06/J280
Regulación hormonal de la expresión y localización de proteínas que participan en la secreción epididimaria. Rutas alternativas para la secreción de enzimas en epidídimo de mamíferos
Hormonal regulation on expression and distribution of proteins involved in epidiymal secretion
Director: SOSA ESCUDERO, Miguel Ángel
Correo electrónico: msosa@fcm.uncu.edu.ar
Co-Director: GARGIULO, Ángel Pascual
Integrantes: CARVELLI, Lorena; BORGONOVO, Janina; BANNOUD, Nadia; LOZANO, Esteban; BARRERA, Patricia; SARTOR, Tirso
Resumen Técnico: Este proyecto es continuidad de previos resultados obtenidos en nuestro laboratorio y está orientado a estudiar las bases moleculares de la regulación hormonal en epidídimo de mamíferos. Se propone caracterizar la maquinaria secretoria del epitelio epididimario que permite liberar enzimas lisosomales al lúmen del órgano y estudiar el efecto de cambios hormonales sobre la expresión y localización de las proteínas que forman esa maquinaria. El proyecto se concentrará fundamentalmente en el estudio de la expresión y localización de proteínas receptoras que regulan el tránsito de enzimas lisosomales sobre la hipótesis de que habría vías alternativas mediadas por prosaposinas para proteasas como las catepsinas D. Será llevado a cabo en ratas y en cultivos primarios o líneas celulares epididimarias. En los animales se estudiará la expresión y distribución de receptores a manosa-6-fosfato, prosaposinas y su proteína receptora sortilina cuando hay deprivación de andrógenos por castración. En los cultivos de células epididimarias nos interesa estudiar (por inmuno-fluorescencia o fraccionamiento subcelular) si hay cambios en la expresión y distribución de estas proteínas cuando se someten a cambios hormonales. Sobre la base de que catepsina D es liberada como proenzima, nos interesa particularmente conocer si el fenómeno es mediado por prosaposina-sortilina, llevando a cabo ensayos de co-inmunoprecipitación y también a través del efecto que pueda tener la sobreexpresión de prosaposina. Con estos experimentos estamos tratando de explicar las bases moleculares de la secreción epididimaria que justifiquen algunas disfunciones del tracto reproductor masculino en mamíferos por efecto de los cambios hormonales.
Summary: This project is based on previous results from our laboratory and it is focussed to study the molecular bases of the hormonal regulation on mammalian epididymis. We propose to characterize the secretory machinery that permits the release of lysosomal enzymes to the epididymal lumen, and to study the effects of hormonal changes on expression and subcellular distribution of proteins involved in that secretion. The study will point to expression and distribution of receptors that regulate the transit of lysosomal enzymes, from the hypothesis that prosaposin- mediated routes regulate the transport of procathepsin D in epididymis. The project will be carried out on rats and cultures of epididymal cells (primary cultures or epididymal cell lines). Expression and distribution of mannose-6-phosphate receptors, prosaposins, and its receptor protein sortilin will be studied in animals deprived of androgens by castration. In cultures of epididymal cells we propose to study (by immunofluorescence of cell fractionation) if changes in expression or distribution of those proteins occur when the cells are submited to hormonal changes. As cathepsin D is released as proenzyme, we are particularly interested in knowing if the phenomenon is mediated by prosaposin-sortilin system, as occur in other cell types. In this regard, co-immunoprecipitation assays, and prosaposin overexpression experiments will be carried out. From the results of this project we expect to explain some molecular bases of the epididymal secretion that justify some disfunctions on the male reproductive tract caused by hormonal changes.