06/J183

Análisis gráficos y estadísticos de los registros de corriente total y canal único en cardiomiocitos aislados de rata adulta normal y sometida crónicamente a hipoxia hipobárica mediante la técnica de Patch-Clamp
Graphical and statistical analyses of the recordings of total current and single canal in isolated cardiomyocites of normal adult rat chronically subjected to hypobaric hypoxia by the Patch-Clamp technique


Director: SALDEÑA, Teobaldo Antonio

Email: patchuncuyo@yahoo.com.ar

Codirector: SARAVÍ, Fernando Daniel

Integrantes:ITUARTE, Leonor – VIERA, Teresa – IBAÑEZ, Jorge

Se emplearán cardiomicitos aislados de corazón de ratas adultas Wistar-Hokkaido. Bajo anestesia con éter se extraerá el corazón y se lo disecará con solución Ringer oxígenada a 4ºC. La preparación luego se perfundirá en un equipo Lagendorff. El protocolo de aislación de cardiomiocitos consiste en perfusión del corazón con solución Ringer enriquecida con 1mM de Ca++, posteriormente solución Rnger con EGTA y luego Ringer con  collagenasa. Se obtendrán  las primeras células al disgregar mecánicamente el corazón sumergido en solución BK (restauradora de la membrana celular y composición del líquido intracelular)  en la que permanecen alrededor de 30 minutos, luego se recalcificarán y sembrarán en placas de Petris de plástico. Las células aisladas se estudiarán  en configuración “whole-cell” y “cell-attached patch” con un amplificador.  Los datos se obtendrán usando un  digitalizador de datos y posteriormente se analizarán con el soft pclamp6. Se determinarán los parámetros electrofisiológicos, se clampeará la corriente para determinar el potencial de membrana  respecto del baño y se darán pulsos clampeando el potencial para obtener el valor de la corriente iónica total a través  de la membrana para distintos protocolos de pulso.