06/J183
Análisis gráficos y estadísticos de los registros de corriente total y canal
único en cardiomiocitos aislados de rata adulta normal
y sometida crónicamente a hipoxia hipobárica mediante la técnica de
Patch-Clamp
Graphical and statistical analyses of the recordings of total current and single
canal in isolated cardiomyocites of normal adult rat chronically subjected
to hypobaric hypoxia by the Patch-Clamp technique
Director: SALDEÑA, Teobaldo Antonio
Email: patchuncuyo@yahoo.com.ar
Codirector: SARAVÍ, Fernando Daniel
Integrantes:ITUARTE, Leonor – VIERA, Teresa – IBAÑEZ, JorgeSe emplearán cardiomicitos aislados de corazón de ratas adultas Wistar-Hokkaido. Bajo anestesia con éter se extraerá el corazón y se lo disecará con solución Ringer oxígenada a 4ºC. La preparación luego se perfundirá en un equipo Lagendorff. El protocolo de aislación de cardiomiocitos consiste en perfusión del corazón con solución Ringer enriquecida con 1mM de Ca++, posteriormente solución Rnger con EGTA y luego Ringer con collagenasa. Se obtendrán las primeras células al disgregar mecánicamente el corazón sumergido en solución BK (restauradora de la membrana celular y composición del líquido intracelular) en la que permanecen alrededor de 30 minutos, luego se recalcificarán y sembrarán en placas de Petris de plástico. Las células aisladas se estudiarán en configuración “whole-cell” y “cell-attached patch” con un amplificador. Los datos se obtendrán usando un digitalizador de datos y posteriormente se analizarán con el soft pclamp6. Se determinarán los parámetros electrofisiológicos, se clampeará la corriente para determinar el potencial de membrana respecto del baño y se darán pulsos clampeando el potencial para obtener el valor de la corriente iónica total a través de la membrana para distintos protocolos de pulso.