure and possible changes in the ECG. At the end of the 6 week we will compare the metabolic profile and adipocytokines. We will perform electrophysiological studies in isolated heart subjected to ischemia/reperfusion and to the ischemic postconditioning maneuver. To demonstrate that postconditioning cardioprotective effect remains in experimental models of coronary risk factors would provide support for ongoing clinical studies. The results could justify and guidance on possible differences in the therapeutic response.

Objetivo general

Describir las concepciones del proceso de enseñanza-aprendizaje que tienen alumnos y docentes de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNCuyo.

Objetivos específicos

1. Determinar si las características de las concepciones de estudiantes y docentes tienen semejanzas con algunas de las teorías implícitas ya descriptas en otros estudios.

2. Analizar las semejanzas y diferencias en las concepciones sobre el proceso de enseñanza y aprendizaje entre alumnos y docentes de la Facultad.

3. <span tahoma,geneva,sans-serif;"="">Analizar las semejanzas y diferencias en las concepciones sobre el proceso de enseñanza y aprendizaje en las distintas carreras de la Facultad.

4. Identificar si existe relación entre rendimiento académico del estudiante de la Facultad y las concepción del aprendizaje y la enseñanza que sostiene.

• Descripción detallada de las características de las concepciones de estudiantes y docentes sobre el aprendizaje y la enseñanza.
• Relación de las características de las concepciones de alumnos y docentes con los tipos de teorías implícitas descriptas por otros trabajos.
• Identificación de semejanzas y diferencias en las concepciones de docentes y estudiantes.
• Identificación de semejanzas y diferencias en las concepciones de docentes y estudiantes de distintas carreras.
• Determinación de existencia o no de relación entre las concepciones de los estudiantes y su rendimiento académico.

Este proyecto aborda las concepciones de profesores y estudiantes sobre el aprendizaje y la enseñanza en la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Cuyo.

El interés de este estudio tienen que ver con la importancia de esas concepciones para la interpretación de los procesos educativos y sobre las prácticas educativas en sí, así como en la reinterpretación y la forma en que las innovaciones o propuestas de cambio pedagógico se traducen en prácticas educativas.

El estudio se realiza desde la perspectiva disciplinar de la psicología del aprendizaje, con el enfoque de teorías implícitas de la psicología cognitiva.

El abordaje metodológico combina las metodologías cuantitativa y cualitativa en la comprensión de que la metodología mixta permitirán acercarse al objeto de estudio de forma más amplia y profunda.

Como resultados se espera obtener una descripción detallada de las concepciones de los profesores y los estudiantes en términos de su aproximación a categorías descriptas por otros trabajos, de las semejanzas y diferencias entre estudiantes y docentes y entre la distintas carreras.

Disponer de este conocimiento permitirá tomar decisiones en relación con la formación continua de docentes en temas pedagógicos, la orientación más ajustada de los estudiantes y el diseño e implementación de innovaciones pedagógicas en la unidad académica en general.

Los beneficiarios directos serían los miembros de la propia comunidad educativa de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNCuyo y en forma indirecta todos aquellos que tengan inquietudes sobre el estudio de las concepciones en educación superior, específicamente en salud.

Por una parte, los estudiantes que requieren o a quienes se ofrece orientación se beneficiarán la disponibilidad, en el equipo orientador, de un conocimiento más profundo de sus concepciones sobre la enseñanza y el aprendizaje.

Por otra parte los docentes en general, aquellos responsables de la planificación de la formación continua y lo responsables de la gestión, se beneficiarán de disponer también de un conocimiento que permita identificar necesidades de autoformación, necesidades de formación que se pueden cubrir con talleres, intercambios docentes, cursos y elementos de diagnóstico para decidir las formas de construir proyectos innovadores.

La transferencia científica se realizará a través de publicaciones en revistas científicas y presentaciones en congresos. La transferencia pedagógica se realizará a través de cursos, proyectos educativos y de gestión dentro de la Unidad Académica que tengan que ver con innovaciones educativas y formación pedagógica de estudiantes y docentes.

This project addresses the conceptions of teachers and students about learning and teaching in the Faculty of Medical Sciences of the National University of Cuyo .

The interest of this study have to do with the importance of these concepts in the interpretation of educational processes and educational practice itself as well as on the reinterpretation and how they translate into educational practices or proposed pedagogical innovations.

The study is performed from the disciplinary perspective of the psychology of learning, from the standpoint of implicit theories of cognitive psychology .

The methodological approach combines quantitative and qualitative methodologies because both approaches combined help to approach the object of study in a wider and deeper way.

The expected outcome is a detailed description of the conceptions of teachers and students in terms of their approach to categories described by other studies, the similarities and differences between students and teachers and between the different courses. Having this knowledge will make easier decisions regarding continuous training both in the areas of teaching, the design and implementation of educational innovations on the school community.

1-  Identificar los  tipos de personalidad que tiene cada condición de fumador

2- Identificar que  grado de relación existe entre  los distintos tipos de personalidad y  el grado de dependencia

3- Identificar que grado de relación existe entre los tipos de personalidad y grado de severidad del tabaquismo

4- Identificar que grado de relación existe entre el tipo de recompensa y el tipo de personalidad

1-    Identificar que grado de relación existe entre grado de motivación y el tipo de  personalidad

Se espera correlacionar un tipo de personalidad con las distintas condiciones de fumador, y relacionar con dependencia, motivación, gravedad del tabaquismo,  y poder actuar en consecuencia. Posteriormente determinar relación de personalidad con metodos de cesación tabáquica

El Tabaquismo constituye un gran problema en el área de Salud, constituyendo la primer causa de enfermedad evitable en el mundo, las distintas estrategias para disminuir el tabaquismo incluyen Prevención (evitar que nuevas personas fumen), Protección (evitar que se expongan al humo no fumadores) y Cesación (que los fumadores dejen de hacerlo).

En general en los distintos niveles de intervención se menciona muy poco con respecto a factores ligados directamente a la personalidad, y su relación con condición de fumador, factor este que pudiera ser de ayuda adicional.

La hipótesis es que existe una relación entre diferente tipo de personalidad y condición de fumador.

Se realizará una encuesta a fumadores, ex fumadores y nunca fumaron, para determinar tipo de personalidad, y en grupo de fumador/exfumador: dependencia, motivación, recompensa positiva /negativa, índice paquetes/año, y medición de CO espirado.

Los resultados pueden ayudar a generar nuevos criterios de selección de pacientes a cesación tbáquica, orientación de terapia cognitivo conductual y farmacológica

- Evaluar el efecto de la dieta sobre marcadores de inflamación, de trombosis , e inmunológicos, en pacientes con SM; en 2 grupos: control (grupo I)y tratamiento (grupo II).

- Comparar los resultados obtenidos en condiciones basales (control) con los registrados a los 12 m2esess de la intervención.

- Relacionar los cambios observados con las variables de resistencia insulínica estudiadas.

- Avance en el conocimiento.

- Formación de recursos humanos por la participación de médicos residentes e integración multi disciplinaria (bioquímicos y docentes).

- Comunicaciones en eventos científicos y/o publicaciones.

Linea de investigación:afectación cardiovascular en el síndrome metabólico.

Objetivo: evaluar el efecto de la dieta sobre variables de inflamación, trombosis e inmunológicas, en pacientes de sexo femenino, con síndrome metabólico, en prevención primaria, en el ámbito ambulatorio de un hospital público.

Hipótesis: la dieta podría tener un efecto beneficioso sobre el estado protrombotico inflamatorio e inmunologico asociado a la insulino= resistencia del síndrome metabólico.

Metodología: ensayo clínico longitudinal en pacientes adultas del sexo femenino, sin evidencias clínicas de aterosclerosis. En condiciones basales y al año de la intervención; en 2 grupos: control y tratamiento.En ellas se evalúan variables cardiometabólicas ( antropométricas y de la analítica ) de inflamación, trombosis e inmunológicas; antes y después de intervención dietética. Los datos resultantes son analizados estadísticamente mediante test de student y chi cuadrado.

El producto a obtener es aplicación de una intervención dietética en prevención primaria. Sistema de transferencia: prevención primaria en ámbito ambulatorio. Formación de recursos humanos en el ámbito asistencial y docente. Beneficios esperados: modificación del riesgo cardiovascular de pacientes con síndrome metabólico.

CAMPO DE APLICACIÓN: medicina preventiva.

DISCIPLINA: medicina - cardiología

CAMPOS DE APLICACIÓN: salud humana - medicina preventiva

DISCIPLINAS: cardiología. 

A nivel académico científico: comunicación en eventos científicos de la SECYT de la UNC, y de las Sociedades Científicas a las que pertenecen los miembros del equipo.

A nivel asistencial: prevención primaria en Síndrome Metabólico (SM).

BENEFICIARIOS: pacientes con SM sin evidencias clínicas de ateroesclerosis.

Recently some evidences has been obtained wich indicates that inflammation, thrombosis and immunology disorders could be the mechanisms associated with insulin resistance in the metabolic syndrome.

In this work we will study the effect of diet on the physiopathological mechanisms associated with metabolic syndrome in patients without cardio= vascular disease.

Se propone realizar la función matemática de la corriente de sodio a partir de los resultados experimentales determinándola por el método de linealización de funciones y su modificación en cardiomiocitos de rata en dieta hiposódica, con la normalización de la corrientes de sodio en función de su capacidad para independizar de la geometría.

Determinar la función matemática por linealización de funciones de la corriente de sodio en cardiomiocitos de rata en dieta normal y en dieta hiposódica.

Determinar si la dieta hiposódica produce una variación en las constantes de la función matemática de la corriente de sodio en cardiomiocitos de rata.

De la comparación de las funciones exponenciales normalizadas, determinadas experimentalmente con el método de linealización de funciones, queremos demostrar que la constante, factor del exponente en base 10, no presentaría diferencias estadísticamente significativas, mientras que, constante factor de la base de la función, presentaría diferencias estadísticamente significativas. Habiendo probado en trabajos anteriores que las corrientes de sodio control y con hipoxia hipobárica tienen diferencias estadísticamente significativas, queremos comprobar si existe una relación entre las constantes de la función. Estos resultados servirán para un posterior análisis comparativo de las curvas que se obtengan, con las correspondientes a ratas hipertensas sometidas a dieta de bajo sodio.

Los canales de Na_v (sodio potencial dependientes) tienen un papel determinante en la despolarización supraumbral y la conducción del potencial de acción en muchas células excitables. En cardiomiocitos de ratas alimentadas con dieta de bajo sodio, se ha encontrado un aumento en la corriente de este ión. Se trabajará con miocitos aislados proveniente de ratas privadas de sodio y de ratas en dieta tradicional. Se registrará la corriente total transmembrana por medio de la técnica de patch-clamp. Se obtendrá la corriente de sodio sensible a tetrodotoxina (TTX), sustrayendo el registro de la corriente total de las células, antes y después agregar TTX. Se propone encontrar la función matemática de la corriente de sodio a partir de los resultados experimentales, determinándola por el método de linealización de funciones y determinar si existe modificación en las constantes de esa función, obtenidas de ambos tipos celulares. Se normalizará la corriente en función de la capacidad de la membrana para independizarla de la geometría celular. Se pretende ver si esas diferencias tienen relación con las encontradas en las funciones matemáticas obtenidas previamente en células de ratas en hipoxia hipobárica. Para la obtención de cardiomiocitos, se trabajará con corazones de ratas Wistar Hokkaido anestesiadas con hidrato de cloral intraperitoneal. Se aplicará un protocolo de perfusión y se obtendrán los cardiomiocitos aislados. Se aplicarán series de pulsos de pinzamiento de potencial, comenzando cada uno de estos con una hiperpolarización (- 100 mV) y continuando con despolarizaciones crecientes según el protocolo para medir el flujo de corriente en la célula completa. Se medirán las corrientes iónicas por todos los canales de membrana (corrientes en célula entera). Se trabajará con el Axopatch 200 B, con p-clamp6 de Axon Instrument, para normalizar y sustraer los registros de la corriente iónica total y la obtenida después de agregado de la tetrodotoxina (TTX). La predicción mediante funciones matemáticas de la respuesta de los cardiomiocitos de ratas sometidas a dietas hiposódicas tiene interés fisiológico y posible aplicación clínica.

La transferencia directa, es una continuación de la formación de la alumna Belén Farías. Este trabajo comienza con el análisis de las funciones matématicas como predictoras de las respuestas de los cardiomiocitos yen posteriores estudios se quiere evaluar las diferencias y/o similitudes en la respuesta de las células a la dieta hiposódica con las correspondientes de las células de ratas hipertensas, con el mismo régimen alimentario, resultado con posible aplicación clínica.

Potential-dependent sodium channels (Na_v) have a determinant role in suprathreshold depolarization and action potential conduction in many excitable cells. In cardiac myocytes of rats fed with a low sodium diet sodio an increase in sodium current has been found. We will study cardiac myocytes from sodium-deprived rats with those from rats fed with a standard diet. Cells will be obtained from hearts from Wistar-Hokkaido rats (anesthesized with intraperitoneal chloral hydrate). Isolated hearts will be submitted to a perfusion protocol to isolate myocytes. Cells will be studied with voltage clamp pulses starting at hyperpolarizing values (- 100 mV) and continuing to depolarizing ones, while recording whole cell currents  by the patch-clamp technique, using Axopatch 200 B and pClamp 6 (Axon Instruments). Tetrodotoxin (TTX)-sensitive sodium current will be estimated by substraction between whole cell current before and after adding TTX. Currents will be normalized according to membrane capacity to make them independent of cell size. The mathematical function  describing the sodium current will be determined from the experimental results, by the method of function linearization. The results obtained in cells of both experimental groups will be compared to assess whether there are modifications in the constants of the function. Results will also be compared with previously obtained data similarly obtained from cardiac myocytes of rats submitted to chronic hypobaric hypoxia. Prediction of cardiac myocyte response from sodium-deprived rats through mathematical functions has physiological implicances and possible clinical application. 

1. Evaluar el efecto de inhibidores (amiloride)  y estimulantes (Aldosterona) en la absorción electrogénica de sodio por canales epiteliales (ENaC)  sobre el metabolismo energético del epitelio.
2. Cuantificar la estequiometría entre el consumo de oxígeno y la absorción de sodio y si hay variación ante el uso de inhibidores y estimulantes de la misma.
3. Aplicar Microscopía Confocal para observar con marcadores fluorescentes los canales  ENAc . en preparados experimentales.

1) Mejor conocimiento de la función intestinal en condiciones normales y patológicas.

2) Poder comprender la energética de la absorción de sodio en el colon humano .

3) Poder comprender su función de Regulador de los canales de cloruro apicales. ( A estudiar en otro proyecto de nuestro laboratorio).

4) Aportar datos importantes para la interpretación de trastornos clínicos y de su tratamiento, en particular constipación, colon irritable y diarrea secretoria.

5) Formar Recursos humanos en  investigación básica con conexión directa con la clínica quirúrgica y gastroenterológica.

1) Estudiar la relación entre el Consumo de oxígeno epitelial en colon humano in vitro y la absorción electrogénica de sodio a través de los canales ENaC en condiciones basales  2) Evaluar el efecto de inhibidores (amiloride)  y estimulantes (Aldosterona) en la absorción electrogénica de sodio por canales epiteliales (ENaC)  sobre el metabolismo energético del epitelio. 3) Determinar el consumo de oxígeno del epitelio luego de hipoxias agudas y posteriores reoxigenaciones, en condiciones basales y en presencia de inhibidores de los ENaC .4) Cuantificar la estequiometría entre el consumo de oxígeno y la absorción de sodio y si hay variación ante el uso de inhibidores y estimulantes de la misma. 5) Observar con marcadores fluorescentes del ENaC  por medio de la técnica de microscopía confocal.LÍNEA DE INVESTIGACIÓN: Está orientada a determinar la relación dependiente de la absorción electrogénica de sodio y el consumo  continuo de oxígeno .HIPOTESIS DE TRABAJO: Sobre las bases del conocimiento previo del tema, se postula que: 1) La absorción epitelial de sodio electrogénica es dependiente del aporte significativo de oxígeno. 2) La estimulación de la absorción electrogénica provoca incremento del consumo de oxígeno, 3) la inhibición de la absorción electrogénica provoca una disminución del mismo, 4.) La tasa de transporte electrogénico epitelial está asociada a la tasa del consumo de oxígeno, siendo mayor al principio del experimento y disminuyendo hacia el final. . METODOLOGÍA: Previo consentimiento informado y cumpliendo las normas establecidas en la versión vigente de la declaración de Helsinki, se obtendrán muestras viables de colon humano de especímenes quirúrgicos obtenidos en procedimientos terapéuticos y de biopsias de colon obtenidas con fines diagnósticos. Las muestras se trasladarán al laboratorio siguiendo un protocolo de bioseguridad para el manejo de material biológico. Los experimentos se realizarán en condiciones basales y en presencia de bloqueantes y estimulantes de la absorción de sodio.  La incubación  con aldosterona se realizará por el método de From y col. Se utilizará un concentración inicial de prueba de 10 nmol/L (Utilizado en colon de rata Saraví, Carra y col,2004). El epitelio se estudiará en cámaras modificadas: (Oximétrica) y microcámara Ussing : 1) para determinación del consumo de oxígeno en mucosa aislada, preservando el transporte iónico vectorial (medido como corriente de cortocircuito ) previo bloqueo del transporte de sodio y posterior al mismo y 2) Para realizar determinaciones en muestras de biopsias Se determinarán las modificaciones de las variables electrofisiológicas y el consumo de oxígeno en diferentes condiciones funcionales. Los resultados serán analizados, según corresponda, mediante tests t de Student, ANOVA o regresión simple. Producto a obtener: Profundizar el conocimiento de la fisiología gastrointestinal humana, así como de las alteraciones patológicas relacionadas y la formación de recursos humanos.Sistema de transferencia: Comunicaciones, conferencias, cursos, material electrónico (Web), artículos científicos en publicaciones periódicas con evaluación de pares.  Beneficios esperados: Mejor conocimiento de la función intestinal en condiciones normales y patológicas; bases racionales para la interpretación de trastornos clínicos y su tratamiento, en particular constipación, colon irritable y diarrea secretoria así también la formación de recursos humanos.

La transferencia se realizará mediante comunicaciones científicas en congresos, conferencias, cursos , informes online , artículos de divulgación y trabajos científicos en revistas especializadas con referato.

Los beneficiarios directos son los profesionales y estudiantes de ciencias de la salud, bearios y pasantes, que recibirán formación en investigación básica con vinculación clara y neta con la clínica gastroenterológica y con la cirugía intestinal.

Technical abstracts:

OBJECTIVES: 1) To study the relationship between the epithelial oxygen consumption in human colon in vitro and the electrogenic sodium absorption through the ENaC channels in basal conditions (2) Evaluate the effect of inhibitors (amiloride) and stimulants (aldosterone) in the electrogenic sodium absorption by epithelial channel (ENaC) on the energy metabolism of the epithelium. (3) Determine the oxygen consumption of the epithelium after acute hypoxia and subsequent reoxigenations, under basal conditions and in the presence of inhibitors of the ENaC. (4) Quantify the stoichiometry between oxygen consumption and absorption of sodium and if there is variation to the use of inhibitors and stimulants of the same. (5) See with fluorescent markers of the ENaC. In preparations used in the experiments . LINE OF INVESTIGATION: It is oriented to determine the dependent sodium electrogenic absorption and the continuous oxygen. consumption relationship. WORKING  HYPOTHESIS: On the basis of prior knowledge of the subject, it is postulated that: 1) the epithelial electrogenic sodium absorption is dependent on the significant contribution of oxygen. ((2) Stimulation of the electrogenic absorption causes increase in the consumption of oxygen .3) electrogenic absorption inhibition causes a decrease of the today.4) the rate of epithelial electrogenic transport is associated with the rate of oxygen consumption, being greater at the beginning of the experiment and decreasing towards the end. . METHODOLOGY: Prior informed consent and in accordance with standards set forth in the current version of the Helsinki Declaration, will be able samples of human colonic surgical specimens obtained in therapeutic procedures and colon biopsies obtained for diagnostic purposes. Samples will be transferred to the laboratory following a protocol of biosafety for the handling of biological material. The experiments will be carried out under basal conditions and in the presence of blockers and stimulants of the absorption of sodium. Incubation with aldosterone will be done by the method of From and col. with an initial concentration of test of 10 nmol/L (used in rat distal colon, Saravi, Carra and col, 2004). The epithelium will be studied in modified cameras: (reactivation) and microcamera Ussing: 1) for determination of the oxygen consumption in mucosa isolated, preserving vector ion transport (measured as short circuit current) before blocking the transport of sodium and posterior to it and 2) to make determinations in biopsy specimens shall be determined changes in electrophysiological variables and oxygen consumption. in different functional conditions. The results will be analyzed, as appropriate, by t-Student, ANOVA or regression tests. To obtain product: deepening knowledge of human gastrointestinal Physiology, as well as the related pathological changes and the formation of human resources. Transfer system: communications, conferences, courses, electronic material (Web), scientific articles in journals with peer assessment.  Expected benefits: better knowledge of intestinal function in normal and pathological conditions; rational basis for the interpretation of clinical disorders and their treatment, in particular constipation, irritable bowel syndrome, and secretory diarrhea as well the training of human resources.

Objetivo general

Contribuir al conocimiento de la acción de componentes bioactivos de alimentos funcionales regionales sobre procesos inmunitarios e inflamatorios mediados por mastocitos.

Objetivos específicos

1. Realizar estudios dosis-respuesta del efecto de principios bioactivos del aceite de oliva virgen (hidroxitirosol y oleuropeína) sobre la degranulación mastocitaria inducida por aditivos alimentarios activadores de mastocitos.
2. Realizar estudios tiempo-respuesta del efecto de principios bioactivos del aceite de oliva virgen (hidroxitirosol y oleuropeína) sobre la degranulación mastocitaria inducida por aditivos alimentarios activadores de mastocitos.

Contribución al avance del conocimiento

Llevando a cabo el plan de trabajo que aquí se plantea, se espera dilucidar nuevos mecanismos de acción de principios bioactivos aislados del aceite de oliva virgen y aportar al conocimiento de nuevas moléculas capaces de regular la activación de mastocitos. Estas contribuciones podrían representar nuevas estrategias en el tratamiento de patologías vinculadas con la activación mastocitaria como las reacciones alérgicas e inflamatorias.

Contribución a la formación de recursos humanos

Los recursos humanos que se formen adquirirán una novedosa capacitación en las diferentes áreas abordadas por el presente proyecto: farmacología, bioquímica, histología y biología celular. La formación se verá enriquecida con la interacción entre profesionales de distintas áreas de formación. Sin duda, la formación adquirida por estos recursos humanos permitirá generar nuevos temas de trabajo en un campo de elevado interés como es el desarrollo y conocimiento de los mecanismos de acción de nuevos fármacos obtenidos de productos regionales. Este proyecto está orientado a incrementar la formación de los integrantes del mismo y está especialmente destinado a la formación de un tesista doctoral (Lic. Andrés Persia).

Contribución al desarrollo socioeconómico del país

De disponerse en el futuro -a partir de la información que genere este trabajo- de nuevas drogas reguladoras de la activación de mastocitos, se producirá un efecto directo sobre el sector productivo, con todas las implicancias socioeconómicas que ello trae aparejado.

Transferencia de resultados

Por una parte, se espera el dictado de cursos de grado y posgrado, divulgación científica, presentaciones a congresos y publicaciones en revistas de difusión internacional. Por otra parte, el identificar una droga potencialmente apta para su uso requerirá, a la finalización de este proyecto, transferir el producto a sectores que aborden exhaustivos estudios de toxicidad. De superar esta barrera, se plantearían los siguientes pasos a dar en relación a la transferencia.

El presente plan de trabajo está relacionado con la investigación biomédica de productos regionales y plantea el estudio de la interacción entre mastocitos y principios bioactivos presentes en alimentos funcionales como el aceite de oliva. El aceite de oliva consta de una fracción insaponificable rica en compuestos fenólicos, como hidroxitirosol y oleuropeína. Si bien se ha demostrado el poder antioxidante de estos fenoles, hasta el momento no se conocen los efectos de estos compuestos sobre la activación de mastocitos inducida por aditivos alimentarios con propiedades alergénicas. Teniendo en cuenta que la activación mastocitaria incluye la producción de especies reactivas del oxígeno y que moléculas antioxidantes como flavonoides y dehidroleucodina inhiben la activación mastocitaria, consideramos probable que hidroxitirosol y oleuropeína sean capaces de inhibir la activación de mastocitos, disminuyendo así la producción de mediadores de la inflamación en respuesta a la injuria. Los resultados que se obtengan a partir de estas investigaciones permitirán conocer nuevos efectos y mecanismos biológicos de los principios bioactivos de alimentos funcionales regionales, relacionados con la protección frente a reacciones alérgicas e inflamatorias mediadas por mastocitos.

Se espera que los resultados del presente proyecto sean beneficiosos para:

- Establecer más claramente el papel del aceite de oliva virgen en la salud humana.

- Identificar mecanismos de acción de sus principios activos.

- Fundamentar las ventajas del aceite de oliva virgen y promover la industria local.

La transferencia se realizará mediante:

- Comunicaciones en reuniones científicas.

- Artículos en revistas con referato de difusión internacional.

- Conferencias y cursos de posgrado

- Conferencias y artículos de divulgación, dirigidos al público general (actividades de extensión).

Several bioactive principles from the phenolic virgin olive oil have antioxidant and anti-inflammatory activity. These substances include oleuropein and hydroxytyrosol. However, the effect of these compounds on mast cell activation induced by alimentary alergens remains unknown. Considering that: 1) oleuropein, hydroxytyrosol and oleocanthal exhibit antioxidant action, 2) stimulation of mast cells induces the production of reactive oxygen species and 3) diverse antioxidant molecules such as flavonoids and dehydroleucodine inhibit mast cell activation, the present study was designed with the goal of testing the hypothesis that components of the virgin olive oil non-saponifiable fraction (hydroxytirosol and oleuropein) inhibit alimentary allergen stimulated-inflammatory mediator release from mast cells. Results are expected to contribute to the characterization of the effects of bioactive principles from virgin olive oil and to provide a new approach in the treatment and prevention of mast cell-mediated allergic and inflammatory diseases.

Objetivo general

Contribuir al conocimiento de la etiología y desarrollo de nuevas estrategias diagnósticas y terapéuticas para la esclerosis múltiple.

Objetivos específicos

1. Analizar los niveles plasmáticos de mediadores mastocitarios preformados (histamina, β-hexosaminidasa, triptasa y quimasa), de mediadores mastocitarios lipídicos (prostaglandinas D₂) y de citoquinas mastocitarias (factor de necrosis tumoral alfa: TNF-α) en personas sanas y en pacientes con esclerosis múltiple provenientes de diferentes regiones de la provincia de Mendoza.

2. Determinar la acción de lactonas α,β-insaturadas sobre la degranulación de  mastocitos inducida por proteína básica de la mielina.

Contribución al avance del conocimiento

Llevando a cabo el plan de trabajo que aquí se plantea, se espera aportar al conocimiento de la etiología y desarrollo de nuevos marcadores diagnósticos y nuevos fármacos capaces de contribuir al tratamiento efectivo de la esclerosis múltiple.

Contribución a la formación de recursos humanos

Los recursos humanos que se formen adquirirán entrenamiento en las diferentes áreas abordadas por el presente proyecto. La formación adquirida por estos recursos humanos permitirá generar nuevos temas de trabajo en un campo de elevado interés como es el desarrollo de nuevos fármacos obtenidos a partir de productos regionales. La formación de recursos humanos que contempla este proyecto está orientada a incrementar la formación de los integrantes del mismo y está especialmente destinada a la formación de un tesista doctoral (Lic. Andrés Persia) y alumnos de la Carrera de Medicina que sean seleccionados para participar en el proyecto.

Contribución al desarrollo socioeconómico del país

De disponerse en el futuro -a partir de la información que genere este trabajo- de nuevos marcadores diagnósticos y de nuevas drogas para el tratamiento de la esclerosis múltiple, se producirá un efecto directo sobre el sector productivo, con todas las implicancias socioeconómicas que ello trae aparejado.

Transferencia de resultados

Por una parte, se espera presentaciones a congresos y publicaciones en revistas de difusión internacional. Por otra parte, el identificar drogas potencialmente aptas para su uso en humanos, requerirá iniciar las gestiones para transferir los productos a la industria farmacéutica.

La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria y desmielinizante del sistema nervioso central (SNC). La etiología es desconocida y hasta el momento no se dispone de terapias curativas o preventivas para la enfermedad. Investigaciones científicas de la última década han demostrado la activa participación de los mastocitos, células del sistema inmune, en la fisiopatología de la enfermedad. El presente proyecto es continuación de los proyectos anteriores y propone: 1) analizar los niveles de diferentes mediadores de la inflamación producidos por los mastocitos en sangre de pacientes con esclerosis múltiple provenientes de distintas regiones geográficas de Mendoza, a fin de determinar un perfil de mediadores en estos pacientes y 2) determinar la acción de principios activos aislados en nuestro laboratorio a partir de vegetales sobre los mecanismos responsables de esta patología. Se espera contribuir al conocimiento de la etiología, diagnóstico y tratamiento de la esclerosis múltiple.

De disponerse en el futuro, a partir de la información que genere este trabajo y de las obtenidas con anterioridad, de nuevos marcadores diagnósticos y de nuevas drogas con las propiedades buscadas, se producirá un efecto directo sobre el sector productivo regional y nacional, con todas las implicancias socio-económicas que ello trae aparejado.

Esto podrá concretarse a través de patentes que puedan trasladarse a laboratorios farmacéuticos.

Entendemos que esto será factible a través de una buena gestión de transferencia, por lo que se requerirá asesoramiento de las instituciones que han apoyado al mismo.

Beneficiaria directa es la población que padece patologías desmielinizantes como la esclerosis múltiple. Beneficiarias indirectas son las empresas que podrían trasladar el producto inicial del laboratorio a nivel industrial.

Con respecto a la transferencia, el grupo de la Dra. Penissi ha iniciado los trámites correspondientes. La Oficina de Vinculación Tecnológica de CONICET ha gestionado el patentamiento de un método original como control de calidad para certificar la actividad biológica de dehidroleucodina en extractos secos y húmedos de la planta Artemisia douglasiana Besser. Patente en trámite ante la Dirección de Vinculación Científico Tecnológica de CONICET: Procedimiento analítico de cromatografía líquida de alta resolución para detectar y cuantificar la lactona sesquiterpénica dehidroleucodina en extractos secos y húmedos de especies vegetales. Solicitada por: Penissi AB y cols. Nº de Acta otorgado por el INPI (Instituto Nacional de Propiedad Industrial): P040101420. Resumen publicado en el Boletín de Patentes del INPI (Boletín Nº 301, 24 de agosto de 2005, págs. 9 y 10).

Multiple sclerosis (MS) is a demyelinating disease of the central nervous system (CNS) leading to severe disability mainly in young adults. Environmental and genetic factors are involved in MS development. However, MS ethiology remains nuclear and current therapies are not curative. MS is mediated by CNS infiltration of Th1 CD4⁺ cells. A growing body of evidence suggests that mast cells play an active role in the pathophysiology of the disease. In previous work we have demonstrated that dehydroleucodine (sesquiterpene lactone isolated from Artemisia douglasiana Besser, DhL) and xanthatine (sesquiterpene isolated from Xanthium cavanillesii Schouw, Xt) inhibit human and rodent mast cell activation. Morover, we have demonstrated that DhL and Xt inhibit structural myelin changes induced by mast cell activation and that patients with MS exhibit higher levels of histamine and tryptase than controls in cerebrospinal fluid. The present study was designed with the goal of testing the hypothesis that DhL and Xt inhibit, in an in vitro model, mast cell activation induced by myelin basic protein. Mast cells mediators (preformes, lipidic and cytokines) will be quantified in the blood of MS patients from Mendoza. The concept that mast cells are critical for the outcome of the disease could have an important impact on the development of new therapeutic approaches.