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Identificación de cultivares de ajo (Allium sativum l.) mediante el empleo de microsatélites

Identification of garlic cultivars (Allium sativum l.) using microsatellites

 

Director: GARCÍA LAMPASONA, Sandra Claudia

Correo electrónico: sgarcia@fca.uncu.edu.ar

 

Co-Director: MASUELLI, Ricardo Williams

 

Integrantes: BURBA, José Luis; MASUELLI, Ricardo; FERRER, María Soledad

 

Resumen Técnico: En la última década se ha producido un enorme desarrollo de las técnicas moleculares que permiten detectar diferencias en el genoma de los seres vivos, denominadas genéricamente “DNA fingerprinting” las que permiten generar un sistema práctico y válido legalmente para la identificación de cultivares. Sin embargo, los reportes concernientes a marcadores moleculares en ajo (Allium sativum L.) son bastante escasos. Las especies con un genoma muy extenso, tal como es el caso de esta especie, con un contenido de ADN 2C de 32.7 pg requieren de un análisis molecular muy laborioso. Desde 1998, en el Laboratorio de Biología Molecular de la FCA, comenzamos a trabajar con marcadores moleculares RAPD (Random Amplified Polymorphic DAN) y AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) para caracterizar el germoplasma de ajo de la colección activa de la E.E.A. La Consulta INTA. Si bien los resultados fueron satisfactorios, estos marcadores resultaron muy exigentes en mano de obra y demandaron el empleo de un gran número de combinaciones de primers para detectar polimorfismo entre clones genéticamente muy cercanos. A partir de estos resultados y con el objetivo de subsanar estos inconvenientes comenzamos a desarrollar marcadores SCARs los que ya se encuentran en una etapa muy avanzada y sólo resta diseñar primers  y probarlos con los materiales de la colección. En este sentido, en este nuevo proyecto proponemos emplear  marcadores microsatélites o SSR (Simple Sequence Repeat) ya que representan una de las técnicas más apropiadas para estudiar el polimorfismo entre secuencias de ADN. A pesar de que existen disponibles pocas secuencias parciales de ajo, recientemente se ha publicado un trabajo que reporta SSR en cebolla. A partir de ESTs los autores han diseñado primers para cebolla que permitirían ser aplicados a una especie cercana como es el caso del ajo, posibilitando la generación de marcadores polimórficos La desventaja que presenta esta aproximación es que su transferibilidad puede no ser del 100% cuando se emplea una especie cercana como fuente de ESTs.

 

Summary: In the last decade an enormous development of the molecular techniques has been produced that permit to detect differences in the genome of the alive beings, called generic "DNA fingerprinting" that permit to generate a valid and practical system legally for the identification of cultivares. Nevertheless, the reports that refer to molecular scoreboards in garlic (Allium sativum L.) are quite scarce. The species with a very extensive genome, just as is the case of garlic, with a 2C DNA content of 32.7 pg require of a very laborious molecular analysis. Since 1998, at the Laboratory of Molecular Biology of the FCA, we begin to work with RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) and AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) to characterize the germoplasma of garlic of the active collection of the EEA La Consulta INTA. Though the results were satisfactory, these molecular markers turned out to be very exacting in labor and they demanded the employment of a great number of combinations of primers to detect polymorphism among genetically nearby clones.  From these results and with the objective to rectify these objections we begin to develop SCARs These molecular markers are very advanced phase and now we are going to design primers and to test them with the materials of the collection. In this sense, in this new project we propose to employ another kind of molecular markers called microsatellites or SSR (Simple Sequence Repeat) since represent one of the most appropriate techniques to study the polymorphism among sequences of DNA.  In spite of the fact that available few partial sequences of garlic exist, recently a work has been published that reports SSR in onion.  From ESTs some authors have designed primers for onion that would permit to be applied to a nearby species as is the case of the garlic, enabling the generation of polymorphic molecular markers.