06/J339
La secreción de enzimas en epidídimo de mamíferos. Bases moleculares y su regulación hormonal.
Secretion of enzymes in mammalian epididymis. Molecular bases and hormonal regulation.
Director: SOSA ESCUDERO, Miguel Ángel
Correo Electrónico: msosa@fcm.uncu.edu.ar
Co-Director: GARGIULO, Pascual Ángel
Integrantes: CARVELLI, Lorena Flavia; BARRERA, Patricia; AGUILERA, Carolina; BORGONOVO, Janina; BANNOUD, Nadia; SARTOR, Tirso.
Resumen Técnico: Este proyecto está orientado al estudio del mecanismo de secreción de enzimas hidrolíticas por el epitelio epididimario y las moléculas que participan en este fenómeno. Estas moléculas podrían ser receptores tradicionales, como los receptores a manosa-6-fosfato (MPRs), o se pueden proponer vías alternativas para algunas enzimas (mediadas por sortilina/prosaposina). Dado que la integridad y funcionalidad del epidídimo son hormono-dependientes, proponemos estudiar la expresión y localización de enzimas y receptores en epidídimos o células epididimarias sometidos a cambios hormonales. En animales se estudiará las variaciones que puedan existir en la compartimentalización de enzimas y receptores por efecto de la castración, hemicastración o tratamientos con drogas anti-androgénicas. En cultivos de células epididimarias se propone estudiar la incidencia de hormonas sobre la expresión y distribución de MPRs, sortilina/prosaposina, y enzimas hidrolíticas de tipo glicosidasa y proteolíticas de la familia de las catepsinas. Asimismo, la incidencia de prosaposina/sortilina en la distribución y procesamiento de catepsina D y en el comportamiento de MPRs serán estudiados en células con baja expresión de sortilina (“knock-down”). En ambos modelos experimentales (epidídimos o células epididimarias cultivadas) los efectos sobre la secreción epididimaria serán estudiadas por Western blot, RT-PCR, o por medición de actividad enzimática (espectrofluorometría). En células epididimarias, diferentes combinaciones de hormonas esteroidales (testosterona, estradiol, y derivados) serán agregadas a los medios de cultivos y la distribución de las diferentes proteínas será estudiada por inmunofluorescencia o por Western blot de fracciones subcelulares separadas en gradientes de percoll. Se pretende dilucidar si hay una regulación hormonal de la/s via/s de transporte intracelular, del procesamiento y distribución de enzimas en epidídimo, que puedan explicar disfunciones relacionadas con la maduración de los espermatozoides en epidídimo.