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El óxido nítrico modula la apoptosis durante la obstrucción ureteral unilateral neonatal

Nitric oxide modulates apoptosis during the unilateral ureteral obstruction neonatal

 

Director: MANUCHA, Walter

Correo electrónico: wmanucha@fcm.uncu.edu.ar

 

Co-Director: GARRAMUÑO de VALLÉS, Patricia Paula

 

Integrantes: CACCIAMANI, Valeria; GONZÁLEZ de OJEDA, Susana; ABUD, María Angélica

 Resumen Técnico: El desarrollo fetal tardío, la adaptación a la vida extrauterina y la propia infancia son un tiempo de notables cambios de la función renal y por lo tanto la nefropatía obstructiva es una de las principales causas de insuficiencia renal durante la infancia. El riñón obstruido presenta un crecimiento pobre, vasoconstricción, disminución en la función renal, apoptosis y fibrosis tubular. Debido a la diversidad de resultados en la literatura respecto a la participación de la bio-molécula denominada óxido nítrico en los mecanismos que conducen a la apoptosis de distintos grupos celulares más la consideración de recientes estudios que justifican un papel fundamental en la nefrogénesis y en su respuesta a la injuria, nos proponemos establecer en el modelo de obstrucción ureteral unilateral neonatal, donde ha sido destacada la importancia de la muerte celular programada como evento fundamental responsable de la pérdida en la funcionalidad renal, el papel modulador del óxido nítrico y los posibles intermediarios bioquímico-moleculares relacionados a la apoptosis propia del modelo.  Los resultados nos permitirán establecer, el grado de compromiso de la vía mitocondrial apoptótica y la injuria renal durante la obstrucción ureteral unilateral neonatal “in vivo” e “in vitro”. Por otro lado, podremos estudiar la participación del óxido nítrico y su mecanística apoptótica en este modelo. Dichos resultados serán presentados en reuniones científicas de la especialidad y en otras de carácter multidisciplinarios (regional, nacional así como internacional). También serán enviados a revistas científicas para su consideración a publicación. En resumen, este proyecto nos permitirá actualizar conocimientos sobre el tema en discusión, así también como capacitar en técnicas y metodologías de investigación a nuevos recursos humanos como pasantes y becarios para que del mismo se propongan nuevas líneas a seguir.      

 

Summary: Obstructive nephropathy is a major cause of renal insufficiency in infancy and childhood. The functional integrity of the kidney depends on the normal development as well as on the physiological cell turnover, mechanisms determined by the apoptosis. The messenger diffusible molecule NO takes part in the kidney regulating high quantity of physiological processes: vasodilation, inflammation, immune response, cellular proliferation and apoptosis. Nitric oxide (NO) could be considered as a bifunctional regulator of apoptosis. The cytotoxic capacity of NO has been confirmed in numerous systems using diverse cell targets. NO cytotoxicity has been the topic of intense study, however, a potent antiapoptotic activity of NO has also been studied. Wistar Kyoto neonatal rats will be subject to sham operation or complete unilateral ureteral obstruction (UUO) within the first 48 hours of life, the left ureter will be tie. After 5 and 14 days, animals will be sacrificed and their control and obstructed kidneys will be removed, and weighed. In these homogenate cortexes we will determine: iNOS, Bax, BcL2, HSP70 and caspase 3 expression, nitrites, caspase 3 and NADPH oxidase activity.  Measurement of nitrites, NADPH oxidase activity, caspase 3 activity, HSP70, Bax and BcL2 expression in kidney homogenates after 14 days of obstruction in the presence of NO donor or NO inhibitor will be performed. The same measurements will be performed after blocking HSP70 protein expression. The involvement of NO in the intracellular mitochondrial apoptotic pathway, establishing the interaction of NO and HSP70 on apoptosis induction in neonatal obstructive nephropathy will be study in the present project.