06/J296

Aislamiento de Acanthamoeba a partir de muestras ambientales. Importancia de la aplicación de técnicas moleculares que confirmen la identificación  realizada por caracterización morfológica.
Acantahamoeba isolation from environmental samples. Importance of molecular techniques application to confirm the identification by morphological characterization.

Director: CARRIZO, Liliana Carmen
Correo Electrónico: lcarrizo@fcm.uncu.edu.ar

Co-Director: SALOMON, María Cristina

Integrantes: TONELLI, Rosa Lydia; LUCCHESI, Ornella; SANTOS, Gisella.

Resumen Técnico: El género Acanthamoeba comprende protozoos ubicuos de vida libre. Su presencia en suelo, aire y aguas dulces de superficie, como aguas de ríos, fuentes, lagos, aguas de abasto público y aguas de piscinas, representa un riesgo para la salud humana, ya que el contacto con éstas es la principal vía de contagio. Las patologías provocadas por Acanthamoeba comprenden: Encefalitis Granulomatosa Amebiana, Dermatitis Acanthamebiana y Queratitis Acanthamebiana. La incidencia de queratitis producida por Acanthamoeba spp. ha aumentado en los últimos años. El diagnóstico precoz y la instauración rápida del tratamiento son importantes para una favorable evolución de la enfermedad, ya que las lesiones provocadas por el parásito no revierten. Dado que el uso de criterios morfológicos resulta insuficiente para la identificación de este parásito, son necesarios el desarrollo y aplicación de métodos moleculares para la detección e identificación de elementos aislados de muestras clínicas o ambientales; apuntando a optimizar el diagnóstico, tratamiento y profilaxis de las infecciones causadas por Acanthamoebas spp. Objetivos específicos: 1. Recuperar, aislar e identificar morfológicamente Acanthamoeba spp. mediante cultivo de muestras obtenidas a partir de diversas fuentes ambientales. 2. Confirmar mediante el uso de técnicas de PCR, la identificación morfológica previamente realizada de Acanthamoeba spp. 3. Determinar la importancia de las distintas muestras ambientales como potenciales fuentes de infección. 4. Comunicar los resultados obtenidos a la comunidad científica mediante presentaciones en congresos y/o publicaciones en revistas científicas. Hipótesis de Trabajo: 1. Especies de Acanthamoebas asociadas a infecciones en humanos, se encuentran presentes en  diferentes muestras ambientales  de la provincia de Mendoza. 2. La identificación de Acanthamoebas mediante técnicas moleculares como la PCR nos permitirá confirmar la identificación realizada a través de la caracterización morfológica del parásito. Metodología: Nos proponemos aislar Acanthamoeba a partir de muestras ambientales de diferente origen aplicando los siguientes procedimientos: recolección de muestras ambientales, concentración, cultivo xénico, cultivo axénico y evidenciar su presencia mediante observaciones microscópicas de los elementos aislados desde los cultivos y coloración con hematoxilina-eosina. Finalmente, confirmar la identificación realizada por caracterización morfológica mediante técnica de PCR, utilizando primers específicos JDP1 y JDP2. Resultados esperados: En nuestro laboratorio, al presente hemos logrado recuperar e identificar morfológicamente Acanthamoeba spp. en un 10 % de las muestras de suelos analizadas a partir del cultivo xénico. Teniendo en cuenta la amplia distribución de Acanthamoeba en el medio ambiente, además, considerando el significativo número de casos de queratitis asociadas a este parásito diagnosticados en nuestra provincia; esperamos aislar e identificar esta ameba a partir de  una importante cantidad de muestras ambientales. Sistema de Transferencia y Beneficio: La difusión de nuestros resultados ante la comunidad científica nos permitirá advertir al personal de la salud acerca de la amplia distribución de este parásito en nuestro ambiente, como así también destacar la necesidad de aplicar métodos  moleculares para el diagnóstico adecuado, especialmente, de la queratitis provocada por Acanthamoeba. Además, manifestar la importancia de implementar medidas de prevención acerca de la trascendencia de estas patologías, con el fin de disminuir la incidencia de estas infecciones y  mejorar la posibilidad de establecer un diagnóstico específico y precoz, dado que de ello depende el pronóstico de la enfermedad. La aplicación de estas medidas de prevención beneficiará a la población en general, y en especial a usuarios de lentes de contacto, a las personas que desarrollan actividades acuáticas tanto laborales como deportivas y aquellas personas que trabajan en estrecho contacto con la tierra.

Summary: The Acanthamoeba genus includes free living ubiquitous protozoa. Its presence in soil, air and superficial fresh water, like river water, fountains, lakes, public water supply and piscine water, represents a risk factor for human health, since the contact with them is the main infection via. Pathologies induced by Acanthamoeba include: Granulomatous Amebic Encephalitis, Cutaneous Acanthamebiasis and Amoebic Keratitis. The Acanthamoeba Keratitis incidence has increased in recent years. The early diagnostic and the rapid establishment of treatment is important for a favourable disease evolution, since the lesions caused by the parasite don’t revert. For the reason that parasitic identification using morphologic criteria  is insufficient, is necessary the development and application of molecular techniques for the detection and identification  of elements isolates from environmental and clinic samples; pointing to optimize Acanthamoeba infections’ diagnostic, treatment and prophylaxis. At the present, in our laboratory, we have achieved to recover and identify morphologically Acanthamoeba spp. in a 10% of soil samples analized from xenic culture. Taking into consideration the Acanthamoeba wide distribution in the environment, moreover, considering the significative number of keratitis cases associates to this parasite diagnosticated in our province, we expect to isolate and identify this amoeba from an important amount of environmental samples. Specific objectives: 1. To recover, isolate and identify morphologically Acanthamoeba spp. by culture of environmental samples. 2. To confirm by PCR technique the Acanthamoeba identification done by morphologic characterization. 3. To determine the importance of different environmental samples as potential infection sources. 4. To communicate the obtained results to the scientific community by congress presentations and/or scientist publications. To this end, we propose to isolate Acanthamoeba from different origin environmental samples applying the next procedures: environmental samples collection, concentration, xenic culture, axenic culture and to display the amoeba presence by microscopic observation of elements isolated from culture and hematoxiline-eosine coloration. Finally, to confirm the identification done by morphologic characterization by PCR using JDP1 and JDP2 specifics primers. The diffusion of our results to the scientist community will allow to warn the health staff about the parasite wide distribution in our environment, as well as to empathize the necessity of applying molecular techniques for an adequate diagnostic, especially, of Acanthamoeba keratitis. Moreover, to manifest the importance of performing prevention procedures to decrease infections incidence and improve the possibility of set up an early and specific diagnostic, since the disease prognosis depends on it. The application of prevention procedures will benefit to the general population, especially, contact lenses users, people that practice labouring and sporting aquatic activities and people who work in close contact with soil.