06/J210

 

Inducción a apoptosis en nefropatía obstructiva

Apoptosis induction in obstructive nephropathy

 

Director: GARRAMUÑO DE VALLÉS, Patricia Paula

E-mail: pvalles@fcm.uncu.edu.ar

 

Integrantes: MANUCHA, Walter; CARRIZO, Liliana; RUETE, Celeste

 

Resumen Técnico

La nefropatía obstructiva es una de las causas primarias de fallo renal crónico en niños. A la progresiva infiltración intersticial característica de la nefropatía obstructiva del adulto se incluye en el riñón inmaduro, el defecto en el desarrollo y en el crecimiento renal que resulta en una reducción de la proliferación celular y en un incremento de la apoptosis. En las células epiteliales tubulares, la apoptosis es la causa del mecanismo de atrofia tubular que, unido a la infiltración intersticial, conduce al proceso de fibrosis.La obstrucción renal neonatal induce una temprana y sostenida vasoconstricción por activación del sistema renina-angiotensina, con persistencia del patrón fetal vascular de distribución de renina.Ha sido demostrado que la Angiotensina induce apoptosis celular a través de receptores AT2, mientras que la activación de receptores AT1 conduce a laproliferación celular. Los eventos moleculares presentes en apoptosis no han sido totalmente clarificados hasta el presente. La injuria mecánica en obstrucción, inductor de apoptosis, incluye el incremento de presión hidrostática intraluminal y dilatación tubular, en especial en segmentos distales. La señal mecánica producida por la obstrucción ureteral unilateral puede ser el "stretch" que resulta en un estiramiento axial de las células tubulares. La activación de la isoforma NHE1 del intercambiador Na+/H+ es un importante componente del sistema que regula el incremento de volumen celular, resultando en un influjo de Na+ y expansión de volumen citoplasmático. La simultánea extrusión de H+ conduce a la alcalinización intracelular. NHE1 está expresada ubicuamente en la membrana basolateral de túbulos proximales y colectores medulares (OMCDs e IMCDs) y su activación se ha relacionado con funciones vitales tales como la regulación de volumen y contribución a la regulación de pH citosólico. Evaluaremos en obstrucción unilateral renal neonatal experimental : a-La participación de la injuria mecánica en el proceso de inducción de apoptosis y la regulación asociada al intercambiador Na+/H+, isoforma NHE1, en intervalos crecientes de tiempo post- obstrucción Asimismo evaluaremos la inducción de apoptosis por via mitocondrrial a través de la expresión de miembros de la familia de BcL2(genes pro y antiapoptóticos) y la expresión postranscripcional de caspasa 3.

 .b-Efecto de la administración de inhibidores de receptores AT1 de Angiotensina II sobre el proceso de apoptosis evaluando la participación de NHE1 mediante evaluación de su expresión a nivel transcripcional y expresión de proteína

.c- Evaluación de la participación del intercambiador NHE1 a través de la regulación del pH intracelular en la inducción de apoptosis en obstrucción .

 

Summary

Congenital obstructive nephropathy is one of the primary causes of renal failure in infants and children.The developing kidney is far more susceptible to injury resulting from chronic urinary obstruction in relation to adult kidneys. Whereas obstructive nephropathy in the adult is characterized by progressive interstitial infiltration by mononuclear cells, in the maturing kidney impaired renal growth and development that results both from reduced cellular proliferation and increased apoptosis are also included Early and sustained vasoconstriction that results from activation of the renin -angiotensin system have been shown in neonatal obstruction.Molecular events that lead to apoptosis in obstruction has not been totally clarified until now. Apoptosis appears to play a role in the genesis of tubular atrophy, although the initial stimulus for apoptosis has not been defined. Several stimuli have been involved in the apoptosis process in obstruction. Mechanical injury in obstruction includes increased intraluminal hydrostatic pressure and consecutive tubular dilatation in distal nephron segments. Apoptotic cell shrinkage is achieved by the net loss of intracellular osmoles and H2O, as well as by caspase-dependent proteolysis of housekeeping and structural proteins, which mediates cell disassembly. Activation of the Na+/H+ exchanger isoform NHE1is involved on the regulation of cell volumen . The first and second part of the project has been designed to evaluate in an experimental model of neonatal unilareal ureteral obstruction, the role of mechanical injury in the apoptosis induction The regulatory role of NHE1 isoform 1 in apoptosis process and it association with caspase 3,involved in the transduction of external signal to the nucleus .The effect of AT1 inhibition in apoptosis and NHE1 expression in obstruction will be studied. The third part of this project will be performed to evaluate whether NHE1 exchanger through the regulation of intracellular pH is involved in the apoptosis induction in neonatal obstructed epithelial cells.